Способ микроразмножения стевии stevia rebaudiana l.Патент на изобретение №: 2092036 Патентообладатель: Институт физиологии растений им. К.А.Тимирязева РАН Дата публикации: 10 Октября, 1997 Адрес для переписки: подача заявки08.10.1993 публикация патента10.10.1997 Изображения    Использование: сельское хозяйство и биотехнология. Сущность изобретения: микроразмножение стевии осуществляют путем вычленения в качества экспланта терминальных и/или пазушных почек с нижележащими тканями стебля размером 1 - 3 мм, стерилизации 0,1% раствором диоцида в течение 3 мин и 0,1% раствором сулемы в течение 2,5 мин, культивирования в течение 4 - 5 недель на питательной среде Мурасиге-Скуга, содержащей фитогормоны, индолилуксусную кислоту 0,1 - 0,3 мг/л, бензиладенин 0,5 - 2,0 мг/л, гибберелловую кислоту 0,5 - 2,0 мг/л до образования укоренившихся растений-регенерантов, неукоренившихся регенерантов и каллусной ткани, после чего укоренившиеся растения пересаживают в грунт, а неукоренившиеся регенеранты микрочеренкуют и переносят для укоренения на питательную среду Мурасиге-Скуга, содержащую 2,0 - 6,0 мг/л индолилуксусной кислоты и 1,0 - 2,0 мг/л гибберелловой кислоты. Каллусную ткань помещают на исходную питательную среду для дальнейшего культивирования до получения регенерантов. 2 табл., 7 ил. , , , , , , , ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУИзобретение относится к области биотехнологии, а именно к способам размножения стевии (Stevia rebaudiana L.) с помощью культуры ткани in vitro, которые могут использоваться для нужд пищевой и медицинской промышленности. Известен способ микроразмножения стевии. В этом способе микроразмножения стевии производят вычленение экспланта, стерилизацию его, культивирование на питательной среде, содержащей макро- и микроэлементы, витамины, сахарозу, агар и фитогормоны, получают регенеранты, микрочеренкуют их, доращивают, укореняют и пересаживают растения-регенеранты в грунт. Микроразмножение по этому способу базируется или на увеличении центрального побега и в дальнейшем его черенковании для укоренения, или на образовании каллусной ткани из почек и фрагментов листьев. Однако длительная стерилизация и высокая концентрация стерилизатора в этом способе отрицательно действуют на процессы побегообразования и рост растения. Значительная часть эксплантов способна была лишь к образованию каллуса. Кроме того, в этом способе используют фрагменты листьев, из которых невелика возможность получения растений свободных от вирусов и грибков. Заявленная в этом способе величина 5 мм недостаточна для получения высокого выхода безвирусных растений. Цель изобретения увеличение коэффициента размножения безвирусных растений и упрощение способа микроразмножения. Поставленная цель достигается новым способом микроразмножения стевии (Stevia rebaudiana L.), включающим вычленение экспланта, стерилизацию его, культивирование на питательной среде Мурасиге-Скуга (МС), содержащей макро- и микроэлементы, витамины, сахарозу, агар и фитогормоны, получение регенерантов, микрочеренкование, доращивание, укоренение и пересадку растений-регенерантов в грунт, причем согласно изобретению в качестве экспланта вычленяют терминальные и/или пазушные почки с низлежащими тканями стебля размером 1 3 мм, стерилизацию проводят 0,1% раствором диоцида в течение 3 мин и 0,1% раствором сулемы в течение 2,5 мин, культивирование осуществляют на питательной среде Мурасиге-Скуга, содержащей фитогормоны индолилуксусную кислоту (ИУК) 0,1 0,3 мг/л, бензиладенин (БА) 0,5 2,0 мг/л и гибберелловую кислоту (ГК) 0,5 2,0 мг/л, культивируют эксплант в течение 4 5 недель до образования укоренившихся растений-регенерантов, неукоренившихся регенерантов и каллусной ткани, после чего отделяют растения-регенеранты и высаживают их в грунт, а неукоренившиеся регенеранты микрочеренкуют и переносят для укоренения на питательную среду Мурасиге-Скуга, содержащую 2,0-6,0 мг/л ИУК и ГК 1,0-2,0 мг/л, а каллусную ткань помещают на исходную питательную среду для дальнейшего культивирования до получения регенерантов. Предлагаемое изобретение является новым, так как в патентной и научно-технической литературе не найдено решения с заявленной совокупностью отличительных признаков, то есть оно не известно из