Раствор для криопрезервации кожи и роговицыПатент на изобретение №: 2212792 Автор: Смирнов С.В., Киселев И.В., Емельянов А.В., Лешневский А.В., Васильев А.В., Терский В.В. Патентообладатель: Васильев Андрей Валентинович Дата публикации: 27 Сентября, 2003 Начало действия патента: 17 Декабря, 2001 Адрес для переписки: 107014, Москва, ул. М. Остроумовская, 1б, кв.246, А.В.Васильеву Изобретение относится к области медицины, а именно к растворам для криопрезервации кожи и роговицы. Изобретение может быть использовано при создании запасов жизнеспособных кожных трансплантатов в дермопластике и офтальмологии. Раствор для криопрезервации кожи и роговицы включает криопротектор, среду 199 на базе раствора Хэнкса и стимулятор деления клеток. В качестве криопротектора раствор содержит диметилсульфоксид, и/или пропиленгликоль, и/или глицерин в концентрации от 10 до 90% к среде, а предпочтительно от 10 до 20%. В качестве стимулятора деления клеток раствор содержит эпидермальный фактор роста и/или инсулин, а в качестве эпидермального фактора роста раствор содержит митоген, в частности полипептид. Раствор является эффективной средой для криопрезервации кожи, что способствует созданию единой технологии хранения жизнеспособной аллогенной и аутологичной кожи, созданию банка трансплантатов кожи и роговицы. Изобретение обеспечивает повышение эффективности и снижение стоимости лечения больных с различными повреждениями кожи и роговицы. 4 з.п.ф-лы. ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУИзобретение относится к области медицины, а именно к растворам для криопрезервации кожи и роговицы. Изобретение может быть использовано при создании запасов жизнеспособных трансплантатов кожи и роговицы в хирургии и офтальмологии. Для временного восстановления кожного покрова и стимуляции репаративных процессов в ране может использоваться жизнеспособная аллогенная кожа. Она может быть использована также в качестве источника для получения аллогенных трансплантатов кератиноцитов и фибропластов, в комбинации с аутодермопластикой или как основа для последующей трансплантации аутологичных кератиноцитов. С целью снижения количества операций по забору кожи у больных с ожогами и постоянного восстановления кожного покрова может использоваться жизнеспособная аутологичная кожа. Известны растворы для хранения кожи, например раствор, содержащий диметилсульфоксид, глицерин, формалин, спирт и дистиллированную воду (RU 2144764 C1, 27.01.2000). Недостатками указанного способа являются сравнительно низкая эффективность. Это обусловлено, в частности, повреждением клеток, малым сроком хранения кожи. Наиболее близким к заявленному изобретению по технической сущности является способ криопрезервации жизнеспособных клеток с использованием криопротектора типа диметилсульфоксид, пропиленгликоль или полиэтилена гликоль (WO 96/39812 A3, 19.12.1996). Общими недостатками указанных растворов являются сравнительно низкая эффективность сохранения клеток живыми, высокая сложность и стоимость хранения. Целью изобретения является создание эффективной среды для криопрезервации кожи, что способствует созданию единой технологии хранения жизнеспособной аллогенной и аутологичной кожи, повышение эффективности и снижение стоимости лечения больных с различными повреждениями кожного покрова и роговицы. Поставленная цель достигается тем, что для сохранения жизнеспособности и сохранения специфической функции клеток в течение длительного времени разработан раствор, содержащий 199 среду на базе раствора Хэнкса, криопротектор и эпидермальный фактор роста. Среда 199 разработана в 1950 г. Ее характеризуют широкий спектр питательных веществ и относительно невысокая их концентрация (Пинаев Г.