Способ формирования гепаринизированной поверхностиПатент на изобретение №: 2155593 Автор: Понеделькина И.Ю., Карабанов Ю.Р., Башкатов С.А., Джемилев У.М., Вахитов В.А., Давлетов Э.Г., Гатауллин Н.Г., Костромина Л.Е., Ишбульдин Р.И., Чемерис А.В., Щекин С.В. Патентообладатель: Институт нефтехимии и катализа АН РБ и УНЦ РАН, Отдел биохимии и цитохимии УНЦ РАН, Башкирский государственный медицинский университет Дата публикации: 10 Сентября, 2000 Начало действия патента: 16 Февраля, 1998 Адрес для переписки: 450075, г.Уфа, просп. Октября 141, Институт нефтехимии и катализа АН РБ и УНЦ РАН, патентная группа Изображения  Изобретение относится к области биологии, в частности биохимии. Способ формирования гепаринизированной поверхности, заключающийся в последовательном нанесении водных растров красителя метиленового синего (толуидинового синего) и гепарина на поверхность, способную адсорбировать или химически связывать молекулы красителя. Технический результат: способ отличается быстротой и легкостью формирования поверхности с антикоагулянтными свойствами. 1 табл. , ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУПредлагаемое изобретение относится к области биологии, в частности биохимии. С прогрессом ангиохирургии достигнуты значительные успехи в разработке и выполнении реконструктивных операций на сосудах. Однако тромбозы реконструированных сосудов, возникающие как в ближайшем, так преимущественно в отдаленном послеоперационном периодах, существенно снижают эффективность оперативных вмешательств. В связи с этим, несмотря на многочисленные работы, ведущиеся в этом направлении, проблема формирования атромбогенной, в частности, гепаринизированной поверхности сосудистых протезов, сосудов с эктомированной интимой, алло- и ксенотрансплантационного материала и т.д. не является до конца решенной в клинической практике. Известны и описаны, а некоторые используются в практике (а), следующие аналогичные способы формирования атромбогенной (гепаринизированной) поверхности: а) местная обработка кровеносных сосудов и анастомозов раствором гепарина во время операции (Оперативная хирургия /Под ред. И.Литтманна. - Будапешт: Изд-во АН Венгрии, 1985. -1175 с.). Гепарин не способен к прочному взаимодействию с элементами соединительной ткани, поэтому эта мера является кратковременной: большая часть антикоагулянта не задерживается при восстановлении кровотока; б) физико-химические и химические методы обработки поверхности кровеносных сосудов или алло- и ксенотрансплантатов. Например, в целях профилактики тромбоза стенки эндартерэктомированных артерий подвергают воздействию ультразвука в присутствии гепарина в течение 30 с. Гепарин удерживается в стенке сосуда не более 12 часов (Антужев А.Ф. Профилактика инфицирования сосудистых протезов и тромбоза эндартерэктомированных артерий /Дисс. на соискание уч. степени канд. наук.-1985). Пупочные вены или сонные артерии собак, свиней, предлагаемые к использованию в качестве сосудистых трансплантатов, химически модифицируют гепарином с помощью карбодиимида в течение не менее 5 часов, достигая концентрации гепарина 31,5 мкг на см2 поверхности (Venkataramani E. S. , Fred Senatore, Маriо Feola, et al. Nonthrombogenic small-caliber human umbilical vein vascular prosthesis //Surgery.-1986.-V.6.-P.735-741); в) гепаринизация поверхности различных синтетических (например, полиуретановых) сосудистых протезов посредством химической модификации функциональных групп (РСТ WO 90 00, 343; Heyman P.W., Cho C.S., McRea J.C. et al. Heparinized polyurethanes: in vitro and in vivo stadies //J.of Biomedical Materials Research.-1985.-V.19.- P.419-436), пропитка синтетических трансплантатов гепарин-коллагеновым сополимером (Shankar Н., Senatore F., Wu D.R. et al. Co-immobilisation and interaction of heparin and plasmin on collageno-elastic tubes //Biomaterials, Artificial Cells and Artificial Organs.-1990.-V. 18. -# 1. -P. 59-73) и т.д. Эти способы гепаринизации либо находятся в стадии научных разработок, либо не получили практического применения из-за некоторых недостатков. Также известен способ связывания гепарина, являющегося полианионным электролитом, с катионизированной поверхностью. Например, гепарин или гепарансульфат (из эндотелия бычьей аорты), иммобилизованные на частично катионизированной с помощью 3-хлор-2-гидроксипропилтриметиламмонийхлорида поверхности целлюлозы, обладают антикоагулянтной активностью и могут использоваться в качестве биоматериалов - мембран с атромбогенной поверхностью, подобной поверхности кровеносных сосудов (Baumann Н., Keller R., Ruzicka E. Partially cationized cellulose for non-thrombogenic membrane in the presence of heparin and endothelial-cell-surface-heparansulfate //J. Membr. Sci.-1991.-V.61.