Питательная среда для выращивания культуры ткани раувольфии змеиной - продуцента алкалоидовПатент на изобретение №: 2081561 Автор: Воллосович А.Г., Васильев Ю.Д., Голынкин В.А., Амбросов В.А., Богданова Т.В. Патентообладатель: Санкт-Петербургский химико-фармацевтический институт, Малое предприятие "Биоком" Дата публикации: 20 Июня, 1997 Адрес для переписки: подача заявки12.07.1994 публикация патента20.06.1997 Изображения Использование: биотехнология, в частности при культивировании растительной ткани культуры раувольфии змеиной - продуцента алкалоидов. Питательная среда содержит микро- и макроэлементы, витамины и другие добавки при указанном соотношении компонентов. 1 табл. ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУИзобретение относится к биотехнологии растительных клеток и касается питательной среды для выращивания культуры ткани с целью получения лекарственных препаратов. Известна питательная среда [1] для выращивания культуры ткани раувольфии продуцента алкалоидов, имеющая следующий состав, в мг/л: KNO3-1500-2000; NH4NO3-1300-1800; MgSO47H2O-300-400; CaCl2-320-450; KH2PO4-120-200; NaEDTA-90-100; FeSO47H2O-25-35; H3BO3-5,5-8,0; KJ-0,5-0,9; MnSO45H2O-20,0-25,0; ZnSO44H2O-10,0-17,0; Na2MoO42H2O-0,2-0,3; CuSO45H2O-0,01-0,03; CoCl26H2O-0,01-0,03; инозит - 60-80; тиамин-1,0-1,5; сахароза-50000; агар-агар-65000. Среда не обеспечивает достаточно высокого выхода биомассы и содержания в ней алкалоидов. Наиболее близкой к заявленной среде является питательная среда [2] для выращивания культуры ткани раувольфии продуцента алкалоидов, имеющая следующий состав, в мг/л: Ca(NO3)24H2O-800-1050; MgSO47H2O-1100-1300; KNO3-200-400; NH4NO3-2400-2500; (NH4)2SO4-200-500; NH4Cl-100-150; (NH4)2 HPO4-250-300; NH4H2PO4 -150-200; FeSO47H2O-27-34; NaEDTA-37-100; H3BO3 9,3-12,4; MnSO45H2O-22-23; ZnSO44H2O 1,7-8,6; Na2MoO42H2O 0,2-0,3; CuSO45H2O-0,015-0,025; CoCl26H2O 0,075-0,125; KJ 0,83-0,90; инозит 100-80; тиамин 1-1,5; агар-агар 65000; сахароза 90-100000. Соотношение и количество ионов, обеспечивающих рост культуры на этой среде составляет, в мг/л: K++-78-156; Ca++-130-170; PO4----300-382; Mg++-110-130; SO4---570-870; NO3--2270-2681; NH+-686-833. Среда не обеспечивает достаточно высокого выхода биомассы и содержания в ней алкалоидов. Задача изобретения состоит в увеличении выхода биомассы, содержания в ней алкалоидов и ускорения их биосинтеза. Задача достигается тем, что культивирование ткани производится на среде следующего состава (мг/л): KH2PO4-300-500; K2HPO43H2O-300-500; (NH4)2SO4-800-1000; NH4NO3 2500-3800; MgSO47H2O 1000-1500; Ca(NO3)24H2O - 1000-2000; NH4Cl 100-200; FeSO44H2O 60-80; NaEDTA - 100-200; H3BO3 10-12; KJ 700-1000; CoCl26H2O - 800-1000; NaMoO42H2O 0,2-0,3; MnSO45H2O - 0,22-0,23; CuSO45H2O 0,015-0,025; ZnSO44H2O - 1,7-8,6; тиамин 1-1,5; агар-агар 65000; сахароза 120000-130000. Отличительным признаком предложенной среды является новое содержание ионов, а именно: K+ -160-250; Ca++-180-200; PO4----370-480; Mg++ -110-130; SO4---1000-1250; NO3--2870-3450; NH4+ 1150-1320 и повышенное содержание сахарозы в среде 120000-130000. Изобретение иллюстрируется следующими примерами. Пример 1. Готовят питательную среду следующего состава (мг/л): Ca(NO3)24H2O 900; MgSO47H2O 1100; NH4NO3-3000; (NH4)2SO4- 800; KH2PO4- 350; K2HPO43H2O -240; FeSO47H2O 80; NaEDTA 100; H3 BO3- 10,5; MnSO45H2O 16; ZnSO44H2O 10; Na2MoO42H2O 0,25; CuSO45H2O 0,02; CoCl26H2 O 0,125; KJ 