П. Методы культивирования клеток. Сборник научных трудов. - Л.: Наука, 1988, с.56). В настоящее время среда 199 используется без каких-либо добавок как поддерживающая для первичных клеток. Раствор Хэнкса представляет собой растворенный краситель фенол красный в солевом растворе (Yasuda Y. et al. Jornal of Reproduction and Fertility, 1992, 96, 521-528). В качестве стимулятора деления клеток можно использовать любой митоген полипептидной природы, в частности эпидермальный фактор роста, инсулин и др. Криопротектором может служить любые известные своей функцией реагенты, например диметилсульфоксид, пропиленгликоль, глицерин и др. Причем концентрация криопротектора может составлять от 10 до 90% от среды, а предпочтительно 10-20%. Раствор получают простым смешением компонентов. Например, в готовый раствор среды 199 на базе раствора Хэнкса добавляют глицерин 100-150 мг/мл, гомогенизируют, затем добавляют митоген от 7 до 12 нг/мл. После помещения кожи в данный раствор она замораживается и хранится в морозильных камерах при температуре -18oС, -70oС или в жидком азоте при -196oС. По мере необходимости кожные трансплантаты размораживают и накладывают на раны цельные или перфорированные лоскуты. После 45 суток хранения при -70oС количество живых клеток в коже снижается в среднем всего на 29%, что позволяет получать при культивировании кератиноцитов (основного типа клеток эпидермиса) колонии. Раствор для криопрезервации физиологически совместим и его не надо удалять перед наложением пациенту. Возможность хранения жизнеспособной кожи при отрицательных температурах с целью ее последующего использования в качестве самостоятельного покрытия или для получения клеточных трансплантатов свидетельствует о соответствии заявляемого решения условию патентоспособности "новизна". Использование совокупности настоящих признаков в их функциональном единстве для достижения поставленной задачи свидетельствует о соответствии заявляемого решения условию "изобретательский уровень". Использование данных признаков изобретения позволяет получить новый технический результат - повысить качество кожных трансплантатов и получать жизнеспособную кожу, близкую по своим свойствам к нормальной коже, и создать банк трансплантатов кожи с длительным сроком хранения. Пример 1. Способ апробирован и реализован при выполнении пластики гранулирующей раны у крысы посредством пересадки аутологичного кожного лоскута после хранения на модели с исключением контракции раны. Протокол опыта 30, крыса 12, самец. 10.05.99 у крысы линии Вистар, весом 250 г под общим наркозом взят полнослойный кожный лоскут площадью 0,7 см2. Биоптат помещен в стеклянную тару с разработанным раствором. Замораживание осуществляли со скоростью 1-2oС в минуту при -70oС. Через 27 суток хранения (за трое суток до трансплантации) в область верхней трети части спины иссекли полнослойный кожный лоскут. Для предотвращения контракции в рану вшили пластиковое кольцо, имеющее вертикальную и горизонтальную поверхности. Через 30 суток хранения произвели размораживание кожи при постоянной температуре около 42oС, после чего перенесли на гранулирующую рану. Поверх трансплантата наложили перевязочное средство Jelonel и салфетку, смоченную в физиологическом растворе с гентамицином (0,16 мг/мл). При осмотре раны через 5 суток отмечено наличие пересаженного лоскута. Прижившиеся трансплантаты были бледно-розового цвета, плотно прилежали к раневой поверхности. Края лоскутов отделить от грануляционной ткани не удавалось. При взятии биопсии в месте разреза прижившейся кожи возникало интенсивное кровотечение. При гистологическом исследовании наблюдалась частичная отслойка эпидермиса. В дерме видимых изменений обнаружено не было. Базальная мембрана сохранена. К 15-м суткам трансплантаты имели те же размеры, плотно прилежали к ране. Поверхность лоскутов была покрыта тонким, гладким, блестящим эпителием. При гистологическом исследовании подлежащая грануляционная ткань имела тесный контакт с дермой пересаженных кожных лоскутов. В глубоких слоях дермы наблюдалась повышенная васкуляризация, лейкоцитарная инфильтрация и увеличение числа фибробластов. В зоне дермо-эпидермального контакта отмечалось нарушение связи дермы и эпидермиса по всей длине кожного лоскута, однако отслоения эпидермиса не наблюдалось. Базальная мембрана эпидермиса была не нарушена. В эпидермисе определялись явления акантоза и гипертрофии кератиноцитов в зернистом слое. При этом в увеличенных в размерах кератиноцитах отсутствовали гранулы кератогиалина. В последующем с краев пересаженной кожи наблюдалась миграция эпителия на грануляционную ткань и рост волос в трансплантате. К 30-м суткам приживший лоскут несколько увеличился в размере за счет краевой эпителизации. Трансплантат имел бледно-розовый