-P.253-268). Такой же принцип связывания гепарина с четвертичными аммониевыми солями применяется в анионобменной хроматографии. Также описано взаимодействие гепарина с поликатионной поверхностью, образованной иммобилизованным на полиэтилвининиловом спирте поли-L-лизином НВг (Xinghang М., Fazal M. S. , Wan K.S. Heparin binding on poly(L-lysine)-immobilized surface //J. Colloid Interface Sci. -1991.- V.147.-#l.-P.251-261). На гладкой поверхности полимера за 30 мин из крови или плазмы при скорости 100 мл/мин концентрация гепарина достигает 0,52 мкг/см2, на пористой - 1,69 мкг/см2. Для проявления поверхностью антикоагулянтных свойств концентрация гепарина должна быть не менее 5 мкг/см2 (Venkataramani E.S., Fred Senatore, Mario Feola et al. Nonthrombogenic small-caliber human umbilical vein vascular prosthesis //Surgery.-1986.-V.6.-P.735-741). Способов, описывающих формирование гепаринизированной поверхности биологических или полимерных материалов с помощью каких-либо красителей, в литературе не обнаружено. Авторами предлагается способ формирования гепаринизированной поверхности посредством нанесения раствора гепарина с предварительной обработкой водным раствором красителя метиленового синего (МС) любой поверхности, способной либо адсорбировать, либо химически связывать молекулы красителя. Таким образом, с помощью молекул МС, являющихся четвертичными аммониевыми солями, вначале формируется катионизированная поверхность. Гепарин, как полиэлектролит с отрицательно заряженными группами, связывается с агрегированными молекулами МС, придавая поверхности антикоагулянтные свойства. Описанный механизм взаимодействия красителя и гепарина лежит в основе явления метахромазии (Кононский А.И. Гистохимия. - Киев: Вища школа, 1976.- 280с.) (схему см. в конце текста). Преимуществами данного способа является быстрота и легкость формирования поверхности с антикоагулянтными свойствами, а также возможность в широких пределах изменять поверхностную концентрацию гепарина в зависимости от концентрации раствора красителя (см. таблицу). Метиленовый синий (голубой) относится к так называемым витальным красителям. В течение почти 70 лет его использовали в качестве антисептика для кишечника и мочевыводящих путей. В настоящее время МС не находит такого широкого применения, но не потерял значения при лечении цианоза, вызываемого недостатком кислорода или отравлением кровяными ядами (вводится внутривенно) (Машковский М. Д. Лекарственные средства. - Харьков: Торсинг, 1997.-Т.2.-590с). МС также применяется в гистологии как метахроматический краситель для выявления кислых мукополисахаридов и других элементов соединительной ткани. Для придания поверхности антикоагулянтных свойств можно обрабатывать последовательно водными растворами красителя и гепарина любые ткани живого организма, имеющие в составе гликозаминогликаны, например, эндартерэктомированные кровеносные сосуды, алло- и ксенотрансплантаты. Предлагаемое изобретение иллюстрируется следующим примером. Водные растворы МС различной концентрации (от 0,1 до 1,0%) наносили на поверхность одинаковых по площади фрагментов артерии или аорты с эктомированной интимой (кадаверный материал) в течение 2-5 минут, избыток красителя удаляли фильтровальной бумагой и обрабатывали раствором гепарина (5000 ед./мл) в течение 2-5 минут. Не вступившие в реакцию с поверхностью медии (media) краситель и гепарин отмывали проточной водой в течение 10-15 минут. Для количественного определения гепарина краситель на поверхности фрагментов сосуда восстанавливали Zn в солянокислой среде до лейкосоединения. После обесцвечивания МС гепарин в растворе определяли карбазоловым методом по реакции Дише на уроновые кислоты (Carbohydrate analysis /Ed. by Chaplin M.F. and Kennedy J.F. -Oxford, Washington, 1986.-228p) и рассчитывали на 1 см2 поверхности media (см. таблицу). Как видно из приведенных в таблице результатов, концентрация гепарина, иммобилизованного на поверхности тканей с помощью метиленового синего, больше чем 5 мкг/см2 и является достаточной для проявления поверхностью антикоагулянтных свойств.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯСпособ формирования гепаринизированной поверхности посредством нанесения раствора гепарина, отличающийся тем, что поверхность предварительно обрабатывается водным раствором красителя метиленового синего в концентрации 0,1 - 1,0%.Популярные патенты: 2051971 Способ определения биологической активности -эндотоксинов различных патотипов bacileus thuringiensis ... кристаллы осаждают центрифугированием при 12 тыс. об/мин. 10 мин. Промытые кристаллы помещают в колбу с 50 мл 0,015 н.NaOH, растворение проводят при комнатной температуре на качалке (250 об. /мин. ) 1 ч. Из супернатанта после центрифугирования при 12 тыс. об/мин. 20 мин осаждают -эндотоксинов различных патотипов bacileus thuringiensis, патент № 2051971" SRC="/images/patents/421/2051145/948.gif" > -эндотоксины путем подкисления до рН 4 уксусной кислотой, выдерживают при 4оС 15 мин, осаждают при 12 тыс.