0,83; тиамин 1,0; агар-агар 65000; сахароза 120000. Соотношение ионов и их количество, обеспечивающие рост культуры на этой среде, составляет, в мг/л: K+ 160; Ca++-180; PO4----370; Mg++-110; SO4---1000; NO3--2870; NH4+- 1150. Высаживают биомассу в возрасте 28-32 суток в культуральные емкости на 250 мл, содержащие 125 мл питательной среды. Биомассу высушивают на 60-е сутки. Выход воздушно-сухой биомассы на среде-прототипе составил, в г/л: 40,0 2,1, а на новой среде - 47,02.0; выход алкалоидов группы индолина в на среде-прототипе 1,80,12, на новой среде 2,00,11. Выход алкалоидов группы индолина в мг на л среды составил: на среде-прототипе-720; на новой среде-1220. Пример 2. Готовят питательную среду следующего состава (мг/л): Ca(NO3)24H2O 1200; MgSO47H2O 1200; NH4NO3- 3400;(NH4)2SO4- 900; KH2PO4- 375; K2HPO43H2O 280; FeSO47H2O 80; NaEDTA 100; H3BO3 10,5; MnSO45H2O 16; ZnSO44H2O 10; Na2MoO42H2O 0,25; CuSO45H2O 0,02; CoCl26H2O 0,125; KJ 0,83; тиамин 1,0; агар-агар 65000; сахароза 125000. Соотношение ионов и их количество, обеспечивающее рост культуры на этой среде, составляет, в мг/л: K+-200; Ca++-210; PO4--- 430; Mg++-120; SO4---1120; NO3- 3150; NH4+-1280. Высаживают биомассу в возрасте 28-32 суток в культуральные емкости на 250 мл, содержащие 125 мл питательной среды. Биомассу высушивают на 60 сутки. Выход воздушно-сухой биомассы на среде-прототипе составил в мг/л 40,02,1, на новой среде - 55,12,0. Содержание алкалоидов группы индолина при выращивании на среде-прототипе составило в 1,80,12, а на новой среде 3,20,18. Выход алкалоидов группы индолина в мг/л среды составил на среде-прототипе 720, а на новой среде 1532. Пример 3. Готовят питательную среду следующего состава, в мг/л: Ca(NO3)24H2O 1500; MgSO47H2O 1300; NH4NO3-3800; (NH4)2SO4 1000; KH2PO4 400; K2HPO43H2O -320; FeSO47H2O 80; NaEDTA 100; H3BO3 10,5; MnSO45H2O 16; ZnSO44H2 O 10; Na2MoO42H2O 0,25; CuSO45H2O 0,02; CoCl26H2O 0,125; KJ 0,83; тиамин 1,0; агар-агар 65000; сахароза 130000. Состав ионов и их количество, обеспечивающее рост культуры на этой среде, составляет, в мг/л: K+-250; Ca++-240; PO4----480; Mg++-130; SO4---1250; NO3--3450; NH4+-1320. Биомассу высаживают в возрасте 28-32 суток в культуральные емкости на 250 мл, содержащие 125 мл питательной среды. Биомассу высушивают на 60 сутки. Выход воздушно-сухой биомассы в г/л среды на среде-прототипе составил 40,02,1, а на новой среде 55,12,0. Выход алкалоидов группы индолина в на среде-прототипе составил 1,80,12, а на новой среде 55,12,0. Выход алкалоидов группы индолина в мг/л на среде прототипе составил 720, а на новой среде -1320. Пример 4. Готовят питательную среду следующего состава, в мг/л: Ca(NO3)24H2O 1200; MgSO47H2O 1300; NH4NO3- 3400; (NH4 2SO4- 1000; KH2PO4- 370; K2HPO43H2O 320; FeSO47H2O 80; NaEDTA 100; H3BO3- 10,5; MnSO45H2O 16; ZnSO44H2O 10; Na2MoO42H2O 0,25; CuSO45H2O 0,02; CoCl26H2O 0,125; KJ 0,83; тиамин 1,0; агар-агар 65000; сахароза 125000. Соотношение ионов и их количество, обеспечивающее рост культуры на этой среде, составляет, в мг/л: K+-200; Ca++-200; PO4----430; Mg++-130; SO4---11220; NO3- -1280. Высаживают биомассу в возрасте 28-32 суток в культуральные емкости на 250 мл, содержащие 125 мл среды. Снимают динамику роста и накопление алкалоидов группы индолина на новой среде в сравнении со средой прототипом. Данные приведены в таблице N 1. Как видно из данных таблицы, оптимальный выход алкалоидов группы индолина и