Способ определения жизнеспособности спермы рыб после криоконсервацииПатент на изобретение №: 2233142 Автор: Мелехова О.П. (RU), Цветкова Л.И. (RU), Докина О.Б. (RU), Коссова Г.В. (RU), Падалка С.М. (RU), Пронина Н.Д. (RU), Миленко В.А. (RU) Патентообладатель: Федеральное государственное унитарное предприятие "Всероссийский научно-исследовательский институт пресноводного рыбного хозяйства" (RU) Дата публикации: 27 Июля, 2004 Начало действия патента: 21 Января, 2003 Адрес для переписки: 141821, Московская обл., Дмитровский р-н, пос. Рыбное, ВНИИПРХ, патентный отдел Изобретение относится к рыбной промышленности. Способ заключается в том, что образцы спермы до и после криоконсервации подвергают воздействию радиоактивного индикатора свободнорадикальных реакций с последующим измерением радиоактивности образцов методом жидкостной сцинтилляции. Оценку степени повреждения мембран проводят по изменению уровня содержания в них меченых свободных радикалов, а жизнеспособными считают образцы, имеющие показатель изменения уровня свободных радикалов не более 30-50%. Способ обладает достаточной чувствительностью определения, прост в выполнении. 2 з.п. ф-лы, 1 табл. Изобретение относится к рыбной промышленности и может быть использовано в искусственном разведении рыб и других животных при создании банка генов ценных и исчезающих видов животных с целью сохранения биоразнообразия.Практическое использование методов криоконсервации спермы животных сдерживается их несовершенством и неизученностью механизмов криоповреждений и способов их корректировки. Режимы замораживания - оттаивания, увеличение концентрации внутри- и внеклеточных солей, чрезмерное обезвоживание клетки, токсичность криозащитных сред могут вызвать как генетические повреждения, так и повреждения цитоплазматических мембран, от целостности которых зависит нормальное функционирование клеток.Для обеспечения высокой эффективности методов криоконсервации спермы животных очень важно с высокой степенью точности прогнозировать ее выживаемость после криоконсервации. Это необходимо для оценки действия криозащитных сред и корректировки их состава, отбора проб наиболее жизнеспособных сперматозоидов для закладки на долгосрочное хранение и прогнозирования жизнеспособности эмбрионов.В настоящее время не существует достаточно объективных методов определения жизнеспособности спермы животных по степени их повреждения после криоконсервации.Наиболее распространенным способом определения жизнеспособности спермы после криоконсервации является оценка качества спермы рыб по ее активности. Активность определяют под микроскопом по соотношению числа подвижных сперматозоидов с прямолинейным поступательным движением к общему количеству клеток в поле зрения и выражают в процентах. (См. Сборник научно-технической и методической документации по аквакультуре. М.: ВНИРО, 2001, с.152-158).Способ является недостаточно достоверным и воспроизводимым из-за сложности получения капли спермы для визуального анализа под микроскопом строго одинакового объема. Методика нанесения капли спермы вызывает гибель части спермиев, что вносит дополнительную погрешность. Обеспечение стабильных и воспроизводимых условий нахождения спермиев при реализации способа (температура, рН и др.) также затруднительно. Кроме того, подвижность сперматозоидов не характеризует степень их повреждения в процессе криоконсервации и не всегда коррелирует с их жизнеспособностью и оплодотворяющей способностью, которая является основным показателем качества спермы.Известен способ оценки качества спермы, заключающийся в измерении количества тепла, выделяемого спермиями при постоянной температуре инкубации. (См. Патент ГДР №85875, кл. 45 h 29/00, 1971).Однако данный способ является недостаточно корректным, т.к. количество тепла, выделяемого спермиями, зависит от многих трудноконтролируемых факторов, например степени возбуждения, зрелости спермиев и т.д.Известны способы определения качества спермы, основанные на принципе измерения времени изменения окраски спермы под воздействием различных индикаторов. (См. авт. свид. СССР №375067, кл. А 61 D 7/02, 1973, №622466, А 61 D 7/02, 1978).Однако данные способы непригодны для оценки жизнеспособности спермы рыб после криоконсервации, т.