цвет, плотно держался на раневом ложе. На грануляционной ткани вокруг трансплантатов была видна тонкая полоска молодого эпителия. В центре наблюдался активный рост волос. При гистологическом исследовании трансплантатов кожных лоскутов грануляционная ткань отсутствовала. Трансплантаты кожных лоскутов по своему строению соответствовали нормальной коже. В верхнем слое дермы увеличено количество фибробластов. В зоне дермо-эпидермального контакта местами отмечалось нарушение связи дермы и эпидермиса, однако отслоения эпидермиса не наблюдалось. Эпидермис был утолщен за счет средних слоев. Процесс ороговения не нарушен. Признаков фенотипической трансформации кератиноцитов обнаружено не было. Пример 2. Больная С-ва, 69 лет, история болезни 14559, находилась на стационарном лечении в ожоговом центре НИИ СП им. Н.В. Склифосовского с диагнозом: ожог пламенем II-IIIA, Б степени туловища, правой ягодицы и правого бедра общей площадью 20% поверхности тела (ПГБ-9%). В связи с отказом больной от операции аутодермопластика лечение ожоговых ран проводили консервативно. В результате проведенного комплексного лечения на 50-е сутки у больной оставались гранулирующие раны на площади 1,5% поверхности тела. На 51-е сутки с момента получения травмы больной была произведена аллотрансплантация пластов эпидермальных кератиноцитов, выращенных из трупной кожи, хранившейся в разработанном консерванте в течение 20 суток. Первая перевязка произведена через трое суток, при этом отмечена выраженная краевая эпителизация, а также появление нескольких небольших (около 3-5 мм2) островков эпителизации. Площадь ран уменьшилась примерно на 1/3, однако пласт клеток визуально не определялся. Раны были закрыты перевязочным средством "Jelonel"; сверху - повязкой с левомеколем. На последующих перевязках через 6 и 8 суток с момента трансплантациии было отмечено прогрессирующее сокращение ран за счет краевой эпителизации и увеличения площади островков эпителизации. К 10-м суткам у больной оставались раны на площади около 3 см2. На 15-е сутки после трансплантации (66-е сутки с момента получения травмы) кожный покров был полностью восстановлен. Предлагаемый состав обеспечивает сохранение жизнеспособности кожи и роговицы в течение длительного времени и позволяет создать банк трансплантатов, пригодных для закрытия ран и ожогов кожи и роговицы.ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Раствор для криопрезервации кожи и роговицы, включающий криопротектор, отличающийся тем, что раствор дополнительно содержит 199 среду на базе раствора Хэнкса и стимулятор деления клеток. 2. Раствор по п. 1, отличающийся тем, что в качестве криопротектора раствор содержит диметилсульфоксид, и/или пропиленгликоль, и/или глицерин в концентрации от 10 до 90% к среде, а предпочтительно от 10 до 20%. 3. Раствор по пп. 1 и 2, отличающийся тем, что в качестве стимулятора деления клеток раствор содержит эпидермальный фактор роста и/или инсулин. 4. Раствор по пп. 1,3, отличающийся тем, что в качестве эпидермального фактора роста раствор содержит митоген. 5. Раствор по пп. 1 и 2, отличающийся тем, что в качестве митогена раствор содержит полипептид.Популярные патенты: 2161400 Способ определения активности агентов ... в течение 10-12 дней (контроль вода). Кормление мальков осуществляют живым или сушеным кормом (дафнии, циклопы, энтомопатогенные нематоды). Оценку активности испытываемого биоагента проводят по определению процента выхода мальков из икринок, по выживаемости мальков, их активности и массе (мг). При испытании ядохимикатов и биопрепаратов против личинок кровососущих насекомых (гнус) в каждый пластиковый прозрачный четырехкамерный стаканчик со сферическими увеличивающими стенками, емкостью 120 см3 запускают по 100 особей личинок комаров, мошки или мокрецов в соответствующие концентрации испытываемых растворов или патогенов (вирусы радужности комаров, нематоды, поражающие мошку, или ... 