Способ оценки устойчивости пшеницы к фузариозу колосаПатент на изобретение №: 2062558 Автор: Чигрин В.В., Соколов И.И., Жигалкина Т.Е., Сидорова Т.М., Паршина Т.В., Саенко З.В., Слюсаренко А.Н. Патентообладатель: Всероссийский научно-исследовательский институт биологической защиты растений Дата публикации: 27 Июня, 1996 Адрес для переписки: подача заявки14.05.1992 публикация патента27.06.1996 Изображения  Использование: изобретение относится к области селекции и может быть применено при выведении сортов пшеницы, устойчивых к фузариозу колоса. Сущность : после визуального отбора высокоустойчивых сортообразцов в зерне отобранных сортообразцов дополнительно проводят одновременное определение содержания мицелиальных белков фузариума и дезоксиниваленола, причем как устойчивые оценивают те сортообразцы, в зерне которых при испытаниях в 3-х независимых опытах в течение 2-х лет накопление мицелиальных белков фузариума не более или равно 100 мкг.г.-1 зерна, а дезоксиниваленола не более или равно 1 мкг.г.-1 зерна. При этом определение содержания мицелиальных белков фузариума проводят при помощи специфического к этим белкам иммунохимического или иммуноферментного анализа, а определение содержания дезоксиниваленола проводят методом газожидкостной или тонкослойной хроматографии. 2 з.п.ф-лы, 1 табл. , ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУИзобретение относится к области селекции и может быть применено при выведении сортов пшеницы, устойчивых к фузариозу колоса и способных сдерживать как развитие патогена в тканях зерновки, так и накопление фузариотоксинов, а также для оценки зараженности посевного материала. Известен способ оценки мицелия фузариума в зерне пшеницы, заключающийся в определении одного из грибных метаболитов эргостерина /1/. Недостатком известного способа является то, что накопление эргостерина может отражать наличие других грибных организмов, не имеющих отношения к возбудителю фузариоза колоса. Определение развития фузариума по накоплению эргостерина равно, как и по другим грибным метаболитам (сахароспирты, хитин и т.п.) не обладает, таким образом, необходимой специфичностью. Известен способ визуальной оценки устойчивости злаков к фузариозу колоса по 9 балльной шкале /2/. Недостатком известного способа являются то, что данный способ не позволяет выявить сорта пшеницы, являющиеся одновременно устойчивыми к поражению фузариозом колоса и накоплению фузариотоксина (ДОН). Целью предложенного способа является улучшение способа. Поставленная цель достигается тем, что в зерне сортообразцов, визуально оцененных как высокоустойчивые одновременно определяется содержание мицелиальных белков фузариума (МБФ) при помощи специфичного к этим белкам иммунохимического или иммуноферментного анализа, предпочтительно методом твердофазного конкурентного анализа с использованием коньюнгированных с пероксидазой кроличьих иммуноглобулинов против растворимых белков мицелия Fusarium graminearum, а также -дезоксиниваленола (ДОН) методом газожидкостной или тонкослойной хроматографии, причем устойчивыми считаются сорта пшеницы, в зерне которых накопление МВФ составляет 100 мкг.г-1 зерна, а ДОН I мкг. г-1 зерна. ПРИМЕР. На полевом участке в течении двух лет закладывают не менее трех независимых экспериментов с испытуемым набором сортообразцов, из которых отбирают сортообразцы, показавшие высокую устойчивость при визуальной оценке /2/. Зерно этих сортообразцов сохраняют для дальнейшего анализа на содержание в них МВФ и ДОН. Данные по визуальной оценке приведены в таблице. Белки мицелия гриба F. graminearum выращенного на среде Чапека, экстрагируют 0,05 М фосфатно-солевым буфером и очищают на колонке с сефадексом Ст-25, контролируя выход белка при E=280 нм. Полученный раствор МВФ используют для иммунизации кроликов и сенсибилизации полистирольных планшетов, применяемых в твердофазном конкурентном иммуноферментном анализе. Выделение и очистку иммуноглобулинов осуществляют путем осаждения полиэтиленгликолем. Иммуноглобулины сохраняют при температуре минус 24oС. Коньюгирование проводят по методу Вильсона и Накане /3/. Количественное определение МВФ проводят при помощи прямого конкурентного иммуноферментного анализа следующим образом. Образец зерна (1 г) при встряхивании 3 мл 0,05 М фосфатносолевым буфером (рН 7,4), и после отделения нерастворившегося осадка центрифугированием, аликвоту супернатанта преинкубируют с равным объемом конъюгата. Затем 100 мкл смеси вносят в лунку планшета, сенсибилизированного 250 мкл раствора МВФ (100 мкл.