об./мин. 30 мин с охлаждением. Осадок растворяют в 0,01 М фосфатно-цитратной буферной системе рН 8,5 и определяют количество белка спектрофотометрически. Затем из исходного раствора ... 2420058 Способ выращивания зеленных культур в интенсивной светокультуре ... 1 кг сухого вещества - 19,4-20,6% (рециркуляция) и 35,4-36,1% (водная культура), было получено опытным путем при использовании заявленного способа (см. табл.1, 2, 3, 4).Экономия воды на 1 кг сырой биомассы составила 0,70-2,25 л/м2 в зависимости от метода выращивания культуры (водная и проточная гидропоника), табл.7.На чертеже схематично изображено устройство по приготовлению питательного раствора на основе ЭХА и подачи в лотки в системе его рециркуляции.Устройство состоит из электромагнитного клапана 1, емкости для воды 2, датчика уровня жидкости 3, модуля управления 4. Насосом подачи 5 вода подается в электрохимический активатор 6. Напряжение на активатор 6 подается через ... 2495561 Машина лесозаготовительная ... ползунах 19, и полностью втянутых ползунах 9 и полностью вытянутых ползунах 15 до упора пильным механизмом 21 в дерево 32. При соприкосновении пильного механизма 21 с деревом 32 начинается перерезание дерева 32, осуществляя подачу выдвижением ползунов 19, рычаг 22 упирается в дерево 32 и при выдвижении ползунов 19 вперед сжимаются пружины 23. В этот момент самоходное шасси 1 останавливается, а прицеп 3 продолжает движение вперед посредством втягивания ползунов 15 приводами 17 или собственным ходом (при активных двигателях прицепа 3). В момент полного отделения дерева 32 от пня пружины 23 распрямляются и механизм сталкивания 22 сталкивает дерево с пня, подбивая комлевую часть. В ... 2444881 Конвейер для проращивания зерна ... в течение суток при общем необходимом времени проращивания пять суток, при этом над предпоследним четвертым и последним пятым транспортерами установлены лампы облучения, транспортеры расположены со смещением один над другим. MM4A Досрочное прекращение действия патента из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе Дата прекращения действия патента: 08.10.2012 Дата публикации: ... 2181542 Способ хранения эритроцитов в условиях охлаждения при отсутствии кислорода (варианты) ... цель настоящего изобретения - обеспечить способ пролонгированного хранения крови при сведении к минимуму сложности процедур, необходимых для приготовления образцов крови для переливания. Дополнительные цели, преимущества и новые свойства изобретения будут изложены частично в следующем описании и частично станут очевидными специалистам в этой области при рассмотрении следующего или могут быть понятыми при практическом применении изобретения. Цели и преимущества изобретения могут быть реализованы и достигнуты посредством технических средств и комбинаций, конкретно указанных в прилагаемой формуле изобретения. Краткое описание изобретения Для достижения упомянутых выше и других целей ... |
Еще из этого раздела: 2270554 Сепарирующее устройство зерноуборочного комбайна (варианты) 2275006 Устройство для крепления стеблей малины в вертикальном и горизонтальном положениях 2175177 Агромост с оснасткой для прокладки и уплотнения постоянных грунтовых колей 2079266 Устройство для гранулирования кормов 2228588 Копатель корнеклубнеплодов 2243658 Способ повышения урожайности картофеля и томатов 2465761 Способ повышения плодородия песчаных почв 2057432 Биологический состав кузнецова для подсочки деревьев, в том числе каучуконосов (варианты), и способ его приготовления 2502793 Масло, семена и растения подсолнечника с модифицированным распределением жирных кислот в молекуле триацилглицерина 2217912 Способ проведения контрольного лова молоди пелагических рыб, в частности лососевых, и обкидной невод |
Изобретения в сельском хозяйстве
Обработка почвы в сельском и лесном хозяйствах
Посадка, посев, удобрение
Уборка урожая, жатва
Обработка и хранение продуктов полеводства и садоводства
Садоводство, разведение овощей, цветов, риса, фруктов, винограда, лесное хозяйство
Новые виды растений или способы их выращивания
Производство молочных продуктов
Животноводство, разведение и содержание птицы, рыбы, насекомых, рыбоводство, рыболовство
Поимка, отлов или отпугивание животных
Консервирование туш животных, или растений или их частей
Биоцидная, репеллентная, аттрактантная или регулирующая рост растений активность химических соединений или препаратов
Хлебопекарные печи, машины и прочее оборудование для хлебопечения
Машины или оборудование для приготовления или обработки теста
Обработка муки или теста для выпечки, способы выпечки, мучные изделия
|
|
||