Способ получения клеточных фракций для искусственного размножения животныхПатент на изобретение №: 2142226 Автор: Мурсалов Б.Э. Патентообладатель: Мурсалов Бахтияр Этибарович Дата публикации: 10 Декабря, 1999 Начало действия патента: 26 Августа, 1997 Адрес для переписки: 368601, Россия, Республика Дагестан, Дербент, ул.Ленина, 38, кв.11, Мурсалову Б.Э. Изображения  Изобретение относится к способам искусственного размножения животных и может быть использовано в экспериментальной биологии и медицине, в животноводстве и рыбоводстве. В энуклеированные и неэнуклеированные яйцеклетки реципиента инъецируют клеточные фракции донорских клеток, полученные с помощью фильтров с диаметром пор, равным диаметру ядер клеток. Способ прост в выполнении, значительно сокращает сроки его осуществления и повышает вероятность оплодотворения яиц. 2 табл. , ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУИзобретение относится к способам искусственного размножения животных и может быть использовано в экспериментальной биологии и медицине, в животноводстве и рыбоводстве. Известен метод пересадки ядер соматических клеток в энуклеированные яйца животных. В частности, для Xenopus laevis ядра берут из клеток кишечного эпителия питающихся головастиков (см. Gurdon J.B., The developmental capacity of nuclei taken from intestinal epithelium cells of feeding tadpoles, J. Embryol exp Morph 10, 622 - 640 (1962)). Клетку донора всасывают в микропипетку, где происходит разрыв клеточной оболочки, затем ядро с окружающей его цитоплазмой вводят в яйцо. К недостаткам этого способа, на наш взгляд, следует отнести: - трудоемкость и длительность методики выполнения, - малая вероятность оплодотворения (2 - 3% от общего числа яиц), - применение дорогой и сложной аппаратуры, - большой опыт специалиста. Целью изобретения является искусственное размножение животных. Поставленная цель достигается с помощью клеточных фракций донорских клеток, инъецированных в энуклеированные и неэнуклеированные яйцеклетки реципиента. Существенным отличительным признаком заявляемого способа является применение фильтров с диаметром пор, равным диаметру ядер клеток, через которые фильтруют суспензию донорских клеток перед инъецированием в энуклеированные и неэнуклеированные яйцеклетки реципиента. Способ осуществляют следующим образом. В качестве доноров соматических клеток используют органы 10-дневного куриного эмбриона. Устанавливают яйца так, чтобы конец с воздушным мешком был сверху, и оставляют под ультрафиолетом 10 минут. Протирают яйца 70%-ным спиртовым раствором. Разбивают скорлупу над воздушным мешком и осколки скорлупы удаляют стерильным пинцетом. Затем удаляют скорлуповую мембрану и хориоаллантоисную мембрану, используя при этом стерильный пинцет. С помощью пары изогнутых пинцетов переносят эмбрион за шею в чашку Петри, диаметром 90 мм. Асептически выделяют донорский орган (печень или тонкий кишечник) и переносят его в фосфатно-солевой буфер - А. Дюльбекко (в 1 литре раствора содержатся 10,0 грамм натрия хлорида, 0,25 грамм калия хлорида, 1,44 грамм натрия гидрофосфата и 0,25 грамм калия дигидрофосфата) (ФСБ-А), в установленную на весах чашку Петри, повторяя операцию до тех пор, пока не наберется 1 грамм ткани. Разрезают на маленькие кусочки с помощью тонких ножниц, сливают среду и добавляют 9 - 10 миллилитров ФСБ-А с 0,25%-ным раствором трипсина при 37oC. Инкубируют 15 минут при 37oC в термостате, насыщенном парами воды. Для этого помещают в термостат кювету с водой, обеспечивающую высокую влажность и препятствующую испарению воды из чашки с тканью. Сливают раствор трипсина и промывают дважды свежим ФСБ-А при комнатной температуре в небольшом сосуде. Немедленно диссоциируют ткань в небольшом объеме