Изобретения в сфере сельского хозяйства, животноводства, рыболовства

 
Изобретения в сельском хозяйстве Обработка почвы в сельском и лесном хозяйствах Посадка, посев, удобрение Уборка урожая, жатва Обработка и хранение продуктов полеводства и садоводства Садоводство, разведение овощей, цветов, риса, фруктов, винограда, лесное хозяйство Новые виды растений или способы их выращивания Производство молочных продуктов Животноводство, разведение и содержание птицы, рыбы, насекомых, рыбоводство, рыболовство Поимка, отлов или отпугивание животных Консервирование туш животных, или растений или их частей Биоцидная, репеллентная, аттрактантная или регулирующая рост растений активность химических соединений или препаратов Хлебопекарные печи, машины и прочее оборудование для хлебопечения Машины или оборудование для приготовления или обработки теста Обработка муки или теста для выпечки, способы выпечки, мучные изделия

Способ получения аксеничной культуры высших водных растений

 
Международная патентная классификация:       A01G

Патент на изобретение №:      2390121

Автор:      Селиванов Николай Юрьевич (RU), Селиванова Ольга Геннадьевна (RU), Галицкая Анна Алексеевна (RU), Игнатов Владимир Владимирович (RU)

Патентообладатель:      Учреждение Российской академии наук Институт биохимии и физиологии растений и микроорганизмов РАН (ИБФРМ РАН) (RU)

Дата публикации:      27 Мая, 2010

Начало действия патента:      6 Марта, 2009

Адрес для переписки:      410000, г.Саратов, главпочтамт, а/я 62, О.И. Куприяновой

Изобретение относится к биохимии, физиологии и биотехнологии растений. Способ включает поверхностное воздействие стерилизующим агентом на исходную культуру. При этом воздействие осуществляют погружением исходной культуры в стерилизующий агент, в качестве которого используют йод-поливинилпирролидон. Воздействие осуществляют в течение 5-15 мин. Стерилизующий агент может содержать от 9% до 12% активного йода. Конечная концентрация свободного йода в стерилизующем агенте составляет 0,02-0,03%. В качестве исходной культуры также берут целое вегетирующее высшее водное растение. 3 з.п. ф-лы, 2 табл.

Изобретение относится к биохимии, физиологии и биотехнологии растений и может быть использовано в технологии получения аксеничных культур высших водных растений, например семейства рясковых, при помощи поверхностной стерилизации.

Высшие водные растения, в частности аксеничные культуры высших водных растений, применяются в качестве модельного объекта в лабораторных исследованиях, а также в биотехнологии для последующей трансформации и культивирования в качестве продуцента ценных продуктов (белков, полисахаридов, пигментов, метаболитов) и биологически активных соединений. В естественных условиях поверхность водных растений ассоциирована с эпифитной микрофлорой, тогда как (в большинстве случаев) биотехнологические протоколы предполагают работу с аксеничной культурой - моновидовой популяцией растений, свободной от поверхностной и сопутствующей микрофлоры.

Известен способ получения аксеничной культуры Lemna aequinoctialis, включающий поверхностное воздействие стерилизующим агентом на исходную культуру, при этом воздействие осуществляют погружнием исходной культуры в стерилизующий агент, в качестве которого последовательно используют раствор хлорида ртути и 50% этанола /L.Yin, Y.Zhou, X.Fan, R.Lu Inductin of Phytohelatins in Lemna aequinoctialis in Response to Cadmium Exposure // Bull.Eniron.Contam. Toxicol, 2002, V.68; P.5-568/. Однако в связи с особенностями состава и строения эпидермальных тканей большинство водных растений - макрофитов очень чувствительны к обработке этанолом, нарушающей поверхностный защитный гидрофобный слой. Это приводит к значительному снижению жизнеспособности растений.

Наиболее близким к заявляемому , является способ стерилизации растений из семейства рясковых, предложенный в 1980 г. английскими авторами D. Bowker, A. Duffield, P. Denny /David W Bowker, Antony N. Duffield, Patrick Denny. Methods for the isolation, sterilization and cultivation of Lemnaceae // Freshwater Biology, 1980, V.10; P.385-388/. По данному методу в качестве стерилизующего агента используют раствор гипохлорита натрия (содержание доступного хлора 10-14%). Растения, отобранные для стерилизации (около 200 штук), промывают стерильной дистиллированной водой (минимальный объем 500 мл), затем инокулируют в подготовленную аликвоту дезинфектанта. Обработку дезинфицирующим агентом проводят до визуально выраженного побеления листецов, после чего каждое растение отдельно переносят в питательную среду для выявления в процессе культивирования наличия бактериальных и водорослевых контаминаций.

