Способ определения устойчивости подсолнечника к фузариозуПатент на изобретение №: 2206981 Автор: Антонова Т.С., Саукова С.Л. Патентообладатель: Государственное научное учреждение РАСХН Всероссийский научно-исследовательский институт масличных культур им. В.С. Пустовойта Дата публикации: 27 Июня, 2003 Начало действия патента: 10 Апреля, 2001 Адрес для переписки: 350038, г.Краснодар, ул. Филатова, 17, ВНИИМК, патентная группа Изобретение предназначено для использования в области сельского хозяйства. Способ включает приготовление патогена, проращивание семян во влажной среде и высаживание двухдневных проростков на плоское основание с отверстиями, размещаемое на емкости с патогеном. Инокуляцию проводят путем выдерживания проростков в контакте с патогеном, затем осуществляют визуальную оценку иммунологической реакции растения. При этом в качестве патогена используют 15-дневную культуру гриба фузариума, выращенную в чашках Петри. В качестве плоского основания с отверстиями для высаживания в них двухдневных проростков используют отперфорированные чашки Петри. Инокуляции подвергают двухдневные проростки в течение 6 ч, после чего зараженные проростки выдерживают в контакте со стерильной водой во влажной камере в течение 3 дней. Визуальную оценку иммунологической реакции растения осуществляют по распространению поражения на корневую шейку и гипокотиль. Способ позволяет упростить операции приготовления патогена и заражения им проростков, защитить работников от вредного воздействия токсинов и снизить затраты. ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУИзобретение относится к области сельского хозяйства и может быть использовано в селекции подсолнечника, в частности на улучшение неспецифического иммунитета корневой системы. По нашим данным неспецифический антимикробный иммунитет корневой системы проявляется в виде раневой реакции коры в ответ на любое повреждение, в том числе и патогенами. Патогены, вызывающие фузариоз и другие гнили, паразитируют в сосудистой системе растения и попадают они туда, преодолевая изначально сопротивление клеток эпидермиса и коры корня. Поэтому очень актуальной является разработка лабораторного метода оценки устойчивости корней подсолнечника к фузариозу на ранних стадиях развития проростков и с использованием простых и дешевых средств. Известен способ оценки растений на устойчивость к фузариозу по а.с. 1598928, А 01 Н 1/04, Бюл. 38, 1990 г., согласно которому семена испытываемых образцов стерилизуют и проращивают в чашках Петри на фильтровальной бумаге. У проростков отделяют кончики корней длиной 3-5 мм и помещают их в мацерирующий раствор, содержащий ферменты: пектиназу, целлюлазу, хлористый кальций, итаконовую кислоту и воду. После инкубирования под микроскопом подсчитывают количество протопластов. В качестве стандартов используют сорта с известной степенью устойчивости. Наибольшее количество протопластов выделяется у восприимчивых сортов, наименьшее - у устойчивых. Недостатком способа является его относительная сложность и недостаточная точность. Известно устройство для оценки устойчивости озимой пшеницы к фузареозной корневой гнили и селекционного материала сои на ранних фазах развития растений, состоящее из кассет, которые включают две боковые пластины из оргстекла с отверстиями диаметром 0,6-0,8 см, три прокладки из полиуретанового поропласта и четыре - из ткани. Прокладки из полиуретанового поропласта используют в качестве субстрата для роста и развития растений, а по тканевым прокладкам поступает вода к семенам, размещенным между ними, из кюветы с водой, в которую помещают собранную кассету таким образом, чтобы тканевые прокладки оказались в воде. Семена перед размещением в кассету в течение двух суток замачивают в чашках Петри в инокулюме патогенного штамма фузариума, выращенного на жидкой среде Чапека. Проращивание семян, размещенных в кассете, проводят в климатической камере в режиме: 12 ч - день при 24oС, 12 ч - ночь при 20oC. Через 10 дней кассету разбирают и определяют степень поражения образца по общепринятой методике (в баллах) (см. Устройство для оценки устойчивости селекционного материала сои к фузариозу. О.И. Милякова, В. И. Сичкарь, УДК 632.938.1+632.4:633.34, ж. Селекция и семеноводство, 2, 1986 г., с.2-27). Недостатком известного устройства является его относительная громоздкость и недостаточная точность. Известен также способ определения устойчивости растений к микроорганизмам - возбудителям белой и серой гнили и их токсинам по а.