Способ определения активности фотосинтетического аппарата растенийПатент на изобретение №: 2098948 Автор: Быховцев Б.Г., Челышева Е.В. Патентообладатель: Саратовский государственный университет им.Н.Г.Чернышевского Дата публикации: 20 Декабря, 1997 Адрес для переписки: подача заявки25.09.1995 публикация патента20.12.1997 Изображения Использование: сельское хозяйство. Сущность изобретения: активность фотосинтетического аппарата различных сортов растений определяют путем отбора растительных проб без нарушения целостности растений, производят подготовку проб, помещая растения в темновую камеру в условия, обеспечивающие сохранение тургора, после приведения фотосинтетического аппарата в активное состояние выделяют хлоропласты, суспендируют их и определяют их содержание в образцах по оптической плотности суспензии, затем измеряют интенсивность переменной и замедленной флуоресценции в суспензиях, предварительно приведенных к одинаковому числу хлоропластов, и по этим показателям судят об активности фотосинтетического аппарата растений. 1 ил. ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУИзобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к физиологии растений и может быть использовано в генетике растений и селекции для сравнительной оценки потенциальных возможностей селекционного материала. Наиболее близким к заявляемому является способ определения активности фотосинтетического аппарата растений [1] заключающийся в том, что выделяют растения из почвы, срезают листья, подготавливают пробы помещением в воду и выдерживанием в темноте при температуре 8 10oC в течение суток. Данная подготовка способствует освобождению хлоропластов от крахмальных зерен. Затем осуществляют изолирование хлоропластов. Для этого пробу листьев ополаскивают дистиллированной водой, обсушивают фильтровальной бумагой, взвешивают и измельчают на отрезки длиной 5 7 мм. Измельченный растительный материал (10 г) растирают в ступке, вмороженной в лед (-1, -5oC) в течение 30 с с 20 мл среды изолирования, содержащей компоненты следующих концентрациях: сахароза 0,04 М, фосфатный или трис- буфер 0,07 М, хлорид натрия 0,01 М, pH 7,9 8,0. Растертый растительный материал отжимают через 4 слоя капроновой ткани (50 отверстий на 1 см). Полученный фильтрат центрифугируют с охлаждением (-1oC) при 800 об/мин в течение 3 мин. Супернатант осторожно сливают, а рыхлый осадок хлоропластов мягко ресуспендируют капроновой кисточкой в 1- мл среды изолирования в течение 5 с. Затем измеряют показатели, отражающие физиологическое состояние хлоропластов с последующим определением по этим показателям активности фотосинтетического аппарата растений. Недостатком данного способа является длительная подготовка растений к анализу, не позволяющая охарактеризовать состояние растительного организма в момент отбора проб. Целью изобретения является повышение точности показателей, отражающих истинное состояние фотосинтетического аппарата растений. Поставленная цель достигается тем, что в способе определения активности фотосинтетического аппарата различных сортов растений, включающем отбор проб, подготовку проб путем приведения фотосинтетического аппарата в активное состояние, выделение хлоропластов из растительных тканей, суспендирование их, измерение показателей, отражающих физиологическое состояние хлоропластов и последующее определение по этим показателям активности фотосинтетического аппарата растений, пробы отбирают без нарушения целостности растений, подготовку проб производят непосредственно после выделения растений из почвы путем помещения растений в темновую камеру в условия, обеспечивающие сохранение тургора, после выделения хлоропластов определяют содержание их в образцах по оптической плотности суспензии, а в качестве показателей, отражающих физиологическое состояние хлоропластов, измеряют интенсивность переменной и замедленной флуоресценций в суспензиях, предварительно приведенных к одинаковому числу хлоропластов в них. Известных авторам из научно-технической и патентной литературы решений с данной совокупностью признаков не обнаружено. Результат, полученный в данном решении и обусловленный совокупностью этих признаков, не достигался в известных решениях. Изобретение поясняется чертежом, на котором представлена калибровочная зависимость оптической плотности суспензии от числа хлоропластов в ней. Заявляемый способ заключается в следующем. Проводят отбор проб, которые составляют из наиболее типичных растений, выращиваемых в полевых условиях. Сохраняя целостность, растение помещают в темновую камеру в условия микроклимата, обеспечивающие сохранение тургора. Таким образом приводят фотосинтетический аппарат растений в активное состояние. Затем в затемненном помещении срезают листья, промывают их дистиллированной водой, обсушивают, взвешивают, измельчают на отрезки длиной 5 7 мм и растирают в охлажденной ступке с некоторым количеством среды изолирования для выделения хлоропластов из тканей, Крупные частицы отделяют отжимом, затем суспензию фракционируют с помощью центрифуги, полученный после этого рыхлый осадок