Штамм культивируемых клеток растенийй stephania glabra (roxb) miers - продуцент стефаринаПатент на изобретение №: 2089610 Патентообладатель: Институт физиологии растений им.К.А.Тимирязева РАН, Научно-производственное объединение "Всероссийский научно- исследовательский институт лекарственных и ароматических растений" РАН Дата публикации: 10 Сентября, 1997 Адрес для переписки: подача заявки29.03.1994 публикация патента10.09.1997 Изображения Использование: биотехнология. Сущность изобретения: штамм клеток растения стефания Stephania glabra (Roxb) Miers ВСКК-ВР N 56 получен путем клеточной селекции из исходного штамма ВИЛР Sg-6 и характеризуется высокой продуктивностью, до 200 мг/л, по алкалоиду стефарину. 2 табл. ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУИзобретение относится к биотехнологии, в частности к культивированию клеток растений стефании гладкой in vitro,и предназначено для получения при глубинном культивировании штамма, ценных биологически активных веществ, в частности алкалоида стефарина, на базе которого создан эффективный препарат, зарегистрированный под названием "стефаглабрин сульфат", уменьшающий трофические расстройства денервированных конечностей, способствующий ранней и более полной регенерации поврежденных нервов, а также обладающий антихолинэстеразным действием. Стефания гладкая Stephaniaglabra (Roxb) Miess растение семейства луносемянниковых, распространена в субтропических районах Индии, Бирмы, Китая, Вьетнама, Лаоса. В местах естественного произрастания содержит до 6% (на сухую массу) суммы алкалоидов, в том числе стефарина до 0,8% В настоящее время единственным источником получения стефарина является культура ткани растения стефании гладкой, растущая in vitro и депонированная во Всероссийской коллекции клеточных культур как штамм "ВИЛР Sg-6" под номером ВСКК ВР N 28 [1] Однако, известный штамм ВИЛР Sg-6 не обладает достаточно высокой продуктивностью. Цель изобретения получение нового продуктивного штамма культуры клеток стефании гладкой с продуктивностью по алкалоиду стефарину до 200 мг/л, превышающей таковую штамма ВИЛР Sg-6. Такой штамм был получен в результате работы, поведенной в ИФР РАН и НПО "ВИЛАР" РСХА, и депонирован во Всероссийской коллекции клеточных культур под номером ВСКК-ВР N 56. Штамм характеризуется следующими признаками. Родословная получен методом клеточной селекции из исходного штамма ВИЛР Sg-6. Число пассажей к моменту паспортизации и депонирования 60. Причина депонирования продуцент. Стандартные условия выращивания температура 26 1oC, влажность 70% темнота, жидкая питательная среда. Ниже приведен состав питательной среды. NH4NO3 1700,0 50,0 KNO3 1600,0 50,0 KH2PO4 234,0 50,0 CaCl2 2H2O 64,0 50,0 MgSO47H2O 850,0 50,0 MnSO44H2O 22,3 1,0 FeSO47H2O 27,85 1,0 Трилон Б (ЭДТА) 37,85 1,0 ZnSO42H2O 8,6 1,0 H3BO3 6,2 1,0 KJ 0,83 0,1 Na2MoO42H2O 0.25 0,1 CuSO45H2O 0,025 0,01 CoCl26H2O 0,025 0,01 Са-пантотенат 2,0 0,5 Тиамин 2,0 0,5 2,4 Д 0,1 0,05 НУК 10,5 0,05 Пищевой сахар 50000 5000 Сосуды для выращивания конические или плоскодонные колбы Эрленмейера объемом 0,5 л. Технические данные качалки эллипсоидная траектория движения платформы, амплитуда колебаний 5-7 мм, число оборотов в минуту 100. Кратность рассева 1:10. Время субкультивирования 14 дней. Описание визуальных и цитологических наблюдений при стандартных условиях выращивания: средний размер клеток 67 мкм, с пределами варьирования 42 144 мкм, форма преимущественно округлые, реже вытянутые, суспензия агрегирована. Ниже приведена агрегированность суспензии стефании гладкой. Число клеток в агрегате агрегатов 1 0 2 2 5 4 7 6 10 12 13 11 20 27 41 21 50 29 38 Более 50 13 14 Способность к морфогенезу при стандартных условиях выращивания отсутствует. Название целевого продукта и характеристика его биосинтеза алкалоид изохинолиновой группы стефарин, содержание в ткани при использовании хроматоспектрофотометрического метода 1,0-2,0% от сухой массы, в культуральной жидкости следовые количества. Способ проверки жизнеспособности штамма нативная окраска 0,5% голубым Эванса. Физиолого-биохимические признаки динамика нарастания биомассы и накопления алкалоида (табл.1), за цикл выращивания (14 