Способ консервации амниотической мембраны

Изобретение относится к медицине, может быть использовано для консервации донорской амниотической мембраны, предназначенной для трансплантации. В способе консервации амниотической оболочки, включающем забор плаценты в ходе кесарева сечения, очищенную от сгустков крови и остатков хориона, амниотическую мембрану, нарезанную трепаном на сегменты 28-30 мм, помещают в стерильные чашки Петри, замораживают при t -40°С, лиофилизируют до остаточной влажности 2-5% в течение 24 часов, затем герметично упакованные и промаркированные образцы амниотической мембраны стерилизуют -облучением (доза 25 КГр). Перед употреблением лиофилизированную амниотическую оболочку регидратируют в стерильном физиологическом растворе или растворе антибиотика в течение 40-60 минут. Способ обеспечивает повышение эффективности использования и увеличение сроков хранения консервированной амниотической мембраны при сохранении ее биопластических, противовоспалительных и антимикробных свойств.

(56) (продолжение):

CLASS="b560m"17.09.1987. AU 6140200 A1, 19.02.2001. ЕР 0070328 A1, 26.01.1983. WO 0108716 A1, 08.02.2001.

Изобретение относится к медицине, может быть использовано для консервации донорской амниотической мембраны, предназначенной для трансплантации.

Уже известней способ консервации амниотической оболочки в растворе ЛИПК, состоящем из цитрата натрия, глюкозы, синтомицина, винного спирта, бромида натрия, 10% раствора желатины и дистиллированной воды (Зубович B.C. Амниотические оболочки для лечения термических ожогов кожи у детей. Здравоохранение Белоруссии, 1963, №4, с.71-72), однако использование химических консервантов полностью нарушает биохимический состав и свойства нативной ткани.

Известен также способ консервации амниотической мембраны высушиванием над силикогелем на металлических рамках с предварительной обработкой 0,02% раствором хлоргексидина и раствором глицерола, что требует применения химических консервантов, значительных энерго- и трудозатрат, специального оборудования (патент РФ 2214091 С1, 09.04.2002).

Наиболее близким по технической сущности и достигаемому результату является способ консервации донорской амниотической мембраны путем глубокого замораживания (Каспаров А.А., Труфанов С.В. Использование консервированной амниотической мембраны для реконструкции поверхности переднего отрезка глазного яблока. Вестник офтальмологии, 2001, №3, с.45-47; Harminder S Dua, Azuaro-Blanco A. "Amniotic membrane transplantation" Brit. J. Ophthal. 1999, №83, р.748-752). Однако известный способ обладает недостатками. Прежде всего, глубокое замораживание на нитроцеллюлозной бумаге позволяет сохранять амниотическую мембрану очень ограниченное время (не более 1,5 месяцев). Недостатком данного способа является также необходимость сложных манипуляций с готовым трансплантатом перед использованием (размораживание, отделение от нитроцеллюлозной подложки).

Целью, на достижение которой направлено создание данного изобретения, является повышение эффективности использования и увеличение сроков хранения консервированной амниотической мембраны.

Поставленная цель достигается тем, что очищенные от сгустков крови и нарезанные на сегменты диаметром 28-30 мм кусочки амниотической мембраны помещаются в стерильные одноразовые чашки Петри, замораживаются при t - 40°, затем подвергаются лиофилизации в течение 24 часов, герметично упаковываются и маркируются.

Проведенный заявителем поиск по научно-техническим и патентным источникам информации и выбранный из перечня аналогов прототип позволили выявить отличительные признаки в заявленном решении, следовательно, заявленный способ удовлетворяет критерию изобретения "новизна". Проведенный заявителем дополнительный поиск известных решений с целью обнаружения в них признаков, сходных с признаками отличительной части формулы заявленного способа, и сравнения свойств заявляемого и известных способов консервации, обусловленных наличием в них указанных признаков, показал, что, во-первых, не все признаки отличительной формулы найдены в известных технических решениях, во-вторых, сопоставительный анализ свойств, обусловленных наличием некоторых отличительных признаков в известных решениях и заявленном способе, показал, что у заявленного решения проявляются свойства, не совпадающие со свойствами, проявляемыми указанными признаками в известных способах консервации амниотической мембраны, чем обуславливается достижение заявленного положительного эффекта, следовательно, заявленный способ консервации удовлетворяет критерию "изобретательский уровень".