доводят средой изолирования до некоторого объема. После этого суспензии хлоропластов, выделенных из листьев, используют для построения калибровочной кривой. Для чего суспензии разбавляют в несколько раз с измерением их оптических плотностей. В неразбавленных и в каждой из разбавленных суспензиях подсчитывают число хлоропластов и строят график зависимости оптической плотности суспензии от количества хлоропластов в ней. По которому в последующем определяют количество хлоропластов в каждой из исследуемых суспензий. Затем выбирают суспензию с меньшим количеством хлоропластов в ней. Пересчетом определяют, в каком объеме других суспензий содержится такое же количество хлоропластов, как в суспензии с минимальным их содержанием. Отбирают этот объем и доводят средой изолирования до первоначального. Разбавленные таким образом суспензии подвергают темновой адаптации и измеряют интенсивность переменной и замедленной флуоресценций. Пример. Способ осуществляли в два этапа. Первый подготовительный, необходим для последующего выравнивания суспензий по количеству хлоропластов, включал построение калибровочной зависимости оптической плотности суспензии от количества органелл в ней, второй этап оценка состояния фотосинтетического аппарата видов и сортов травянистых растений по интенсивности флуоресценции хлоропластов. Отбор проб и выделение хлоропластов из растительных тканей для первого и второго этапов осуществляли одинаково. При отборе проб растения, типичные для каждого сорта, по три с каждой из девяти повторностей, выделили из почвы без повреждения корневой системы. В полевых условиях растений, сохраняя целостность, помещали в полиэтиленовый пакет, предварительно этикетированный, создавая таким образом микроклимат, препятствующий потере тургора, и помещали в темновую камеру, отдельную для каждого сорта или вида для приведения фотосинтетического аппарата растений в активное состояние с момента отбора проб. Время пребывания растения в данных условиях составляло от 0,2 до 6 ч. Выделение хлоропластов из тканей осуществляли так, как описано в предлагаемом способе, при массе навески 0,3 г растирали листья с 7 мл среды изолирования. Среда изолирования для хлоропластов пшеницы содержала компоненты в следующих концентрациях: 0,04 М сахарозы, 0,01 М хлорида натрия, 0,07 М калий-натрий фосфатного буфера с pH 8,0. Крупные частицы отделяли отжимом, а затем подвергали центрифугированю с помощью ПУМ-1 при 2500 об/мин в течение 5 мин. Полученный осадок доводили средой изолирования до 10 мл. Для осуществления первого этапа использования растения первой пробы в серии, которая длится в течение вегетации или в течение нескольких лет. Второй этап осуществляли так же, как первый. Оптическую плотность разбавленных в 5 и 10 раз суспензий измеряли при длине волны 546 нм в кювете 1,055 на спектрофотометре СФ4А. Число хлоропластов подсчитывали с помощью счетной камеры Горячева. А интенсивность переменной и замедленной флуоресценции измеряли на флуориметре, собранном на основе ФЭК-56, ФЭУ-56, микроамперметра, высоковольтного выпрямителя, в кювете 20,075. В исследование были включены сорта пшеницы мягкой, отличающейся по устойчивости. Оценка активности фотосинтетического аппарата каждого из сортов по интенсивности флуоресценции хлоропластов показала, что растения отличаются по соотношению величины замедленной и переменной флуоресценции хлоропластов стеблевых листьев (3-го и 5-го). У устойчивых сортов величина переменной флуоресценции выше, а величина замедленной ниже, чем у неустойчивых сортов. Таким образом, по показателям, отражающим физиологическое состояние хлоропластов (значениям интенсивностей переменной и замедленной флуоресценций) можно получить различия в активностях фотосинтетического аппарата у сортов, например, пшеницы различной устойчивости.ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯСпособ определения активности фотосинтетического аппарата различных сортов растений, включающий отбор проб, подготовку проб путем приведения фотосинтетического аппарата в активное состояние, выделение хлоропластов из растительных тканей, суспендирование их, измерение показателей, отражающих физиологическое состояние хлоропластов, и последующее определение по этим показателям активности фотосинтетического аппарата растений, отличающийся тем, что пробы отбирают без нарушения целостности растений, подготовку проб производят непосредственно после выделения растений из почвы путем помещения растений в темновую камеру в условия, обеспечивающие сохранение тургора, после выделения хлоропластов определяют содержание их в образцах по оптической плотности суспензии, а в качестве показателей, отражающих физиологическое состояние хлоропластов, измеряют интенсивность переменной и замедленной флуоресценций в суспензиях, предварительно приведенных к одинаковому числу хлоропластов в них.Популярные патенты: 2289908 Способ получения рассады стевии ... 