Криозащитный раствор для замораживания лейкоцитов при умеренно-низкой температуреПатент на изобретение №: 2184449 Автор: Сведенцов Е.П., Туманова Т.В., Хомякова С.А., Утемов С.В., Костяев А.А., Семенов А.Н. Патентообладатель: Институт физиологии Коми НЦ УрО РАН, Кировский НИИ гематологии и переливания крови Дата публикации: 10 Июля, 2002 Начало действия патента: 18 Апреля, 2001 Адрес для переписки: 167982, г.Сыктывкар, ул. Коммунистическая, 24, патентно- лицензионный отдел Изображения   Изобретение относится к медицине, а именно к созданию криозащитных растворов для замораживания лейкоцитов. Криозащитный раствор содержит гексаметиленбистетраоксиэтилмочевину 24,0-36,0%, фумарат натрия 2,4-3,2%, лимонную кислоту 0,03-0,09% и воду для инъекций - до 100 мл. Технический результат: криозащитный раствор обеспечивает высокий процент физиологически полноценных клеток при замораживании лейковзвеси до -50oС. 3 табл. , , ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУИзобретение относится к медицине и физиологии и касается создания средства - криозащитного раствора для замораживания лейкоцитов, в частности человека. В качестве прототипа использована работа В.А. Аграненко и соавт. (1986) Криоконсервирование гранулоцитов с раствором "Лейкокриодмац" [Аграненко В.А. , Абезгауз Н. Н. , Трошина В.М. и др. Криоконсервирование гранулоцитов с раствором "Лейкокриодмац"// Гематол. и трансфузиол. - 1986. - 12. - с.26-29] . Существенным недостатком прототипа является то, что диметилацетамид (ДМАЦ), использованный в растворе для криоконсервирования гранулоцитов, обладает выраженной токсичностью. По данным А.А.Цуцаевой [Цуцаева А.А., Аграненко В. А. , Федорова Л.И. и др. Криоконсервирование клеточных суспензий// Под общ. ред. А.А. Цуцаевой. - Киев: Наукова Думка, 1983 - 240 с.], ЛД50 ДМАЦ составляет 4,2 г/кг массы мыши. Кроме того, "Лейкокриодмац" не содержит в своем составе антиоксиданта, который способствует быстрому восстановлению энергетических процессов в клетке после ее выхода из холодового анабиоза. Надо отметить, что "Лейкокриодмац" для замораживания лейкоцитов до -50oС не использовался, т.к. этот метод не был разработан: охлаждение производилось жидким азотом по линейной программе до -196oС. К тому же вещество ДМАЦ в России не производится. В криозащитном растворе для замораживания лейкоцитов при умеренно-низкой температуре применен отечественный криопротектор - гексаметиленбистетраоксиэтилмочевина (кратко ГМБТОЭМ), имеющий наименьшую токсичность из всех эффективных протекторов: его ЛД50 равна 15,5 0,6 г/кг массы мыши [Сведенцов Е. П. Получение и криоконсервирование костного мозга для клинического применения// Автореферат дисс. доктора мед. наук. - Л., 1987. - 45 с. ДСП]; по сравнению с ДМАЦ ГМБТОЭМ имеет меньшую токсичность в 3,7 раза. В раствор включен антиоксидант - фумарат натрия. Известно [Несмеянов А.Н., Несмеянов Н.А. Начало органической химии. Книга 1. - М.: Химия, 1974. - с.314-315, с.436-437] , что фумаровая кислота, наряду с лимонной участвует в цикле Кребса, обеспечивающим жизнедеятельность клетки. рН раствора составляет 7,0-7,4, что является физиологической нормой для лейкоцитарных клеток. Для поддержания рН на указанном уровне в раствор введена лимонная кислота. Все ингредиенты, использованные в криозащитном растворе, производятся в РФ. Пример Криозащитный раствор, содержащий ГМБТОЭМ в концентрации 30%, фумарат натрия 2,8%, лимонную кислоту 0,06%, воду для инъекций до 100 мл и имеющий рН 7,0-7,4 в отношении 1: 1, смешивают с лейкоконцентратом в полимерном контейнере "Компопласт". Смесь выдерживают 20 мин при комнатной температуре, а затем охлаждают по экспоненциальной программе в электрическом морозильнике в 4-х литровой спиртовой ванне до -28oС в течение 15-20 мин. После этого этапа биоматериал переносят в камеру электроморозильника до -50oС. Термограмму записывают по датчику, установленному в контейнере "Компопласт" с испытуемым раствором. Размораживание проводят в 20-литровой водяной ванне при температуре +38oС в течение 45-60 с при покачивании контейнера 3-4 раза в сек. Далее определяют морфологическую сохранность размороженных лейкоцитов, их жизнеспособность по витальному красителю (проба Шрека) и фагоцитарную активность нейтрофилов в пробе с