Данный способ обработки имеет низкую эффективность и не обеспечивает стабильной жизнеспособности единичных выживших поверхностно стерилизованных аксеничных растений. Кроме того, следует особо отметить высокую токсичность гипохлорита в отношении целого ряда высших водных растений, приводящую к потере репродуктивной способности и/или их быстрой гибели. В связи с этим все описанные в литературе методы поверхностной стерилизации высших растений малопригодны для обработки целых растений и в основном применяются для стерилизации эксплантов (тканевых фрагментов либо семян) растений и последующего получения каллусных культур с целью их дальнейшей регенерации, что значительно увеличивает затрачиваемое время и усложняет процедуру.

Задачей данного изобретения является получение аксеничной культуры высших водных растений путем поверхностной стерилизации целых растений, минуя этап получения каллуса и без дополнительной обработки антибактериальными препаратами.

Технический результат заключается в повышении выживаемости и процента выхода растений, свободных от поверхностной и сопутствующей микрофлоры, при упрощении технологии обработки.

Поставленная задача решается тем, что в способе получения аксеничной культуры высших водных растений, включающем поверхностное воздействие стерилизующим агентом на исходную культуру, при этом воздействие осуществляют погружением исходной культуры в стерилизующий агент, согласно изобретению, в качестве стерилизующего агента используют йод-поливинилпирролидон (йодоповидон), при этом воздействие осуществляют в течение 5-15 мин.

Кроме того, в качестве стерилизующего агента в данном изобретении используется йод-поливинилпирролидон (йодоповидон), содержащий от 9% до 12% активного йода (йодоповидон 30/06; кат. 25655-41-8, производства BASF, Германия) с конечной концентрацией свободного йода 0,02-0,03%. В качестве исходной культуры берут популяцию (группу) целых вегетирующих высших водных растений.

Из уровня техники известно использование в качестве стерилизующего агента йод-поливинилпирролидона (йодоповидона). В частности, известен способ получения аксеничных эксплантов морских водорослей, который включает предварительную обработку образцов 0,1-1%-ным раствором жидкого бытового детергента (0,1-1% domestic liquid detergent) в течение 5-10 мин, последующую инкубацию в 0,1%-2% йодоповидоне в течение 2-7 мин. Исключение бактериальных контаминаций достигается обработкой смесью антибиотиков в течение длительного периода времени (от 4 до 96 ч). Смесь антибиотиков включает пенициллин, стрептомицина сульфат, канамицин, нистатин и неомицин (1-5%) в стерильной морской воде / Patent number: 6858430, Filing date: Sep 7, 2000; Issue date: Feb 22, 2005; Inventors: Chennur Radhakrishna Reddy, Om Prakash Mairh, Gurn Rajakrishna Kumar, Kuruppan Eswaran, Peddi Venkata Subba Rao, Kalpana Harish Mody, Pushpito Kumar Ghosh; Application number: 6858430; U.S. Classification - 435/420: International Classification - C12N 005/00; C12N 005/02/. Однако данный способ предназначен для получения аксеничных эксплантов бурых морских водорослей с учетом их морфологических и физиолого-биохимических особенностей и не может быть перенесен на высшие водные растения, в частности представителей семейства рясковых. Особо следует отметить, что использованные авторами коммерческие препараты йод-поливинилпирролидона (йодоповидона) не обеспечивают полного освобождения от микробных, грибных и иных контаминаций и требуют дополнительной обработки смесями антибиотиков различного спектра действия. Эти смеси являются крайне токсичными для высших водных растений и приводят к значительному снижению их жизнеспособности и, следовательно, к снижению выхода аксеничных растений.

В заявляемом решении технический результат достигается за счет использования в качестве стерилизующего агента йодоповидона 30/06, маркировка характеризует степень полимерности поливинилпирролидона и допустимые потери активного йода в процентах. Параметрами, обеспечивающими данные свойства, являются особенности технологии синтеза препарата, защищенные рядом патентов.