к. солевой состав криозащитных сред может изменять результаты окрашивания.Известен способ определения качества спермиев, предусматривающий оценку уровня повреждения мембран, который заключается в смешивании спермы с питательной средой, содержащей флуорохром, и последующий анализ окрашенных спермиев под микроскопом. (См. авт. свид. №1329780, кл. A 61 D 7/02, А 61 В 10/00, 1987). В качестве флуорохрома используют смесь двух красителей - тиазинового красного и этидиум бромида. При повреждениях мембраны акросомы тиазиновый красный проникает в акросому и вызывает ее свечение, а этидиум бромид, проникая через поврежденную цитоплазматическую мембрану спермия, вызывает свечение его головки. Качество спермиев оценивают по интенсивности их свечения под люминесцентным микроскопом по балльной шкале.Однако данный способ трудоемок и дает лишь общее представление о поврежденной структуре мембраны спермия по балльной шкале, не позволяя получить количественную характеристику уровня повреждений.Наиболее близким способом того же назначения к заявленному изобретению по совокупности признаков является способ определения жизнеспособности спермы, предусматривающий оценку степени повреждения мембран по изменению дыхания клеток в различных средах. (См. авт. свид. СССР №938990, кл. А 61 D 7/02, 1982). Способ заключается в полярографической оценке энергетической системы сперматозоидов в среде инкубации, которую проводят по реакции дыхания на 2,4 - динитрофенол и дополнительно определяют целостность внешней клеточной мембраны сперматозоидов по реакции дыхания на янтарат калия. Поскольку в неповрежденные сперматозоиды янтарно-кислый калий не проникает, усиление дыхания имеет место только в случае увеличения проницаемости мембран.Таким образом, указанный способ позволяет графически зарегистрировать результат измерения и определить по отношению скорости дыхания до введения янтарата калия и после его введения степень повреждения мембран.К причинам, препятствующим достижению указанного ниже технического результата, относится то, что способ недоступен к применению в полевых условиях, сложен в выполнении, требует дорогостоящего оборудования. Кроме того, способ является косвенным и недостаточно чувствительным, т.к. результат определения в большой степени зависит от тщательности и воспроизводимости подготовки анализируемой пробы.Настоящее изобретение направлено на универсализацию и упрощение способа, снижение трудоемкости и повышение чувствительности определения.Технический результат достигается тем, что в способе определения жизнеспособности спермы рыб после криоконсервации, предусматривающем оценку степени повреждения мембран и определение ее жизнеспособности по результатам этой оценки, особенность заключается в том, что образцы спермы до и после криоконсервации подвергают воздействию радиоактивного индикатора свободнорадикальных реакций с последующим измерением радиоактивности образцов методом жидкостной сцинтилляции, оценку степени повреждения мембран проводят по изменению уровня содержания в них меченых свободных радикалов по уравнению ![]() ![]() ![]() ![]() ![]() ![]() ![]() ![]() ![]() ![]() ![]() ![]() ![]() Формула изобретения1. Способ определения жизнеспособности спермы рыб после криоконсервации, предусматривающий оценку степени повреждения мембран и определение ее жизнеспособности по результатам этой оценки, отличающийся тем, что образцы спермы до и после криоконсервации подвергают воздействию радиоактивного индикатора свободнорадикальных реакций с последующим измерением радиоактивности образцов методом жидкостной сцинтилляции, оценку степени повреждения мембран проводят по изменению уровня содержания в них меченых свободных радикалов по уравнению![]() ![]() ![]() ![]() MM4A Досрочное прекращение действия патента из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе Дата прекращения действия патента: 22.01.2009 Дата публикации: 20.05.2011 Популярные патенты: 2479198 Способ ведения сильнорослых сортов винограда ... из оставленных побегов обрезают на высоте 90-100 см, а второй - на 120-125 см от поверхности почвы, далее в начале третьей вегетации в верхней части каждого штамба оставляют по два побега для формирования плеч кордона, которые по мере прироста крепят горизонтально к проволоке шпалеры, соответственно на первом и втором ярусах и к концу вегетации их обрезают на требуемую длину, в течение четвертой и последующих вегетации побеги, развившиеся на плечах кордона первого яруса оставляют свободно свисать вниз, а побеги, развившиеся на плечах кордона второго яруса закрепляют вертикально к двум верхним ярусам проволоки шпалеры и проводят ежегодную обрезку однолетних вызревших побегов, ... 