прирост биомассы на новой среде отмечался на 60-65 сутки роста, а на среде прототипе не ранее 70 суток. Таким образом, новая среда позволяет увеличить выход биомассы на 20% содержание в ней алкалоидов группы индолина на 59% по отношению к сухой биомассе и на 85% из расчета в мг/л среды. Период роста на новой среде сокращается на 10 суток по сравнению со средой-прототипом. Источники информации 1. Murachige T. Skoog F. A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures. Physiol. plant, 1962 Vol.15, N 3, P.473-475. 2. Авторское свидетельство СССР N 1167895, М. кл C 12 N 5/02. 1985.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯПитательная среда для выращивания культуры ткани раувольфии змеиной - продуцента алкалоидов, содержащая Ca(NO3)2 4H2O, MgSO4 7H2O, NH4NO3, (NH4)2SO4, FeSO4 7H2O, Na ЭДТА, H3BO3, MnSO4 5H2O, ZnSO4 4H2O, Na2MoO4 2H2O, CuSO4 5H2O, CoCl2 6H2O, KJ, тиамин, агар-агар, сахарозу и воду, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит KH2PO4 и K2HPO4 3H2O при следующем соотношении компонентов, мг/л: Ca(NO3)2 4H2O 900 1500 MgSO4 7H2O 1100 1300 NH4NO3 3000 3800 (NH4)2SO4 800 1000 FeSO4 7H2O 80 Na ЭДТА 100 H3BO3 10,5 MnSO4 5H2O 16,5 ZnSO4 4H2O 10,0 Na2MoO4 2H2O 0,25 CuSO4 5H2O 0,02 CoCl2 6H2O 0,125 KJ 0,83 KH2PO4 370 400 K2HPO4 3H2O 240 320 Тиамин 1,0 Агар-агар 6500 Сахароза 120000 130000 Вода ОстальноелПопулярные патенты: 2440708 Комбинированное устройство для ротационного внутрипочвенного рыхления ... в ротационном щелерезе 1 изливается в почву и перемешивается с ней почвенными фрезами 7.Использование новых элементов в виде рампы 3, рыхлящих пальцев 4 с подшипниками 5 вала фрезерователя 6, каналом 8 для смазки подшипника 5, канала 12 для смазки открытой зубчатой передачи в ротационном щелерезе 1 позволяет производить при движении устройства в почве поделку щелей для поглощения воды и выполнять фрезерование внутренних слоев почвы с высокой надежностью, высокой долговечностью устройства и меньшими затратами энергии, т.к.:- снижается тяговое сопротивление за счет комбинации предварительного пассивного рыхления (скалывания) почвы рыхлящими пальцами рампы перед фрезерованием, ... 2121252 Агротранспортная система ... 11, вдоль отверстия (канала) 12 выполнен паз 13. На рельсе 7 установлены токопроводы 14, подключенные к источнику тока (не показан), который токосъемниками 15 подается к приводам обрезиненных шкивов 16, установленных в сегментах 17 (откидных), взаимосвязанных осью 18 и упругим элементом 19. Тяги 20 взаимосвязаны с приводами сегментов 17 (не показаны). Последовательно с приводом тяговым слева и справа от рельса 7 установлены пневмоколеса 21 шасси транспортного средства. В корпусе аппарата 22 конические проемы 23, а он снабжен поворотными рулями 24 и в плане может иметь форму овала. Для расширения возможностей по его бортам могут быть расположены вертолетные винты 25. На фиг. ... 2498561 Способ тандемного возделывания сельскохозяйственных культур для повышения производства пищевых зерновых культур ... с последующей горчицей или наоборот могли быть приняты к возделыванию в зимнем сезоне раби Индо-Гангских равнин для повышения производства данных продуктов. Данная концепция не пришла на ум специалистам в области возделывания и селекции пшеницы и, насколько известно, отсутствует сообщение о тандемном возделывании пшеницы при природных сезонных изменениях агроклиматов на площадях, где практикуется разведение пшеницы. Для тандемного возделывания культур сорта пшеницы и горчицы должны проявлять свойства цветения в условиях длинного или короткого дня, устойчивость к градиентам температуры и достигать более раннего созревания чем обычное. Желаемые характеристики фенологической и ... 