уровня техники, значит, соответствует критерию "новизна". Предлагаемое изобретение имеет изобретательский уровень, так как оно явным образом не следует из уровня техники. Пример 1. Берут верхушечные и боковые черенки из донорных растений стевии размером 10 15 мм и стерилизуют их при помощи 0,1% диоцида 3 мин и 0,1% сулемы 2,5 мин, и промывают в 3-х порциях стерильной воды. Затем из них вычленяют верхушечные почки с небольшими низлежащими тканями размером 0,2 - 0,3 мм и помещают в среду МС, содержащую тиамин 0,5, пиридоксин 0,5, никотиновую кислоту 1, сахарозу 20000, агар 8000, которая дополнительно содержит фитогормоны ИУК 0,1 мг/л, БА 0,5 мг/л и ГК 0,5 мг/л. Экспланты выдерживают в условиях относительной влажности 70% фотопериоде 16 ч, освещении люминесцентными лампами ЛБ-80 при температуре 25 26oC. Через 2 недели из эксплантированной почки вырастает побег с каллусной тканью на базальной части (фиг. 1). Затем через 1 неделю увеличивается каллусная ткань и зарождается большое количество почек и регенерантов (фиг. 2). Через 1 неделю происходит сильный рост регенерантов с корнеобразованием у части из них (приблизительно 20%), пригодных для посадки прямо в грунт (фиг. 3). Оставшиеся регенеранты черенкуют и пересаживают в среду МС (фиг. 4) с содержанием фитогормонов, мг/л: ИУК 2, ГК 1. Через 2 недели побеги укореняются и готовы к высадке в грунт (фиг. 5). Этот процесс можно повторять неоднократно (5 6 раз), используя жизнеспособность каллусной ткани, образовавшейся после первой имплантации почек (фиг. 6). Через 2 недели после пересадки этой каллусной ткани на свежую среду зарождаются новые почки и регенеранты (фиг. 7). Результаты примера 1 приведены в табл. 1, 2. Пример 2. Берут верхушечные и боковые черенки из донорных растений стевии размером 10 15 мм и стерилизуют их при помощи 0,1% диоцида 3 мин и 0,1% сулемы 2,5 мин, и промывают в 3-х порциях стерильной воды. Затем из них вычленяют верхушечные почки с небольшими низлежащими тканями размером 0,2 - 0,3 мм и помещают в среду МС, содержащую тиамин 0,5, пиридоксин 0,5, никотиновую кислоту 1, сахарозу 20000, агар 8000, которая дополнительно содержит фитогормоны ИУК 0,5 мг/л, БА 1,0 мг/л и ГК 2,0 мг/л. Экспланты выдерживают в условиях относительной влажности 70% фотопериоде 16 ч, освещении люминесцентными лампами ЛБ-80 при температуре 25-26oC. Через 2 недели из эксплантированной почки вырастает побег с каллусной тканью на базальной части (фиг. 1). Затем через 1 неделю увеличивается каллусная ткань и зарождается большое количество почек и регенерантов (фиг. 2). Через 1 неделю происходит сильный рост регенерантов с корнеобразованием у части из них (приблизительно 20%), пригодных для посадки сразу в грунт (фиг. 3). Оставшиеся регенеранты черенкуют и пересаживают в среду МС (фиг. 4) с содержанием фитогормонов мг/л: ИУК 4, ГК 1,5. Через 2 недели побеги укореняются и готовы к высадке в грунт (фиг. 5). Этот процесс можно повторять неоднократно (5 6 раз), используя жизнеспособность каллусной ткани, образовавшейся после первой имплантации почек (фиг. 5). Через 2 недели после пересадки этой каллусной ткани на свежую среду зарождаются новые почки и регенеранты (фиг. 7). Результаты примера 2 приведены в табл. 1, 2. Пример 3. Берут верхушечные и боковые черенки из донорных растений стевии размером 10 15 мм и стерилизуют их при помощи 0,1% диоцида 3 мин и 0,1% сулемы 2,5 мин, и промывают в 3-х порциях стерильной воды. Затем из них вычленяют верхушечные почки с небольшими низлежащими тканями размером 0,2 - 0,3 мм и помещают в среду МС, содержащую тиамин 0,5, пиридоксин 0,5, никотиновую кислоту 1, сахарозу 20000, агар 8000, которая дополнительно содержит фитогормоны ИУК 2,0 мг/л, БА 2,0 мг/л и ГК 2,0 мг/л. Экспланты выдерживают в условиях относительной влажности 70% фотопериоде 16 ч, освещении люминесцентными лампами ЛБ-80 при температуре 25 26oC. Через 2 недели из эксплантированной почки вырастает побег с каллусной тканью на базальной части (фиг. 1). Затем через 1 неделю увеличивается каллусная ткань и зарождается большое количество почек и регенерантов (фиг. 2). Через 1 неделю происходит сильный рост регенерантов с корнеобразованием у части из них (приблизительно 20%), пригодных для посадки сразу в грунт (фиг. 3). Оставшиеся