с. 1020067, А 01 С 7/00//А 01 Н 1/04, публ. 1983 г., включающий проращивание семян во влажной камере до образования зародышевых корешков, высаживание их в отверстия на пластинах из фольги, размещение фольговых пластин с проростками в пластмассовых кюветах, наполненных водой так, чтобы зародышевые корни погружались в воду, выращивание проростков до образования боковых корешков, инокуляцию зародышевых корней путем приподнимания пластин с проростками, замены воды в кюветах смесью гомогената мицелия и культуральной жидкости возбудителя гнили и опускания пластин в кюветы с обеспечением погружения в содержимое кювет зародышевых корешков, инкубирование при 20-24oC во влажной камере в течение 48 ч и визуальную оценку иммунологической реакции растений по появлению некрозов в виде утолщений на зародышевых корнях и по образованию новых боковых корешков над зоной некрозов (прототип способа). Недостатком известного способа является относительная сложность приготовления патогена, относительная длительность периода заражения проростков и в целом способа определения устойчивости. Настоящим изобретением решается задача расширения методов и средств для осуществления селекции подсолнечника на улучшение неспецифического антимикробного иммунитета его корневой системы за счет повышения эффективности заражения и качества отбора устойчивых к фузариозу растений, ускорения процесса оценки, снижения затрат, повышения удобства в работе. Цель изобретения - упрощение операции приготовления патогена, защита работников от вредного воздействия токсинов патогена, уменьшение возраста проростков, подвергаемых заражению, сокращение периода их заражения, а также применение для этого простых и дешевых средств, выпускаемых в серийном производстве и имеющихся почти в каждой лаборатории, с незначительной их доработкой. Технический результат достигается тем, что в известном способе определения устойчивости растений к микроорганизмам - возбудителям гнили и их токсинам, включающем приготовление патогена, проращивание семян во влажной среде, высаживание двухдневных проростков на плоское основание с отверстиями, размещаемое на емкости с патогеном, инокуляцию путем выдерживания проростков в контакте с патогеном и визуальную оценку иммунологической реакции растения, согласно изобретению в качестве патогена используют 15-дневную культуру гриба фузариума, выращенного в чашках Петри, в качестве плоского основание с отверстиями для высаживания в них двухдневных проростков используют отперфорированные крышки чашек Петри, инокуляции подвергают двухдневные проростки в течение 6-ти ч, затем зараженные проростки выдерживают в контакте со стерильной водой в течение 3-х дней во влажной камере, а визуальную оценку иммунологической реакции растения осуществляют по распространению поражения на корневую шейку и гипокотиль. Сопоставительный анализ заявляемого технического решения с прототипом позволяет сделать вывод, что заявляемый способ отличается от известного формой используемого патогена (15-дневная культура гриба вместо смеси гомогената мицелия гриба и культуральной жидкости), возрастом проростков, подвергаемых инокуляции (двухдневные вместо 4-5-дневных), продолжительностью выдерживания проростков в контакте с патогеном (6 ч вместо 48 ч), дополнительной операцией выдерживания зараженных проростков во влажной камере, признаками, по которым определяется устойчивость растений к фузариозу, а также применяемыми элементами. Таким образом, заявляемое техническое решение соответствует критерию патентоспособности - новизна. Исследуя уровень техники в процессе проведения патентного поиска по всем видам сведений, общедоступных в печати, мы не выявили технических решений, имеющих совокупность отличительных признаков заявляемого технического решения. Вся совокупность отличительных от прототипа признаков является новой, следовательно, заявляемое техническое решение соответствует критерию патентоспособности - изобретательский уровень. Заявляемое техническое решение соответствует и критерию патентоспособности - промышленная применимость, т.к. может быть использовано в сельском хозяйстве, в частности в селекции подсолнечника на иммунитет к фузариозу. И, кроме того, в описании изобретения представлены средства и методы, с помощью которых возможно осуществление технического решения в том виде, как оно охарактеризовано в формуле изобретения. Способ осуществляют следующим образом. Для приготовления патогена выращивают 15-дневную культуру гриба фузариума в чашках Петри по известной методике. Пока гриб растет, за два дня до закладки опыта, проращивают семена подсолнечника во влажной среде. Двухдневные проростки высаживают в отверстия оперфорированной чашки Петри и ставят ее на чашку Петри с 15-дневным грибом фузариума, сняв с последней крышку, под которой выращивали гриб. Инокуляцию проводят в течение 6-ти ч, выдерживая проростки в контакте с грибом кончиками корней проростков, а затем зараженные проростки выдерживают в контакте со стерильной водой во влажной камере в течение 3-х дней, после чего осуществляют визуальную оценку иммунологической