Линия клеток кукурузы (zea mays l.)

Изображения

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к линии клеток кукурузы (Zea mays L.) - SV57. Каллус кукурузы гибрида Chines31xCateto Sulino Grosso подвергают температурному шоку 30С° в течение 2-х пассажей (1 пассаж 15 дней) и за счет способности каллуса к сомаклональной вариабельности провели селекцию линии клеток in vitro. Заявленная линия клеток кукурузы обладает высоким эмбриогенным потенциалом. 2 табл., 1 ил.

Изобретение относится к биотехнологии и может применяться для генетической трансформации, в клеточной селекции, а также для фундаментальных исследований в области физиологии растений.

Известна линия клеток кукурузы (Zea mays L.) A188, из которой получают эмбриогенный каллус, способный к пролиферации и органогенезу (Kamo К.К., Becwar M.R., Hodges Т.К. Regeneration Zea mays L. from embryogenic callus. // Bot. Gas. - 1985 - v.146 - is.3 - p.327-334) (Green G.E., Rhodes C.A. Hlant regeneration in tissue culture of maize. In William F.Sheridan Maize for biological research. Un Press, Grand Forks, ND, 1982, p.367-372).

Недостатками этой линии являются низкий эмбриогенный потенциал и наличие различного типа морфогенеза (одновременное образование эмбриогенного и неэмбриогенного каллуса, а также корней и регенерантов).

Прототипом данного изобретения является гибрид китайской клеточной линии кукурузы Chines 31 с латиноамериканской расой Cateto Sulino Grosso (Chines31xCateto Sulino Grosso) (Долгих Ю.И., Ларина С.Н., Шамина З.Б., Жданова Н.Е., Пустовойтова Т.Н. - 1994. Засухоустойчивость растений кукурузы, полученных из устойчивых к осмотическому действию полиэтиленгликоля клеточных линий. // Физиология растений, т.41, №6, с.853-858).

Недостатками этой клеточной линии являются низкий эмбриогенный потенциал и индекс роста каллуса, наличие различного типа морфогенеза (одновременное образование эмбриогенного и неэмбриогенного каллуса, а также корней и регенерантов), с неконтролируемым органогенезом, что снижает ее ценность как объекта в биотехнологических манипуляциях.

Задачей настоящего изобретения является получение новой линии клеток кукурузы, лишенной вышеуказанных недостатков, т.е. обладающей высоким эмбриогенным потенциалом, который характеризуется более высоким % зародышей, образовавших эмбриогенный каллус, и индексом роста каллуса, однородностью каллусных структур, т.е. образование только эмбриогенного каллуса, с контролируемым органогенезом.

Поставленная задача решена созданием новой линии клеток кукурузы SV57, которую получили следующим образом.

Каллус кукурузы гибрида Chines31xCateto Sulino Grosso подвергают температурному шоку 30 С° в течение 2-х пассажей (1 пассаж - 15 дней) и за счет способности каллуса к сомаклональной вариабельности проводят селекцию линии клеток in vitro, которые отличались высоким эмбриогенным потенциалом и индексом роста, однородностью морфогенеза (только эмбриогенный каллус), с контролируемым органогенезом.

Линия клеток кукурузы (Zea mays L.) - SV57 характеризуется следующими свойствами:

1) Высоким потенциалом образования эмбриогенного каллуса

Таблица 1. Сравнение эмбриогенных свойств упомянутых линий

2) Высоким индексом роста каллуса

Таблица 2. Индекс роста каллуса упомянутых линий.

3) Каллус представляет собой исключительно эмбриогенную ткань зернистой структуры, желтовато-зеленоватого цвета, культивируется при температуре 26 С°, влажности 70%, освещенности 2.000-3.000 лк при длине светового дня 16 часов (см. чертеж). Каллус получают из незрелых (10-12 дней после опыления) зародышей и выращивают в стерильных чашках Петри диаметром 90 мм на питательной среде Мурасиге-Скуга (Murashige Т., Skoog F. А revised medium for rapid growth and bioassays with tabacco tissue cultures. // Physiol. Plant. - 1962. - V.15. - P.473-497), содержащей 30 г/л сахарозы, 500 мг/л гидролизата казеина и 1 мг/л 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты (2,4-Д). Каллус пассируют каждые 2-3 недели.

4) Контролируемость органогенеза выражается в том, что обработка каллуса антибиотиком цефотаксимом стимулирует регенерацию каллуса.

Техническим результатом является то, что получена линия клеток кукурузы (Zea mays L.) - SV57, обладающая высоким эмбриогенным потенциалом, которая отличается от гибрида Chines31xCateto Sulino Grosso более высокими эмбриогенными свойствами и индексом роста каллуса. Кроме того, неожиданным образом оказалось, что линия клеток кукурузы SV57 обладает однородностью клеточных структур, т.е. только эмбриогенный каллус, с контролируемым органогенезом каллуса, что повышает ее ценность в биотехнологических манипуляциях.

Формула изобретения

Линия клеток кукурузы (Zea mays L.) - SV57, обладающая высоким эмбриогенным потенциалом.

MM4A - Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 16.12.2007

Извещение опубликовано: 27.07.2009        БИ: 21/2009