2384065 Инсектоакарицидное средство ... с распылительной насадкой для нанесения препарата в виде спрея. Флакон держат вертикально, направляя распыление спрея с расстояния 10-25 см против роста шерсти (приподнимая длинную шерсть), при необходимости обрабатывают амуницию и одежду животного (попона и т.п.). Обработка производится перед прогулкой в местах с высоким риском атак насекомых (в особенности клещей) из расчета: для кошек и собак - 2-3 мл на кг веса, для лошадей 60-120 мл на полную обработку. При обработке учитывали, что одно нажатие распылительного устройства спрея соответствует 0,7 мл препарата. Необходимо избегать попадания в глаза, слизистые, открытые раны, поэтому в этих местах распределять средство следует с ... 2310308 Способ определения выполненности семян сельскохозяйственных культур и устройство для его осуществления ... по авторскому свидетельству СССР №1667667, А01С 1/00, 1988 [2], при котором производится измерение длины, ширины, площади и периметра рентгенопрозрачных частей семян и расчет отношения квадрата периметра Р к площади S по формуле К недостаткам данного способа следует отнести трудоемкость, многооперационность и длительность проведения эксперимента; необходимо применение сложного, дорогостоящего и небезопасного для здоровья персонала рентгеноскопического оборудования. Кроме того, абсолютные значения отношения (2) всегда больше единицы (по данным авторов - 1,31...69800), что логически не увязывается с существом широко используемого в практике понятия выполненности семян. Контур ... |
Еще из этого раздела: 2144756 Селекционная сеялка для посева семян в кассеты 2420949 Способ оценки потенциальной урожайности семянок сафлора красильного 2169462 Улей (варианты), способ его сборки и способ круглогодичного содержания в нем пчел 2275804 Способ повышения продуктивности птицы 2241327 Многоопорная дождевальная машина 2274986 Способ посева семян трав и кустарников для создания пастбищ на опустыненных землях и почвообрабатывающее орудие для его осуществления 2265314 Устройство системы зашторивания теплиц с регулируемым ходом 2150199 Способ закрепления элемента рыболовной снасти, выполненного с внутренней полостью, к леске 2384988 Способ и устройство для управления сельскохозяйственной машиной 2200377 Сельскохозяйственный агрегат |
Изобретения в сельском хозяйстве
Обработка почвы в сельском и лесном хозяйствах
Посадка, посев, удобрение
Уборка урожая, жатва
Обработка и хранение продуктов полеводства и садоводства
Садоводство, разведение овощей, цветов, риса, фруктов, винограда, лесное хозяйство
Новые виды растений или способы их выращивания
Производство молочных продуктов
Животноводство, разведение и содержание птицы, рыбы, насекомых, рыбоводство, рыболовство
Поимка, отлов или отпугивание животных
Консервирование туш животных, или растений или их частей
Биоцидная, репеллентная, аттрактантная или регулирующая рост растений активность химических соединений или препаратов
Хлебопекарные печи, машины и прочее оборудование для хлебопечения
Машины или оборудование для приготовления или обработки теста
Обработка муки или теста для выпечки, способы выпечки, мучные изделия
|
|
||