Выбор стерилизующего агента основан на результатах проведенных экспериментов, в которых использовались растворы различных стерилизующих агентов, обычно применяемые в физиологии растений и смежных областях (см. таблица 1, которая демонстрирует эффективность использования дезинфектантов для стерилизации рясковых растений на примере растений вольфии бескорневой Wolffia arrhiza). Показано, что при проведении общепринятых процедур стерилизации вольфия оказалась неустойчивой к большинству стерилизующих агентов в рекомендуемых концентрациях. Применение же более низких концентраций было неэффективным, поскольку сохранялась сопутствующая микрофлора. Выбранный агент характеризуется высокой стабильностью и способностью сохранять длительное время активность по сравнению с другими препаратами, в т.ч. йодсодержащими. Иодоповидон 30/06 производства BASF, обладая широким спектром антимикробного действия, отличается высокой устойчивостью: его водные растворы устойчивы при температуре 41°C в течение 3 месяцев, потери йода в этих условиях составляют менее 5% (Техническая информация фирмы «BASF», 1997. - 21 с.). Использование в качестве стерилизующего агента других йодсодержащих препаратов, полученных по иным технологиям (Патент на изобретение DE 1028300, Патенты на изобретение US 2900305, 2826532, 3028300, 3898326), не обеспечивает заявленного результата, т.к. они демонстрируют быструю потерю активности йода.

Раствор йодоповидона 30/06 в заявляемом способе демонстрирует выраженный стерилизующий эффект, предположительно за счет адсорбции йод-поливинилпирролидонового комплекса к поверхности растений, где и локализуется эпифитная микрофлора, обеспечивая при этом высокую локальную концентрацию активного йода. Кроме того, к токсичному действию йода, помимо эпифитной бактериофлоры, крайне чувствительны большинство грибов и водорослей, особенно сине-зеленых, также зачастую ассоциированных с поверхностью водных растений. Важно отметить, что в отличие от раствора йода, поливинилпирролидон (йодоповидон), как полимер, действует поверхностно, без повреждения растительных тканей.

Способ заключается в том, что растения вольфии бескорневой (Wolffia arrhiza) промывают стерильной водой, затем обрабатывают 0,025% (в пересчете на свободный йод) стерилизующим раствором в течение не менее 5 мин при осторожном перемешивании. Затем 5-7 раз отмывают стерильной водой от стерилизующего агента и рассаживают на чашки Петри с минеральной полужидкой средой, обеспечивающей жизнедеятельность культуры. В качестве такой среды может быть использована, например, среда Гамборга В-5, разведенная в 5 раз и содержащая 0,8% агара (Serva). Все манипуляции с растениями проводят в стерильном боксе аналогично работе с бактериальными культурами, используя обожженную петлю. Были проведены эксперименты с использованием различной длительности обработки, результаты которых представлены в таблице 2. Из таблицы следует, что оптимальный результат достигается при обработке стерилизующим агентом в течение 5-15 мин.

Оценку эффективности метода стерилизации проводили следующим образом.

После 3-4 суток роста по результатам визуального анализа отбирали зеленые здоровые растения и пересаживали в пробирки, содержащие жидкую минеральную среду - по одному растению в каждую пробирку. Через 7 и 14 суток роста стерильность полученных культур проверяли, используя ряд селективных сред: минеральную среду с глюкозой, МПА, сусловый агар, а также МПА с глюкозой и среду Горбенко. Аксеничность растений вольфии бескорневой (Wolffia arrhiza) оценивали на твердых и полужидких средах по отсутствию роста бактерий, грибов и низших водорослей вокруг рассаженных одиночных растений, в высеянных аликвотах растительных гомогенатов и минеральных сред после культивирования растений.

Таблица 2 Дезинфектант и время обработки Первичный результат Конечный результат обработки - % аксеничных растений после 4 недель культивирования Йодоповидон 30/065 мин Выживание растений - 100% 56%Йодоповидон 30/0615 минВыживание растений - 100% 63%Йодоповидон 30/06 30 минВыживание растений - 80%95% Гипохлорит 5 минВыживание растений - 20%Микрофлора отсутствует, все растения побелели (погибли). Гипохлорит 15 мин Выживание растений - 15% Микрофлора отсутствует, все растения побелели (погибли).

Таким образом, заявляемый способ характеризуется получением аксеничной культуры целых высших водных растений без дополнительной обработки антибактериальными препаратами. Он позволяет обеспечить поверхностную стерилизацию целого растения, не вызывая при этом значительного угнетения жизненных функций. Подобный подход позволяет исключить трудоемкий и длительный этап получения эксплантов и их проведение через каллусную культуру с последующей регенерацией, что в значительной степени упрощает процедуру получения аксеничных культур и обеспечивает высокий и стабильный выход жизнеспособных растений.