ФСБ-А путем многократного пипетирования. Достаточно 10-кратного пропускания клеточной суспензии через иглу шприца. Дают осесть недиссоциированным фрагментам ткани и удаляют их. Затем помещают клеточную суспензию на фильтр и фильтруют ее под атмосферным давлением, либо производят фильтрацию следующим образом: В центрифужную пробирку помещают небольшое количество стерильного раствора ФСБ-А и фиксируют в ней фильтровальную перегородку из любого материала, нетоксичного, для клеток. После чего помещают клеточную суспензию и центрифугируют. Время центрифугирования, количество оборотов и размеры пор в фильтрах зависят от культуры ткани, ее возраста и размеров клеточных органоидов. Полученный фильтрат вводят в энуклеированные и в неэнуклеированные неоплодотворенные куриные яйца в хориоаллантоисную оболочку. Скорлупу яиц предварительно обрабатывают 70%-ным спиртовым раствором. Инактивацию ядер яйца проводят механическим способом (раскаленной иглой), химическим (ДНК-аза) или физическим (радиационное облучение) с помощью терапевтического аппарата "Луч 1" в суммарной дозе 6 Гр и более при мощности излучения 0,01 Гр/с. Количество вводимого фильтрата составляет 0,1 мл. После инъекции отверстие заклеивают стерильным пластырем, смазав края стерильным парафином. Яйца инкубируют при температуре 37,5 - 39,5oC и влажности 50 - 70% (см. табл. I и II). Преимуществами предлагаемого способа по сравнению с известным является: - Высокая вероятность оплодотворения яиц (28 - 30%). - Значительное сокращение сроков осуществления способа. - Наименьшие материальные затраты. - Простота способа выполнения.ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯСпособ получения клеточных фракций для искусственного размножения животных, включающий отбор клеток и последующее инъецирование их в энуклеированные и неэнуклеированные яйцеклетки реципиента, отличающийся тем, что перед инъецированием в энуклеированные и неэнуклеированные яйцеклетки реципиента суспензию донорских клеток пропускают через фильтры с диаметром пор, равным диаметру ядер клеток.Популярные патенты: 2253964 Способ отделения семенной части урожая льна от стеблей и устройство для его осуществления ... отделения семенной части урожая льна-долгунца от стеблей и устройство для его осуществления / Н.А.Смирнов, В.И.Солдовский и др. №4764180/15, заявл. 05.12.89, опубл. 15.01.93, Бюл.№2. Формула изобретения 1. Способ отделения семенной части урожая льна от стеблей, включающий подачу растений с коробочками, раздавливание последних и их очес, отличающийся тем, что раздавливание коробочек осуществляют баллонами с гибкой и упругой оболочкой, а очес после раздавливания коробочек выполняют, начиная с вершин растений, с последовательным увеличением зоны очеса до ширины расположения коробочек на стеблях при ориентировании последних в направлении перпендикуляра к длине ленты.2. Устройство ... 2248687 Способ весеннего боронования озимых культур и зубовая борона для его осуществления ... техники, определенного заявителем, не выявлено влияние предусматриваемых существенными признаками каждого из объектов заявленной группы изобретений преобразований на достижение агротехнического результата. Следовательно, каждый из объектов заявленной группы изобретений соответствует условию “изобретательский уровень”.На фиг.1 изображена борона, вид сверху.На фиг.2 - сечение А-А на фиг.1.На фиг.3 - сечение Б-Б на фиг.1.На фиг.4 - сечение В-В на фиг.1. На фиг.5 - сечение С-С на фиг.1.На фиг.6 - сечение Д-Д на фиг.1.Предлагаемый способ проведен в полевом опыте одновременно известной бороной и заявленной - опытной в одной сцепке. Конкретным подтверждением эффективности ... 