2200947 Способ количественной оценки лесопригодности почвогрунтов ... изобретением не предусматриваются известные преобразования. Следовательно, заявленное изобретение соответствует требованию "изобретательней уровень" по действующему законодательству. Предложенный способ реализуется следующим образом. Например, в степной зоне европейской территории России с нормой осадков от 300 до 500 мм/год нарушенные незасоленные песчаные, супесчаные и легкосуглинистые почвогрунты отводят под массивное облесение сосной обыкновенной. Лесопригодность их в различных условиях атмосферного увлажнения существенно отличается и нуждается в объективной оценке при планировании лесохозяйственных работ. Толщину корнеобитаемого слоя у сосны на рассматриваемых почвогрунтах ... 2023363 Пневматическая сеялка ... выражением: n = (Bp-Bк)/n-1 , где n - количество пар распылителей; Bp, Bк - соответственно рабочая ширина захвата и конструктивная ширина сеялки; n - интервал, с которым наружные концы смежных материалопроводов отстоят друг от друга по ширине сеялки. Такое выполнение сеялки обеспечивает потребное геометрическое наложение смежных факелов распыла и повышение равномерности распределения материала по поверхности почвы. 5 ил. , , , , ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ Изобретение относится к сельскохозяйственному машиностроению, в частности к конструкции машин для рассева сыпучих материалов (минеральных удобрений, зерна и т.п.), и может быть использовано при ... 2056737 Способ диагностики морозоустойчивости плодовых культур ... покоя, содержания фруктозы до и после промораживания в морозильной камере до критических температур и по отношению содержания фруктозы после промораживания к этому показателю до промораживания судят о морозоустойчивости, при этом к морозоустойчивым относят сорта, имеющие отношение, не превышающее 1,35. 1 табл. ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ Изобретение относится к сельскому хозяйству, а именно к области садоводства, и может быть использовано в научно-исследовательских учреждениях, ведущих селекцию сортов плодовых культур. Существуют некоторые способы оценки морозоустойчивости плодовых и винограда, например, по водоудерживающей способности тканей ... 2391804 Почвообрабатывающий каток ... на брусьях катков 6 подвижно установлены поводки 7, подвижность которых в сторону почвы ограничивается упором 8, поводки 7 с брусом катка 6 также соединены винтовыми пружинами 9, один конец которых неподвижно закреплен на брусьях катков 6, а второй - на поводках 7 посредством регулировочных винтовых тяг 10, которые позволяют изменять жесткость винтовой пружины и тем самым давление катка на почву, на нижних концах поводков 7 в подшипниковых узлах 11 посредством цапф установлены валы катков 12, к валам катков 12 посредством спиц 13, установленных на них жестко с шагом С вдоль их осей, закреплены винтовые полосы 14 с шагом С шириной а, составляющие угол с образующей цилиндрической ... |
Еще из этого раздела: 2494593 Способ повышения селена в чесноке горной зоны 2490849 Способ переработки безподстилочного помета птиц клеточного содержания и навоза свиней в топливные брикеты 2114107 Производные триазола, способ их получения и инсектоакарицидная композиция 2108695 Орудие для образования гребней в почве 2272840 Способ молекулярного маркирования пола хмеля обыкновенного (humulus lupulus l) 2303347 Способ ведения виноградных кустов 2189718 Пневматический высевающий аппарат 2180475 Устройство для поштучной подачи предметов, в частности семян сельскохозяйственных культур 2127256 Замещенные простые оксимовые эфиры и фунгицидное, инсектицидное, арахноицидное средство 2242875 Энергосберегающий способ зимовки и содержания пчел на воле в однокорпусном улье усова |