реакции растений по распространению поражения на корневую шейку и гипокотиль. Пример осуществления способа. Готовили сусловый агар по методике Билай, разливали в стерильные чашки Петри и после его остывания высевали туда чистую культуру фузариума. Чашки Петри накрывали крышками без отверстий и выращивали гриб в течение 15-ти дней при температуре 21-24oС и дневном свете. За два дня до закладки опыта (на 13-й день выращивания гриба) проращивали семена подсолнечника в рулонах фильтровальной бумаги при том же температурном режиме. Затем на 15-й день выращивания культуры гриба с чашки Петри с грибом снимали крышку и для сохранения чистоты окружающей среды эту крышку помещали в пластиковый пакет, а на чашку Петри с грибом ставили такую же по размеру отперфорированную крышку Петри, например с 20-ю сквозными отверстиями диаметром 1-2 мм. В эти отверстия помещали двухдневные проростки, очищенные от лузги так, чтобы кончик корня соприкасался с инфекцией. Проростки выдерживали в контакте с грибом в течение 6-ти ч, затем крышку с зараженными проростками снимали с чашки Петри с грибом и переносили на чашку Петри со стерильной водой, а чашку с грибом закрывали ее же крышкой, взятой из пластикового пакета. Обеспечивали контакт кончиков корней зараженных проростков со стерильной водой таким обрезом: дно чашки Петри покрывали кружком фильтровальной бумаги, смоченной стерильной водой, и добавляли стерильную воду до установления соответствующего уровня, необходимого для контакта кончиков корней проростков с ней. Это простое устройство, состоящее из чашки Петри с водой и перфорированной крышки с зараженными проростками, помещали во влажную камеру, для чего брали полиэтиленовую пленку, складывали ее вдвое, на ее нижнюю часть помещали увлажненную ткань и на нее ставили указанное выше устройство, которое накрывали верхней частью пленки, а края пленки загибали. Устройство с зараженными проростками выдерживали во влажной камере в течение 3-х дней, а затем устройство извлекали из влажной камеры, и осуществляли визуальную оценку иммунологической реакции растения по распространению поражения на корневую шейку и гипокотиль: к восприимчивым относили те растения, у которых поражение распространилось по всему корню на корневую шейку и гипокотиль, а к устойчивым - те растения, у которых поражение не распространилось на верхнюю треть корня и корневую шейку и из здоровой верхней трети корня образовались боковые корешки. Отобранные устойчивые растения высаживали в почву, получали от них здоровое потомство и вовлекали его в последующий селекционный процесс. Выращивание 15-дневной чистой культуры гриба фузариума в чашках Петри для приготовления патогена обеспечивает упрощение операции приготовления патогена и удобство выполнения последующих операций. Использование отперфорированных крышек Петри в качестве плоского основания для высаживания на нем двухдневных проростков обеспечивает упрощение и удешевление способа за счет применения простых и дешевых средств, выпускаемых в серийном производстве и имеющихся почти в каждой лаборатории, с незначительной их доработкой. Кроме того, оно сводит до минимума контакт исследователя с патогеном. Инокулирование проростков в двухдневном возрасте и выдерживание их в контакте с грибом в течение 6-ти ч, а затем в контакте со стерильной водой во влажной камере в течение 3-х дней ускоряет процесс заражения и в целом процесс оценки. Визуальная оценка иммунологической реакции растения по распространению поражения на корневую шейку и гипокотиль обеспечивает высокое качество и точность отбора. В целом вся совокупность существенных признаков заявляемого изобретения обеспечивает упрощение и ускорение способа определения устойчивости подсолнечника к фузариозу и решение поставленной задачи - повышение эффективности заражения и качества отбора устойчивых к фузариозу растений, а следовательно, способствует осуществлению селекции подсолнечника на улучшение неспецифического иммунитета его корневой системы.ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯСпособ определения устойчивости подсолнечника к фузариозу, включающий приготовление патогена, проращивание семян во влажной среде, высаживание двухдневных проростков на плоское основание с отверстиями, размещаемое на емкости с патогеном, инокуляцию путем выдерживания проростков в контакте с патогеном и визуальную оценку иммунологической реакции растения, отличающийся тем, что в качестве патогена используют 15-дневную культуру гриба фузариума, выращенную в чашках Петри, в качестве плоского основания с отверстиями для высаживания в них двухдневных проростков используют отперфорированные чашки Петри, инокуляции подвергают двухдневные проростки в течение 6 ч, затем зараженные проростки выдерживают в контакте со стерильной водой во влажной камере в течение 3 дней, а визуальную оценку иммунологической реакции растения осуществляют по распространению поражения на корневую шейку и гипокотиль.