латексом. Расчет делают в процентах в сравнении с подобными показателями клеток до замораживания. Экспериментальные исследования проведены на базе лаборатории криофизиологии крови Института физиологии Коми НЦ УрО РАН и консервирования крови и тканей Кировского НИИ гематологии и переливания крови. Приготовлены три варианта криозащитных растворов для лейкоконцентрата, различающихся по процентному содержанию входящих в него ингредиентов. Состав растворов представлен в табл. 1. При смешивании 1:1 с лейкоцитами из крови донора конечная концентрация веществ, входящих в состав растворов 1, 2 и 3, оказывалась в 2 раза ниже исходной (табл. 2), рН среды не изменялась, оставалась в пределах 7,0-7,4. Охлаждение производят по двухступенчатой экспоненциальной программе: на первом этапе погружают контейнер с лейкоконцентратом в 4-литровую спиртовую ванну, охлажденную до -28oС, через 15-20 мин контейнер с биообъектом вынимают из ванны и помещают в камеру электроморозильника для замораживания до -50oС, на что тратилось 8-10 мин. Контроль замораживания осуществляют по термограмме, записываемой по датчику, находящемуся в контейнере с имитатором-раствором криоконсерванта с конечной концентрацией его ингредиентов. Размораживание производят в 20-литровой водяной ванне, нагретой до +38oС. Контейнер с лейковзвесью отогревают до +2oС - +4oС в течение 45-60 с. Производили исследования лейкоцитов на морфологическую сохранность и функциональную активность (см. табл.3). Самым надежным тестом биологической полноценности лейкоцитов, в частности нейтрофилов, является определение их фагоцитарной активности. Этот показатель физиологического свойства клеток оказался лучшим после замораживания - оттаивания при оптимальном соотношении ингредиентов криозащитного раствора. Готовый раствор прозрачен, с легким желтоватым оттенком, без запаха, рН 7,0-7,4. Он хорошо смешивается с взвесью лейкоцитов, предотвращает их конгломерацию, обеспечивает морфологическую сохранность при положительной температуре. Раствор обладает выраженным хладоограждающим действием при замораживании лейкоцитов до -50oС по двухступенчатой экспоненциальной программе: на первом этапе от +20 до -28oС, на втором этапе с -29 до -50oС. Размораживают лейковзвесь в водяной ванне при температуре +38oС в течение 45-60 с до температуры биообъекта в контейнере +2oС - +4oС. После отогрева сохраняются 765% физиологически активных лейкоцитарных клеток. Таким образом, предлагаемый криозащитный раствор позволил сохранить при замораживании лейковзвеси до -50oС высокий процент физиологически полноценных клеток. Он найдет применение в медицинских учреждениях, где имеются отделения длительного хранения крови и электрохолодильники на -50oС.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯКриозащитный раствор для замораживания лейкоцитов при умеренно низкой температуре, отличающийся тем, что содержит гексаметиленбистетраоксиэтилмочевину, фумарат натрия, лимонную кислоту и воду при следующем соотношении ингредиентов, %: Гексаметиленбистетраоксиэтилмочевина - 24,0-36,0 Фумарат натрия - 2,4-3,2 Лимонная кислота - 0,03-0,09 Вода для инъекций - До 100 млПопулярные патенты: 2108013 Рабочий орган культиватора ... выполнены в виде Л-образных выступов, образованных парой параллельных задним кромкам прорезей и деформацией основного материала в направлении от нижней грани плоскорежущей лапы; упругий элемент в нишах S-образной стойки и крыльев плоскорежущей лапы заблокирован фиксаторами в виде полусферических выступов, направленными в технологические отверстия упругого элемента. За счет того, что плоскорежущая лапа соединена со стойкой посредством упругого элемента, достигается указанный выше технический результат. Проведенный заявителем анализ уровня техники, включающий поиск по патентным и научно-техническим источникам информации и выявление источников, содержащих сведения об аналогах ... 