регенеранты черенкуют и пересаживают в среду МС (фиг. 4) с содержанием фитогормонов мг/л: ИУК 5, ГК 2. Через 2 недели побеги укореняются и готовы к высадке в грунт (фиг. 5). Этот процесс можно повторять неоднократно (5 6 раз), используя жизнеспособность каллусной ткани, образовавшейся после первой имплантации почек (фиг. 5). Через 2 недели после пересадки этой каллусной ткани на свежую среду зарождаются новые почки и регенеранты (фиг. 7). Результаты примера 3 приведены в табл. 1, 2. Эффект комплекса фитогормонов, входящих в состав основной среды МС для микроразмножения стевии, показан в табл. 1. Концентрация и соотношение фитогормонов, внесенных в основную среду МС для укоренения растений-регенерантов, даны в табл. 2. Из результатов табл. 1, 2 следует, что заявляемый способ микроразмножения стевии позволяет в течение 4 6 недель получить из одного экспланта до 250 растений-регенерантов, т.е. коэффициент размножения 1:250, а из одного растения в среднем до 10000, включая растения-регенеранты, как укоренившиеся после первого культивирования, так и нуждающиеся в последующем укоренении. Оставшийся каллус обладает способностью регенерировать новые растения при пассировании до 5 6 раз. Упрощение заявляемого способа заключается в использовании более мягкой стерилизации, после которой нет необходимости в снятии отрицательного действия стерилизующих веществ, заключающееся в пересадке эксплантов на свежую среду каждые 12 15 дней. Неоднократное использование каллусной ткани значительно упрощает и ускоряет способ, так как стерилизация и вычленение меристемных почек очень трудоемка. Использование эксплантов размером 1 3 мм позволяет увеличить выход безвирусного посадочного материала.ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯСпособ микроразмножения стевии Stevia rebaudiana L. включающий вычленение экспланта, стерилизацию его, культивирование на питательной среде Мурасиге Скуга, содержащей макро- и микроэлементы, витамины, сахарозу, агар и фитогормоны, получение регенерантов, микрочеренкование, доращивание, укоренение и пересадку растений-регенерантов в грунт, отличающийся тем, что в качестве экспланта вычленяют терминальные и/или пазушные почки с низлежащими тканями стебля размером 1 3 мм, стерилизацию проводят 0,1%-ным раствором диоцида в течение 3 мин и 0,1%-ным раствором сулемы в течение 2,5 мин, культивирование осуществляют на питательной среде Мурасиге и Скуга, содержащей фитогормоны ИУК 0,1 0,3 мг/л, бензиладенин 0,5 2,0 мг/л и гибберелловую кислоту 0,5 2,0 мг/л, культивируют экспланты в течение 4 5 недель до образования укоренившихся pacтений-регенерантов, неукоренившихся регенерантов и каллусной ткани, после чего отделяют растения-регенеранты и высаживают их в грунт, а неукоренившиеся регенеранты микрочеренкуют и переносят для укоренения на питательную среду Мурасиге Скуга, содержащую 2 6 мг/л индолилуксусной кислоты и гибберелловую кислоту 1 2 мг/л, а каллусную ткань помещают на исходную питательную среду для дальнейшего культивирования до получения регенерантов.Популярные патенты: 2296457 Устройство для магнитно-импульсной обработки растений ... соединен с первыми выводами индикатора напряжения, первого накопительного конденсатора и первой катушки индуктора, второй вывод которой соединен с первым выводом первого ключа, управляющий вход которого подключен к выходу первого усилителя-формирователя, второй усилитель-формирователь, выходом соединенный с управляющим входом второго ключа, пульт управления, подключенный к управляющему входу цифрового таймера, выход которого через элемент гальванической развязки соединен с управляющим входом третьего ключа, а через последовательно соединенные первые элемент НЕ и одновибратор соединен с входом блока звуковой сигнализации, задающий генератор, выходом соединенный с входом цифрового ... 2288561 Устройство для предпосевной обработки семян растений ... и сокращаются сроки сохранности семян после такой обработки.