суток) биомасса увеличивается в 8-12 раз и синтезируется стефарина 1,0-2,0 на сухую биомассу, кроме стефарина показано присутствие еще 4-х неидентифицированных соединений. Новизна изобретения заключается в том, что был получен новый штамм ВСКК-ВР N 56, который имеет продуктивность в два раза выше, чем известный штамм. Заявленный штамм может использоваться в медицинской промышленности. Условия получения и использования суспензионной культуры клеток стефании гладкой штамма ВСКК-ВР N 56 приведены в примере. Пример. Штамм ВСКК-ВР N 56 получают методом клеточной селекции из исходного штамма ВИЛР Sg-6. Суспензию исходного штамма фракционируют путем отстаивания в цилиндре в течение 15 мин, надосадочную фракцию, обогащенную одиночными клетками и мелкими (до 10 клеток) агрегатами, смешивают с 1,0%-ной агарозой в отношении 1:1 и рассеивают на чашки Петри с конечной плотностью 3104 кл/мл. Через 4-6 недель получают колонии, отличающиеся по морфофизиологическим признакам. В них методом иммуноферментного анализа определяют уровень биосинтеза стефарина и отбирают колонии с содержанием алкалоида более 0,5% от сухой массы. Эти колонии культивируют в чашках Петри в жидкой среде на поверхности субстрата из пенополиуретана в течение 3-4 пассажей до получения 2-2,5 г свежей массы. Затем индивидуальные колонии переносят в колбы с жидкой средой, помещают на качалку для получения суспензионной культуры. Через 2-3 пассажа проверяют содержание стефарина. Далее стабильно растущие клоны проверяют на содержание стефарина через 6, 15, 18 и 24 месяца. В результате выделяют стабильный штамм ВСКК-ВР N 56 -с индексом роста 8-12 и продуктивностью до 360 мг/л стефарина (табл.2). Приведенные результаты свидетельствуют, что по накоплению биомассы новый штамм равен исходному, но по содержанию стефарина вдвое превышает его. Полученный штамм выращивают в темноте, при температуре 26oC, влажности 70% в конических или плоскодонных колбах Эрленмейера на качалке со следующими техническими данными: эллипсоидная траектория движения платформы, амплитуда колебаний 5-7 мм, число оборотов в минуту 100. Состав питательной среды приведен в табл. 1, продолжительность цикла выращивания 14 суток. В этот срок, соответствующий началу стационарной фазы, производят объем биомассы, отделяя ее от культуральной жидкости на фильтре, затем сушат на воздухе, полочной сушилке или в вакуумном сушильном шкафу при температуре не выше 60oC. Выделение стефарина проводят по следующей схеме: сухую биомассу обрабатывают раствором аммиака; стефарин извлекают толуолом в виде основания: толуол отгоняют; сухой остаток растворяют в этиловом спирте и подкисляют серной кислотой; сульфат стефарина выделяют кристаллизацией. Выход целевого продукта - 50% от расчетного содержания. Таким образом, использование предлагаемого штамма стефании гладкой ВСКК-ВР N 56 позволяет получать сульфат стефарина биотехнологическим методом. Алкалоидная продуктивность этого штамма более чем в два раза превышает таковую существующего штамма.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯШтамм культивируемых клеток растения Stephania glabra (Roxb) Miers ВСКК-ВР N 56 продуцент стефарина.Популярные патенты: 2111642 Высевающий аппарат ... их площадями сечений, причем одна из накладок 27 связывается с регулировочным устройством, а другая остается неподвижной относительно днища 25 и в этом случае выполняет его роль. Смещением подвижной накладки 27 относительно неподвижной регулировочным устройством изменяют норму высева семян на гектар. Предлагаемым высевающим аппаратом можно осуществлять высев малосыпучих семян при отсутствии в высевающем устройстве 4 различного рода ворошилок. Ворошение высеваемого материала осуществляется за счет колебаний высевающего устройства 4, что обеспечивает бесперебойное поступление материала к высевным отверстиям 26 и его высев. Простота конструкции, отсутствие деталей и узлов, требующих ... 