24-25 дней. 1 ил. Область техники, к которой относится изобретениеИзобретение относится к растениеводству, в частности для укоренения зеленых черенков и выращивания рассады стевии (Stevia rebaudiana (Bertoni) Hemsley) без использования стимуляторов роста гетероуксиновой природы за счет создания оптимальных микроусловий (постоянная влажность воздуха - эффект "влажной камеры") для укоренения зеленых черенков, и может быть использовано как в условиях теплицы, так и вне защищенного грунта.УРОВЕНЬ ТЕХНИКИИзвестен способ получения рассады стевии укорененными зелеными черенками в рассадочных ящиках (см. Дзюба О.О. Автореф. канд. биол. наук, СПб, 1999; Дубянский М.М. ... 2145478 Гранулированное либо пеллетированное средство для защиты растений, способ его получения и способ борьбы с грибами ... к полученному после сушки покрытому оболочкой гранулированному удобрению. Пример 7 Аналогично примерам 1а) и 4а) на 3,8 кг гранулированного удобрения NP 20-20-0 с помощью двух раздельных сопел одновременно напыляли два раствора действующих веществ. Один из растворов содержал 2,5 г эпоксиконазола (согласно (), см. выше), а другой водную эмульсию типа "масло в воде" из 15 г фенпропиморфа. После сушки обработанный таким путем гранулят покрывали методом напыления аналогично примерам 1б), соответственно 4б) 740 г описанной в указанных примерах восковой дисперсией, причем температура приточного воздуха равнялась 45oC, а общий расход времени на нанесение покрытия составлял 62 мин. Пример 8 ... 2056755 Способ регулирования роста овощных культур ... воды. Через 7 сут после обработки снимали урожай салата (листья товарной спелости), отбирали среднюю пробу и определяли содержание нитратов в продукции. Повторность опыта пятикратная. Результаты представлены в табл. 1. Как видно из представленных в табл. 1 данных, максимальное снижение (на 60-65% ) содержания нитратов в листьях салата через 7 сут после обработки может быть достигнуто при использовании водного раствора препарата Сапфир в концентрации 0,1-0,5% П р и м е р 2. Растения салата сорта "Каменная головка" выращивали в теплице в вегетационных сосудах. В сосуды помещали по 12 кг почвы и вносили по 18 г комплексного минерального удобрения ("Нитрофоска") на один сосуд. В ... 2287923 Роторный энергосберегающий мостовой агрегат для сельскохозяйственных работ ... рабочие органы, например плуги 11, пахотно-посевного модуля 12. Каток 8 (Фиг.4) выполнен полым с отверстием 13 к емкости 5 и с отверстием 14 к улавливателю семян 15 семяпровода 16, соединенного с сошником 17. Приспособление 10 для установки рабочего органа в каретке 9 может быть выполнено, например, в виде стойки 18 с шарнирно закрепленным и подпружиненным пружиной 19 на ней рычагом-балансиром 20, в котором закрепляется рабочий орган, например, сошник 17 со стойкой 21. Колеса 4 на раме 2 РЭМА 1 установлены посредством поворотных стоек 22, которые выполнены с возможностью поворота в устройстве 23 из транспортного положения 24 (Фиг.1) во фронтальное рабочее положение 25 (Фиг.2) и ... 2434381 Технологическая линия для приготовления и раздачи влажных кормов ... - внутренней стенке кольцевого трубопровода предусмотрены отверстия, кольцевой трубопровод разделен перегородкой, к верхней и нижней кольцевым емкостям кольцевого трубопровода подведены трубопроводы, в нижней части дозатора установлен спиральный трубопровод, кран и электромагнитный клапан установлены на цилиндре кольцевого трубопровода. MM4A Досрочное прекращение действия патента из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе Дата прекращения действия патента: 19.11.2011 Дата публикации: ... |
Еще из этого раздела: 2084104 Ручная сеялка для разбросного посева семян травосмесей 2054249 Способ зимовки открытопузырных рыб 2302109 Способ снижения уровня никеля и свинца в крови и молоке коров техногенной провинции 2087614 Способ создания травяного газонного покрытия открытых спортивных площадок и ухода за ним 2157603 Способ послепосевного прикатывания озимых культур и каток для его осуществления 2215407 Способ создания исходного материала для селекции растений 2054872 Гербицидная композиция и способ борьбы с сорняками 2154296 Зерноуборочная машина, преимущественно зерноуборочный комбайн, с мультипроцессорным управляющим устройством 2399194 Способ и устройство контроля воздушного режима в корнеобитаемой среде 2414114 Зерноуборочный комбайн |
Изобретения в сельском хозяйстве
Обработка почвы в сельском и лесном хозяйствах
Посадка, посев, удобрение
Уборка урожая, жатва
Обработка и хранение продуктов полеводства и садоводства
Садоводство, разведение овощей, цветов, риса, фруктов, винограда, лесное хозяйство
Новые виды растений или способы их выращивания
Производство молочных продуктов
Животноводство, разведение и содержание птицы, рыбы, насекомых, рыбоводство, рыболовство
Поимка, отлов или отпугивание животных
Консервирование туш животных, или растений или их частей
Биоцидная, репеллентная, аттрактантная или регулирующая рост растений активность химических соединений или препаратов
Хлебопекарные печи, машины и прочее оборудование для хлебопечения
Машины или оборудование для приготовления или обработки теста
Обработка муки или теста для выпечки, способы выпечки, мучные изделия
|
|
||