2238970 Штамм mycelia sterilia лх-1-продуцент комплекса биологически активных веществ, обладающих рострегуляторными свойствами ... в течение 48 ч продуцирует 25 г вторметоболитов, проявляющих биостимулирующую активность. Культивирование штамма осуществляют на жидкой питательной среде Гельцер, продолжительность культивирования 20-30 дней при температуре 26В±1В°C. Состав среды: жидкая питательная среда Гельцер, г/л, рН 6,0-6,4:Глюкоза 8,0КН2РO4 0,6К2НРO4 1,8MgSO4 0,2K2SO4 0,1MnSO4 СледыFeSO4 СледыL-аспарагин 0,02Вода До 1000 млВ качестве источника углеродного питания использовали глюкозу в концентрации 1,5%. При культивировании на жидкой питательной среде заявляемый штамм требует дополнительный фактор роста - ферментализат БВК в количестве 0,2%. Выращивание осуществляют при 28-30В°С, в условиях аэрации и ... 2056737 Способ диагностики морозоустойчивости плодовых культур ... ВНИИриса Краснодар, 1985, Вып. 33, с. 11-13). Другую часть побегов помещали в морозильную камеру и промораживали до критических для конкретной культуры температур по следующим программам: Температура, oC -10, -18 (для абрикоса) Продолжительность воздействия, ч 24 24 Температура, oC -10, -18, -24, -30 (для яблони) Продолжительность воздействия, ч 24, 24, 12, 8 После промораживания побегов вновь определяли содержание фруктозы в почках (С2). О характере изменения содержания фруктозы в растительной ткани под воздействием отрицательных температур судили по отношению С2/С1. Значения отношения С2/С1 для различных сортов абрикоса и яблони и уровень их морозоустойчивости приведены в таблице. ... 2076603 Способ повышения урожайности сельскохозяйственных культур ... и семена доводили до сухо-воздушного состояния в тени, в проветриваемом помещении. Площадь делянок 100 м2, повторность 3-х кратная. Урожайность моркови определяли путем взвешивания выкопанных корнеплодов с контрольных и опытных делянок. Аналогичным образом проводили испытания и на капусте. При поведении испытаний препарата "Стифун" на луке замачивание лука-севка производили в течение 24 ч. Результаты испытаний приведены в табл. 4. Как видно из табл. 4, при предпосевной обработке семян овощных культур наблюдается увеличение урожая моркови на 47,4 ц/га, капусты 82,0 ц/га и лука-репки 34,1 ц/га. Пример 5. Испытания препарата "Стифун" против аэрогенной инфекции проводили путем ... 2112341 Лапа плоскорежущая ... работает следующим образом. При обработке междурядий посевов пропашных культур на ровном поле стойку 1 располагают таким образом, чтобы расстояние от культурных растений до стойки 1 не превышало 6 - 8 см. При движении культиваторного агрегата с описанными выше плоскорежущими лево- и правосторонними лапами лезвие 6 с режущей кромкой 7 врезается в слой почвы, что образует вертикальную щель шириной 0,5 см. При дальнейшем движении вместе с щекой 3 в почву увлекается режущая кромка 7 односторонней лапы 2. Врезается в почву на глубину 5 - 6 см лезвие 6 лапы 2, установленной опорными колесами секций (не показано). При движении лапы 2 лезвие 6 своей режущей кромкой 7 подрезает ... |
Еще из этого раздела: 2121263 Способ лесоводственной оценки технологического комплекса машин 2490849 Способ переработки безподстилочного помета птиц клеточного содержания и навоза свиней в топливные брикеты 2125366 Доильный аппарат 2280351 Установка для скашивания сорной растительной массы с берм и откосов канала 2015654 Теплица для подземной выработки 2420940 Энергосберегающий способ обеззараживания семян люпина от антракноза 2180475 Устройство для поштучной подачи предметов, в частности семян сельскохозяйственных культур 2435369 Гербицидные композиции 2160981 Способ создания плантаций солодки голой на обесструктуренных почвах в орошаемом земледелии 2415529 Нижняя тяга для навески трактора |
Изобретения в сельском хозяйстве
Обработка почвы в сельском и лесном хозяйствах
Посадка, посев, удобрение
Уборка урожая, жатва
Обработка и хранение продуктов полеводства и садоводства
Садоводство, разведение овощей, цветов, риса, фруктов, винограда, лесное хозяйство
Новые виды растений или способы их выращивания
Производство молочных продуктов
Животноводство, разведение и содержание птицы, рыбы, насекомых, рыбоводство, рыболовство
Поимка, отлов или отпугивание животных
Консервирование туш животных, или растений или их частей
Биоцидная, репеллентная, аттрактантная или регулирующая рост растений активность химических соединений или препаратов
Хлебопекарные печи, машины и прочее оборудование для хлебопечения
Машины или оборудование для приготовления или обработки теста
Обработка муки или теста для выпечки, способы выпечки, мучные изделия
|
|
||