Популярные патенты: 2165141 Тепличный гидропонный комплекс ... инфекции. Использование гидропонного принципа при выращивании безвирусных растений является безусловным, поскольку позволяет не только эффективно регулировать процесс вегетации, но и облегчает исключение попадания к корневой системе растений болезнетворных образований. Однако при этом необходимо создание условий для предотвращения зарождения в питательном растворе одноклеточных водорослей. Для этого в тепличном комплексе приняты конструктивные меры по ограничению доступа света к питательному раствору. Этому служит, в частности, светонепроницаемая пленка 17 и светонепроницаемый материал, расположенный вдоль стенок вегетационных отсеков 7 до уровня размещения растений. ... 2475020 Способ подбора лучших сортов опылителей для насаждений яблони ... ягодных и орехоплодных культур. - Орел ВНИИСПК, 1999. - с.290 - 295.10. Помология. Яблоня. - Орел: ВНИИСПК, том 1, 2005.11. Сарапуу Л.П. Физиологическая роль и метаболизм флоризина в яблони. Докторская диссертация. - Тарту, 1971. - 282 с.12. Селекция и сортоведение плодовых и ягодных культур. / Под. ред. проф. А.С.Татаринцева. М.: Колос, 1981. - 368 с.13. Branscheidt, P.Zur Physiologie der Pollen Keimung und Ihrer experimentellen Beeinflussung. - Planta, 1930. 2, 2. S.368.14. Wiermann R. Untesuchungen zum Phenylpropan - stoffwechsel des Pollens I. Ubersicht uber die bei Gymnospermen and Angiospermen isolierten flavonoiden Verbindungen. - Ber. Dtsch. Bot. Ges., 1968. - Bd.81. S.3 - ... 2245017 Способ подготовки картофеля перед закладкой на хранение ... Органолептические показатели кулинарной и консервированной продукции, полученной из обработанного по предлагаемому способу картофеля и из контрольного картофеля, не пораженного вредителями и не подвергавшегося никакой обработке вообще, одинаковы. Количество отходов при переработке картофеля, обработанного по предлагаемому способу, несколько выше, чем у контрольного картофеля, за счет локализации ходов личинок картофельной моли в периферийных областях клубней, но не превышает традиционных норм отходов.Таким образом, предлагаемый способ позволяет обеспечить уничтожение вредных насекомых при хранении картофеля без негативного влияния на его иммунный статус, всхожесть и ... 2462864 Устройство составления экономичного кормового рациона и экономичного кормления животных и птиц ... ... 2440721 Способ определения вредоносности насекомых комплекса "гнус" для крупного рогатого скота ... относится к способам определения вредоносного действия кровососущих двукрылых насекомых комплекса «гнус» (слепней, комаров, мошек, мокрецов) для крупного рогатого скота, в частности для коров, и может быть использовано в ветеринарной практике для рациональной организации мероприятий против данной группы насекомых с целью предотвращения наблюдаемого из-за их массового нападения снижения продуктивности животных. Известны способы определения вредоносности насекомых комплекса «гнус» путем сравнения молочной продуктивности защищаемых с помощью репеллентов или инсектицидов подопытных и не защищаемых никакими средствами контрольных коров [1]. Недостатком ... |
Еще из этого раздела: 2438304 Улей 2106082 Устройство для укладки подстилочного навоза в бурт 2185064 Вещество, обладающее пестицидной активностью, способ его получения, пестицидная композиция и способ контролирования вредителей 2447645 Аппарат для обмолота коробочек семян 2248352 Замещенные бензоилциклогександионы, гербицидное средство на их основе, исходное соединение 2110911 Способ выращивания птицы 2218756 Способ изготовления антипаразитарного ошейника 2250583 Агрегат дернинный комбинированный 2048055 Устройство для отрезания и погрузки сенажа и силоса 2460269 Малогабаритный картофелеуборочный комбайн |
Изобретения в сельском хозяйстве
Обработка почвы в сельском и лесном хозяйствах
Посадка, посев, удобрение
Уборка урожая, жатва
Обработка и хранение продуктов полеводства и садоводства
Садоводство, разведение овощей, цветов, риса, фруктов, винограда, лесное хозяйство
Новые виды растений или способы их выращивания
Производство молочных продуктов
Животноводство, разведение и содержание птицы, рыбы, насекомых, рыбоводство, рыболовство
Поимка, отлов или отпугивание животных
Консервирование туш животных, или растений или их частей
Биоцидная, репеллентная, аттрактантная или регулирующая рост растений активность химических соединений или препаратов
Хлебопекарные печи, машины и прочее оборудование для хлебопечения
Машины или оборудование для приготовления или обработки теста
Обработка муки или теста для выпечки, способы выпечки, мучные изделия
|
|
||