2196418 Устройство для укладки, сушки и хранения прессованного сена и соломы в рулонах ... трубами 38, с вакуумметром 39, вакуум-баллоном 40 и вакуум-насосом 41. Отверстия 37 с обеих сторон хранилища плотно перекрыты рулонами 26. Устройство может быть выполнено в четвертом варианте. Четвертый вариант такой же, как третий вариант, отличается от него тем, что нечетные ряды отверстий 37 соединены с горизонтально расположенными патрубками 33, вертикальными трубами 32 и вентилятором 34 с одной стороны сенохранилища, а четные ряды отверстий 37 соединены с горизонтально расположенными патрубками 33, вертикально расположенными трубами 38, с вакуумметром 39, вакуум-баллоном 40, вакуум-насосом 41 с другой стороны хранилища. Подвоз рулонов 26 с поля в сенохранилище под крышу 4 ... 2399203 Способ оценки физиологического состояния организма цыплят ... ферментов в сыворотке крови цыплят яйценоского кросса «Родонит-2» и бройлеров кросса «Иза» 25-дневного и 45-дневного возрастов. Таблица 1 Активность ферментов в сыворотке крови цыплят Хар-ка групп цыплят ACTАЛТ ЛДГKK ACT/АЛТACT/ЛДГ KK/ЛДГ Тип ферментемии 25-дневного возраста, яйценоского кросса «Родонит-2» 175,66±5,8 7,28±1,5 856,54±67,9 1552,60±122,9 33,04±6,80,21±0,01 1,81±0,03 35,06±6,8 45-дневного возраста, яйценоского кросса «Родонит-2» 199,91±10,0 4,64±1,2 465,28±35,5 1360,24±117,8 68,46±17,9 0,44±0,022,98±0,2 71,88±18,0 ... 2092036 Способ микроразмножения стевии stevia rebaudiana l. ... 2,5 мин, и промывают в 3-х порциях стерильной воды. Затем из них вычленяют верхушечные почки с небольшими низлежащими тканями размером 0,2 - 0,3 мм и помещают в среду МС, содержащую тиамин 0,5, пиридоксин 0,5, никотиновую кислоту 1, сахарозу 20000, агар 8000, которая дополнительно содержит фитогормоны ИУК 2,0 мг/л, БА 2,0 мг/л и ГК 2,0 мг/л. Экспланты выдерживают в условиях относительной влажности 70% фотопериоде 16 ч, освещении люминесцентными лампами ЛБ-80 при температуре 25 26oC. Через 2 недели из эксплантированной почки вырастает побег с каллусной тканью на базальной части (фиг. 1). Затем через 1 неделю увеличивается каллусная ткань и зарождается большое количество почек и ... 2180475 Устройство для поштучной подачи предметов, в частности семян сельскохозяйственных культур ... по меньшей мере, один из указанных каналов. Бесконечная лента снабжена поперечными выступами на поверхности, примыкающей к щели накопительного бункера для равномерного распределения подаваемых на ленту предметов вдоль ее длины. Расстояние между выступами равно длине дуги окружности между упомянутыми каналами в дне бункера. Использование изобретения позволяет повысить эффективность работы устройства и исключить механическое повреждение семян при подаче в зону контроля, обработки или счета. 6 з.п. ф-лы, 2 ил. Изобретение относится к сельскохозяйственному машиностроению и может быть использовано в устройствах для контроля, обработки или счета семян сельскохозяйственных культур ... |
Еще из этого раздела: 2450135 Двигатель самоходной машины 2051971 Способ определения биологической активности -эндотоксинов различных патотипов bacileus thuringiensis 2494593 Способ повышения селена в чесноке горной зоны 2043709 Система управления работой форсунки разбрызгивателя 2054862 Гидравлический режущий аппарат 2272840 Способ молекулярного маркирования пола хмеля обыкновенного (humulus lupulus l) 2153256 Инсектицидное средство и способ борьбы с вредителями сельскохозяйственных культур 2227965 Способ возделывания бахчевых культур и устройство для его осуществления 2112341 Лапа плоскорежущая 2086081 Рабочий орган культиватора |
Изобретения в сельском хозяйстве
Обработка почвы в сельском и лесном хозяйствах
Посадка, посев, удобрение
Уборка урожая, жатва
Обработка и хранение продуктов полеводства и садоводства
Садоводство, разведение овощей, цветов, риса, фруктов, винограда, лесное хозяйство
Новые виды растений или способы их выращивания
Производство молочных продуктов
Животноводство, разведение и содержание птицы, рыбы, насекомых, рыбоводство, рыболовство
Поимка, отлов или отпугивание животных
Консервирование туш животных, или растений или их частей
Биоцидная, репеллентная, аттрактантная или регулирующая рост растений активность химических соединений или препаратов
Хлебопекарные печи, машины и прочее оборудование для хлебопечения
Машины или оборудование для приготовления или обработки теста
Обработка муки или теста для выпечки, способы выпечки, мучные изделия
|
|
||