Способ консервации амниотической мембраны осуществляют следующим образом. Амнион вместе с плацентой получают в ходе кесарева сечения в асептических условиях операционной от здоровых женщин, не получавших в период беременности и родов антибактериальных препаратов и обследованных стандартными методами на сифилис, ВИЧ инфекцию, гепатиты В и С. В лаборатории отделяют амниотическую оболочку от хориона тупым методом, промывают 3-кратно стерильным изотоническим физиологическим раствором от сгустков крови и слизи, просушивают с обеих сторон фильтровальной бумагой, трепаном выкраивают фрагменты диаметром 28-30 мм и помещают в стерильные одноразовые чашки Петри. Чашки Петри с амнионом замораживают при t - 40°C в морозильной камере, затем подвергают лиофилизации в течение 24 часов до остаточной влажности 2-5%. Затем герметично упакованные и промаркированные образцы амниотической мембраны стерилизуют -облучением (доза 25 КГр, наивысшая допустимая доза облучения - 35 КГр). Срок хранения консервированной описанным способом амниотической мембраны не менее 1,5 лет при комнатных условиях. Перед употреблением амниотическую оболочку необходимо регидратировать в стерильном физиологическом растворе или, по необходимости, в растворе антибиотика в течение 40-60 минут.

В предлагаемом техническом решении отсутствие предварительной обработки амниотической мембраны какими-либо химическими консервантами позволяет сохранить биохимическую структуру нативной ткани. Регидратация лиофилизированной амниотической оболочки растворами антибиотиков позволяет создать депо лекарственных препаратов, усиливающих положительное действие трансплантата на воспалительный процесс в роговице, что авторами подтверждено в клинических условиях. Данный метод в уровне техники не известен.

Пример 1.

Донорская амниотическая оболочка, консервированная по предлагаемому способу, хранилась в комнатных условиях в течение 1 месяца. Получено лабораторное подтверждение стерильности упакованного донорского материала.

Больной С. 29 лет, история болезни 8695/02. Диагноз: ОД Посттравматический кератоиридоциклит. Длительность заболевания - 2 недели. Острота зрения при поступлении в стационар ОД=0,05 н/к ОС=1,0.

На третий день от начала лечения, в связи со слабой положительной динамикой от проводимой консервативной терапии, на роговицу наложено биопокрытие из лиофилизированной амниотической оболочки. Перед операцией трансплантат был насыщен 2 мл 4% раствора гентамицина. В послеоперационном периоде продолжена консервативная терапия, субконъюнктивальные инъекции не применялись. В первый день после операции: боли купированы, блефароспазма практически нет, сохранялось незначительное слезотечение. Биопокрытие прозрачно, под ним ясно визуализируется инфильтрат в оптической зоне роговицы. Передняя камера средней глубины, влага прозрачная, гипопиона нет. Радужка спокойнее. Зрачок в медикаментозном мидриазе (8 мм). Глубжележащие отделы за флером. Седьмой день после операции, биопокрытие удалено ОД, почти спокоен, на месте инфильтрата формируется субэпителиальное помутнение. При окраске флюоресцеином отмечается единичное мелкоточечное прокрашивание свежего эпителия. Передняя камера средней глубины, влага прозрачная. Зрачок в медикаментозном мидриазе. Радужка структурная. Хрусталик прозрачен. Рефлекс с глазного дна розовый. Острота зрения при выписке ОД=с 0,3-0,4 н/к ОС=1,0.

Пример 2.

Донорская амниотическая оболочка, консервированная по предлагаемому способу, хранилась в комнатных условиях в течение 6 месяцев. Получено лабораторное подтверждение стерильности упакованного донорского материала.

Больная Б., 22 лет, история болезни 4598/03. Диагноз: ОД Кератоиридоциклит. OU Миопия средней степени. Длительность заболевания - 4 дня. Из анамнеза: Близорукость с 15 лет. Носит МКЛ Optima 55 около 7 лет. Последняя замена линз 10 месяцев назад. Периодически нарушала правила обработки линз. С момента начала заболевания продолжала пользоваться МКЛ.