Формула изобретения

1. Способ получения аксеничной культуры высших водных растений, включающий поверхностное воздействие стерилизующим агентом на исходную культуру, при этом воздействие осуществляют погружением исходной культуры в стерилизующий агент, отличающийся тем, что в качестве стерилизующего агента используют йод-поливинилпирролидон, при этом воздействие осуществляют в течение 5-15 мин.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что йод-поливинилпирролидон используют марки 30/06 производства BASF, содержащий от 9 до 12% активного йода.

3. Способ по п.1, отличающийся тем, что конечная концентрация свободного йода в стерилизующем агенте составляет 0,02-0,03%.

4. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве исходной культуры берут целое вегетирующее высшее водное растение.





Популярные патенты:

2391812 Способ выращивания растений в условиях защищенного грунта, устройство для выращивания растений в условиях защищенного грунта и сборно-разборный многоярусный стеллаж для выращивания растений в условиях защищенного грунта

... и/или севооборота параллельно с культивацией растений текущего оборота,- посадкой рассады следующего культуро- и/или севооборота с временным сдвигом относительно высаживания культивируемых растений текущего оборота, - использованием в качестве культивируемой культуры скороспелых сортов растений,- использованием в качестве культивируемой культуры сортов растений с высокой плотностью урожая и дружным созреванием плодов, - выращивание растений с максимальным коэффициентом полезного использования объемов и площадей сооружений защищенного грунта, - дополнительной подкормкой растений углекислотой, - дополнительным капельным орошением. Использование заявленного способа выращивания ...


2157064 Способ промышленного производства миниклубней картофеля в искусственном климате культивационного сооружения (фитотроне)

... корневой зоны снижали с 95 до 70% при активной аэрации всего объема корневой зоны. На этапе клубнеобразования лампы со спектром излучения от 550 до 650 нм заменяли на лампы со спектром излучения от 365 до 700 нм. Сбор миниклубней, достигших кондиционного размера, производили ежедневно. В конце вегетационного периода с каждого растения было снято в среднем по 122 миниклубня весом 5-7 г. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Способ промышленного производства миниклубней картофеля в искусственном климате культивационного сооружения (фитотроне), включающий размещение и фиксацию растений, создание управляемого воздействия на физиологические и фотосинтетические процессы на всех стадиях ...


2420060 Способ генетической трансформации растений селекционно-ценных образцов клевера лугового

... ...


2265444 Способ консервирования пантов

... панта. При хранении в холодильнике цвет внутренней структуры становится более темным, что связано с ухудшением качества продукции.Разделение пантов по массе на три группы позволяет оптимизировать продолжительность и температуру термообработок каждого конкретного панта, поскольку время прогрева зависит от массы панта. Чем меньше масса панта, тем менее продолжительный период требуется для удаления из него избыточной влаги и достижения базисной влажности, и наоборот. Благодаря оптимизации общей продолжительности и температуры термообработок улучшается качество конечного продукта, в частности цвет внутренней структуры.Выполнение термических обработок пантов при температуре ...


2056100 Доильный стакан

... к расширению сосковой трубки сверх номинального размера. При этом доильный стакан наползает на сосок, пережимая молочные протоки, ухудшая тем самым процесс молоковыведения. Для обеспечения полного выдаивания доильный стакан необходимо оттянуть вниз, выполнив операцию "машинное додаивание". Известен доильный стакан, включающий корпус с патрубком и расположенной в нем сосковой трубкой с присоском, состоящим из цилиндрической стенки и соединенного с ней плоского кольца, имеющего возможность поворота относительно последней (авт. св. СССР N 882487). Сосок животного всасывается внутрь сосковой трубки. Плоское кольцо поворачивается на стенке и образует воронку, которая облегает ...


Еще из этого раздела:

2242875 Энергосберегающий способ зимовки и содержания пчел на воле в однокорпусном улье усова

2488437 Способ получения микрокапсул пестицидов методом осаждения нерастворителем

2450501 Способ повышения плодородия почвы на склонах

2444885 Посевной агрегат

2200947 Способ количественной оценки лесопригодности почвогрунтов

2495556 Секционный отсекатель дозатора и сельскохозяйственный агрегат, содержащий его

2407282 Способ выращивания корнесобственных саженцев винограда и машина для его осуществления

2159721 Способ и устройство для крепления двигателя мотокультиватора

2271092 Сортировка барабанного типа

2178965 Картофелекопатель ручной мотыжный