Известно устройство для предпосевной обработки семян растений плазмой газового разряда (см. патент США №5281315, МПК H 05 F 3/00, опубликован 25.01.1994), включающее соединенную с вакуумной системой плазменную камеру, внутри которой установлены плоские электроды, подключенные к высокочастотному генератору. К плазменной камере подсоединены емкости для неорганического газа. Между электродами установлен неглубокий лоток для размещения партии семян растений. В камеру напускают неорганический газ или смесь неорганических газов до давления от 0,05 Торр до 5,0 Торр и создают между электродами низкотемпературную плазму ... 2152151 Гербицидная водорастворимая гранулированная композиция ... композиция, которая, по существу, полностью растворима в воде и стабильна при хранении. Другим объектом настоящего изобретения является сельскохозяйственная композиция, обладающая экологически желаемыми характеристиками и безопасная и удобная для применения фермерами, операторами и пользователями. Эти и другие объекты и признаки изобретения станут более ясными из подробного описания, представленного далее. Настоящее изобретение относится к твердой водорастворимой гербицидной композиции, которая содержит имидазолиноновый гербицид сам по себе или в сочетании со вторым гербицидом и основанием, где основание предпочтительно присутствует в соотношении от около 0,9 до 2,0 мольных ... 2019090 Самонапорная оросительная система ... русла опорожняется от воды и в этом случае вода опустится ниже клапана 28 с емкостями 29 и 30, и клапан 28 займет положение ближе к вертикальной оси (фиг.20). В этом случае отсутствует мертвая точка, так как моменты меняются, а длина рычага со стороны балансирного груза 39 остается равной l4, причем длина рычага со стороны клапана 28 сокращается до величины l5-l4. Отсюда действующие силы при подходе к мертвой точке В определяются Pгр= ,, где Ргр - сила, действующая от балансирного груза; Pв= , , где Рв - сила, действующая от веса клапана и веса воды в емкости. Условием перехода (переключения) через мертвую точку будет Рв > Ргр, или > .. Отсюда требуемый вес ... 2201910 Устройство для ферментационной обработки жидкого навоза ... и содержащих вращающиеся лопасти, воздухоподводящих устройств, расположенных под вращающимися устройствами, передающих устройств и фильтрующих устройств, расположенных в верхней части аппарата. Известен также аппарат для сбраживания экскрементов животных в аэробных условиях (заявка WО 98/51644). Указанный аппарат представляет собой полый цилиндр, вращающийся вокруг продольной оси и разделенный, по меньшей мере, на два отделения с помощью перегородки, идущей практически по всей длине. Недостатком всех указанных устройств следует признать их непригодность для переработки навоза сельскохозяйственных животных и помета птиц, содержащих менее 10-15% твердой фазы. Известно (SU, ... |
Еще из этого раздела: 2413409 Способ и устройство для уплотнения убранной массы для получения силоса 2487516 Почвообрабатывающая машина 2275801 Способ выращивания рыбы в рисовых чеках (варианты) 2141182 Культиватор 2464769 Машина для прессования тюков с вязальным устройством 2274986 Способ посева семян трав и кустарников для создания пастбищ на опустыненных землях и почвообрабатывающее орудие для его осуществления 2482663 Способ мелиорации почвы рисовой оросительной системы к посеву риса 2427999 Способ повышения плодородия мерзлотных засоленных почв в условиях криолитзоны 2238970 Штамм mycelia sterilia лх-1-продуцент комплекса биологически активных веществ, обладающих рострегуляторными свойствами 2051971 Способ определения биологической активности -эндотоксинов различных патотипов bacileus thuringiensis |
Изобретения в сельском хозяйстве
Обработка почвы в сельском и лесном хозяйствах
Посадка, посев, удобрение
Уборка урожая, жатва
Обработка и хранение продуктов полеводства и садоводства
Садоводство, разведение овощей, цветов, риса, фруктов, винограда, лесное хозяйство
Новые виды растений или способы их выращивания
Производство молочных продуктов
Животноводство, разведение и содержание птицы, рыбы, насекомых, рыбоводство, рыболовство
Поимка, отлов или отпугивание животных
Консервирование туш животных, или растений или их частей
Биоцидная, репеллентная, аттрактантная или регулирующая рост растений активность химических соединений или препаратов
Хлебопекарные печи, машины и прочее оборудование для хлебопечения
Машины или оборудование для приготовления или обработки теста
Обработка муки или теста для выпечки, способы выпечки, мучные изделия
|
|
||