2154629 Производные оксима, способ их получения, фунгицидное средство и способ борьбы с грибковыми заболеваниями ... вещество применяют в количестве 250 г/га. После присыхания препарата растения опыливают спорами Erysiphe graminis f. sp. tritici. Растения помещают в теплице при температуре около 20oC и относительной влажности воздуха около 80%, чтобы содействовать развитию пустул мучнистой росы. 7 дней после инокуляции определяют процентное защитное действие соединения примера 4. Оно составляет 100%. Пример 32 Опыт с Sphaerotheca (огурец)/защитное действие 1 вес.ч. нижеуказанного активного вещества смешивают с 4,7 вес.ч. ацетона и 0,3 вес. ч. простого алкил-арил-полигликолевого эфира и получаемый концентрат разбавляют водой. Для исследования защитного действия молодые растения опрыскивают ... 2421109 Способ роспуска закристаллизовавшегося меда и устройство для его осуществления ... устройства. Кроме того, устройство имеет двухслойное уплотнение 10, содержащее резину и фольгу, расположенное в месте стыковки открытого конца волновода излучателя 6 СВЧ-генератора 5 с горловиной емкости 3 с медом. Устройство также снабжено блоком управления 11.Станина 1 представляет собой жесткую сварную конструкцию из гнутых деталей, выполненных из листовой стали толщиной 2 мм. СВЧ-блок выполнен в основном из листового дюралюминия. СВЧ-блок закрыт защитным экраном, под которым расположен и вентилятор обдува. На пути протекания разогретого меда закреплен датчик системы контроля температуры. Блок управления 11 расположен на станине 1 в вентилируемом металлическом коробе, здесь ... 2189718 Пневматический высевающий аппарат ... совместного высева. - Кукуруза и сорго, 1988, 2, с. 37-38. 4. Н.В. Валуев, С.Т. Галайко, С.И. Федькин. Комплекс машин для производства сорго. Рекомендации. М.: Росагропромиздат, 1991. Формула изобретения Пневматический высевающий аппарат, содержащий бункер и семенную камеру с двумя отделениями для семян двух культур, корпус и вакуумную камеру, установленный между ними высевающий диск, содержащий основание с просасывающими отверстиями, соосно которым расположены отверстия накладки, имеющей симметрично расположенные просасывающим отверстиям сквозные вырезы по всему периметру, и прокладку, отличающийся тем, что отверстия накладки выполнены продолговатой формы длиной 1/3-1/4 ... |
Еще из этого раздела: 2312500 Способ защиты смородины от вредителей и болезней 2120709 Рама плуга 2444881 Конвейер для проращивания зерна 2144756 Селекционная сеялка для посева семян в кассеты 2239993 Устройство для комбинированного охлаждения сельскохозяйственной продукции естественным и искусственным холодом 2492633 Устройство для автоматического полива 2281645 Устройство для размещения цветов и растений с подсветкой (варианты) 2411718 Устройство для внутрипочвенного импульсного дискретного полива растений 2048744 Устройство для регулирования температуры воздуха в теплице 2110911 Способ выращивания птицы |
Изобретения в сельском хозяйстве
Обработка почвы в сельском и лесном хозяйствах
Посадка, посев, удобрение
Уборка урожая, жатва
Обработка и хранение продуктов полеводства и садоводства
Садоводство, разведение овощей, цветов, риса, фруктов, винограда, лесное хозяйство
Новые виды растений или способы их выращивания
Производство молочных продуктов
Животноводство, разведение и содержание птицы, рыбы, насекомых, рыбоводство, рыболовство
Поимка, отлов или отпугивание животных
Консервирование туш животных, или растений или их частей
Биоцидная, репеллентная, аттрактантная или регулирующая рост растений активность химических соединений или препаратов
Хлебопекарные печи, машины и прочее оборудование для хлебопечения
Машины или оборудование для приготовления или обработки теста
Обработка муки или теста для выпечки, способы выпечки, мучные изделия
|
|
||