2053661 Устройство для сколачивания ульевых рамок ... чтобы отверстия кондуктора располагались по середине полуокон. Боковая планка с размерами 290х25х8 или 290х25х37х8, 220х25х8, 135х25х37х8, 135х25х8 мм, укладывается в полуокна (полуокно), зажимается, например струбциной 34, сверлятся отверстия. Боковые планки с просверленными отверстиями укладываются в пазы 25 и 26, а в пазы 23 и 24 соответственно верхний и нижний бруски ульевой рамки. Зажим 15 перемещается вдоль отверстий 13 и 14 и устанавливается в положении, соответствующее выбранному типу сколачиваемой ульевой рамки, и закрепляется гайками-барашками 16. Резьбовыми винтами 17 нажимные вкладыши 18 прижимают боковые планки к верхним и нижним брускам и ограничителям 22, также ... 2199195 Мостовая сельскохозяйственная платформа "сотка" ... По мере окончания операций (сбор плодов и т.д.) платформа перемещается в конец полосы. Ширина полосы зависит от ширины колеи, которая в свою очередь определяется прочностью на изгиб профильных брусьев. В конце полосы платформа выкатывается на грунт (дорожку) и после поддомкрачивания колесные пары (21, 25) фиксируются в нижнем положении стержнем 24. На смежный участок платформа размером (4 м х 1 м) перемещается усилием 40 кг без разворота. Далее колесные пары (21, 25) возвращаются в исходное положение и платформа вкатывается на швеллерные направляющие 27 путевой структуры. По мере необходимости на участках с уклонами на платформе на консоле 7 крепится двигатель 30 с ... 2261597 Способ борьбы с нематодами - возбудителями болезней сельскохозяйственных растений ... 2O2 240,05168 15391,00,1 168148 88,10,3168 12574,4 0,5168 11669,01,0 168115 68,43К 2HPO42Н 2O2 120,5168 9154,21,0 16840 23,82,5168 00 5,01680 0Контроль Без обработки-168 281167,3 Таблица 6Влияние пероксосольвата фторида калия на цисты картофельной нематоды in vitro Химическое соединение% активного кислорода% в опыте Результаты испытаний Среднее кол-во живых яиц и личинок в цистах, шт. % гибели яиц и личинок от исходного исходноечерез 3 суток через 10 суток KF·H2О2 17,4 03776 -3242,1 0,7576 -1519,7 1,576 -1823,6 3,076 -0100 5,076 39-48,7 10,076 14-81,5 КонтрольВода -76- 716,6 Таблица 7Биологическая эффективность перекиси кальция, ... 2384988 Способ и устройство для управления сельскохозяйственной машиной ... 30 оборотов двигателя 31 сельскохозяйственной машины 2 или на числа 32 оборотов самых различных рабочих аппаратов 6. Преимуществом в данном случае является возможность экономии топлива за счет снижения числа оборотов при работе с частичной шириной ТА обработки. Для специалиста в данной области понятно, что при осуществлении изобретения возможны различные изменения и модификации способа и устройства, не выходящие за пределы объема защиты, а также использование их в других системах машин. Формула изобретения 1. Способ управления сельскохозяйственной машиной, с которой связана система маршрутизации для разработки маршрутов на территории, причем система маршрутизации подразделяет ... |
Еще из этого раздела: 2475020 Способ подбора лучших сортов опылителей для насаждений яблони 2271096 Способ прогнозирования урожайности озимых зерновых культур в условиях засушливого климата 2132610 Устройство обогрева сельскохозяйственных животных и птицы 2289908 Способ получения рассады стевии 2420060 Способ генетической трансформации растений селекционно-ценных образцов клевера лугового 2120709 Рама плуга 2421965 Способ возделывания зерновых колосовых культур 2489835 Гнездовой высевающий аппарат для посева проросших семян овощных культур 2162635 Устройство для аэрозольного распыления (варианты) 2167648 Средство для защиты от укусов кровососущих насекомых (варианты) и способ его получения |
Изобретения в сельском хозяйстве
Обработка почвы в сельском и лесном хозяйствах
Посадка, посев, удобрение
Уборка урожая, жатва
Обработка и хранение продуктов полеводства и садоводства
Садоводство, разведение овощей, цветов, риса, фруктов, винограда, лесное хозяйство
Новые виды растений или способы их выращивания
Производство молочных продуктов
Животноводство, разведение и содержание птицы, рыбы, насекомых, рыбоводство, рыболовство
Поимка, отлов или отпугивание животных
Консервирование туш животных, или растений или их частей
Биоцидная, репеллентная, аттрактантная или регулирующая рост растений активность химических соединений или препаратов
Хлебопекарные печи, машины и прочее оборудование для хлебопечения
Машины или оборудование для приготовления или обработки теста
Обработка муки или теста для выпечки, способы выпечки, мучные изделия
|
|
||