При поступлении: visus ОД 0,03 с sph - 5,0 D=0,2.

ОС 0,2 с sph - 5,00 D=1,0.

На роговице в параоптической области на 9 часах округлый инфильтрат с нечеткими контурами и изъязвлением в центре, диаметром 4-5 мм. Передняя камера средней глубины, влага опалесцирует. Зрачок круглый, 2 мм. Радужка со стушеванным рисунком. Хрусталик прозрачен. Рефлекс с глазного дна розовый. При осмотре МКЛ, как влажных, так и сухих, выявляются множественные отложения, не удаляющиеся механическим путем. В отделении начата общая и местная консервативная терапия, включающая антибиотики, десенсибилизирующие средства. На пятый день лечения в связи со слабой положительной динамикой на роговицу наложено биопокрытие из лиофилизированной амниотической оболочки. Регидратацию консервированного трансплантата проводили стерильным изотоническим физиологическим раствором (2,0) в течение 40 минут. Операция и послеоперационный период - без осложнений.

Четвертый день после операции: ОД почти спокоен. Биопокрытие на роговице лежит хорошо. Под прозрачной амниотической оболочкой визуализируется нежное облаковидное субэпителиальное помутнение в зоне бывшего инфильтрата. Биопокрытие удалено.

Острота зрения при выписке ОД с 0,2 с sph-5,0 D=0,9-1,0.

Пример 3.

Донорская амниотическая оболочка, консервированная по предлагаемому способу, хранилась в комнатных условиях в течение 12 месяцев. Получено лабораторное подтверждение стерильности упакованного донорского материала.

Больной В. 45 лет, история болезни 8797/03, с диагнозом ОС язва роговицы. Острота зрения при поступлении в стационар ОС = правильная светороекция, ОД=1,0.

08.12.2003 (третий день от начала лечения), в связи со слабой положительной динамикой от проводимой консервативной терапии, на роговицу наложено биопокрытие из лиофилизированной амниотической оболочки. Перед операцией трансплантат был насыщен 2 мл 4% раствора гентамицина. В послеоперационном периоде продолжена консервативная терапия. В первый день после операции: боли купированы, блефароспазма практически нет. Биопокрытие прозрачно, под ним визуализируется обширный инфильтрат с изъязвлением в оптической зоне роговицы. Передняя камера средней глубины, влага прозрачная, гипопиона нет. Зрачок в медикаментозном мидриазе (8 мм). Биопокрытие удалено на десятый день после операции: ОС почти спокоен, на месте инфильтрата формируется помутнение, при окраске флюоресцеином отмечается единичное мелкоточечное прокрашивание свежего эпителия, неоваскуляризации нет. Передняя камера средней глубины, влага прозрачная. Зрачок в медикаментозном мидриазе. Радужка структурная. Хрусталик прозрачен. Рефлекс с глазного дна розовый. Острота зрения при выписке ОД = с 0,2-0,3 н/к ОС=1,0.

Несмотря на кажущуюся простоту способ консервации амниотической оболочки методом лиофилизации потребовал длительного изучения и не очевиден для среднего специалиста, работающего в этой области.

Способ консервации амниотической оболочки путем лиофилизации имеет большое социальное и экономическое значение, так как позволяет сохранить уникальные свойства амниотической мембраны длительное время без применения химических консервантов, создать банк трансплантатов.

Данный способ специалист может осуществить по описанию.

Формула изобретения

Способ консервации амниотической мембраны для использования в качестве трансплантационного материала в офтальмологии, включающий забор биологического материала, очистку амниотической оболочки от сгустков крови и остатков хориона, отличающийся тем, что предварительно нарезанные трепаном сегменты амниотической мембраны диаметром 28-30 мм помещают в стерильные чашки Петри, замораживают при t -40°С, лиофилизируют до остаточной влажности 2-5% в течение 24 ч, герметично упаковывают в стерилизационные пакеты, маркируют и стерилизуют -облучением в дозе 25 кГр, перед употреблением лиофилизированную амниотическую оболочку регидратируют в стерильном физиологическом растворе или растворе антибиотика в течение 40-60 мин.

MM4A - Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 18.03.2006

Извещение опубликовано: 27.10.2007        БИ: 30/2007