мл-1). После инкубации в течение 1 ч при температуре 37oС, лунки планшетов промывают фосфатносолевым буфером (0,05 М; рН 7,4), содержащим 0,1 Твина 20, добавляют 100 мл раствора пероксидазного субстрата (4мг о-фенилендиамина и 20 мкл 33 H2O2 в 10 мл 0,5 М фосфатноцитратного буфера рН 5,0). Планшеты инкубируют в течение 20 мин при температуре 37oС, останавливают реакцию добавлением в каждую лунку 200 мкл 1 Н H2SO4 и измеряют оптическую плотность на автоматическом регистрирующем многоканальном спектрофотометре при E 490. Одновременно те же операции проводят с мукой из здоровых зерен (контроль). Количество МВФ в пробе просчитывают по формуле X 0,02025е0,12у где X количество МБФ в зерне, мкг. г-1 е основание натурального логарифма (2,7) у снижение оптической плотности по сравнению с контролем, Данные по определению МВФ приведены в таблице. Определение содержания ДОН. Навеску зерна размалывают до тонкой муки. Для определения содержания ДОН отбирают 20 г муки. Количество ДОН определяют методом газожидкостной /4/ или тонкослойной /5/ хроматографии. Результаты анализа приведены в таблице. Предельно допустимая концентрация (ПДК) ДОН в зерне пшеницы составляет 1,0 мкг. г-1 зерна /6/, что и было принято во внимание при установлении верхней границы загрязненности дезоксиниваленолом. Из анализа данных следует: результаты визуальной оценки интенсивности заражения в баллах не всегда совпадают с оценкой накопления МВФ в зерне (r= 0,62), т.к. видимые изменения тканей колоса отражают реакцию именно его тканей, а иммуноанализ дает объективные представления о биологической устойчивости тканей зерновки; в каждой группе сортообразцов, объединяемых одним баллом поражения, встречаются образцы значительно отличающиеся от средних значений по накоплению в зерне МВФ, что не позволяет ограничиваться визуальной оценкой для выявления сортообразцов с биологической устойчивостью; связь между данными визуальной или иммунологической оценки интенсивности заражения и содержанием ДОН весьма слаба (ч 0,4-0,5), поэтому в заявляемом способе для оценки устойчивости сортообразца определение содержания ДОН в зерне обязательно; низкий балл визуальной оценки степени поражения, таким образом, лишь увеличивает вероятность обнаружения образцов с биологическим и антитоксинным характером устойчивости, но не гарантирует отбор устойчивых образцов; снижение содержания МВФ в зерне ниже 100 мкг.г-1 резко увеличивает вероятность обнаружения незагрязняемых ДОН образцов и поэтому эта концентрация принята в качестве меры биологической устойчивости сорта. При содержании МВФ в зерне 50 мкг. г-1 зерна и ниже биологическая (антигрибная) устойчивость сорта может быть оценена как высокая. Таким образом, одновременная оценка биомассы патогена по накоплению МВФ и ДОН в зерне селекционных образцов, высокоустойчивых по данным визуальной оценки, согласно заявляемому способу, исключает возможность ошибки, т.е. отбора растений, способных подавлять развитие гриба, но дающих зерно, загрязненное токсинами выше ПДК. Наличие количественных показателей, характеризующих развитие гриба, позволяет правильно оценить данные по накоплению ДОН. Заявляемый способ дает возможность в течение двух лет выявить сорт, обладающий комплексным (биологическим и антитоксинным) характером устойчивости к фузариозной гнили колоса. Источники информации, принятые во внимание: 1. Miller J.D. Joung J.C. Sampson D.R. J. Phytopathol, 1985, v 117, p.p. 354-364. 2. Методы селекции и оценки устойчивости пшеницы и ячменя к болезням в странах, членах СЭВ. Прага. 1988, С. 231(прототип). 3. Wilson М. В. Nakane Р.К. lmmunofluorescencc and related staining technigues. Amsterdam, NX. Elsevier/n Holland biamed, Press, 1978, p.p. 215-224. 4. Эллер К. И. Соболев B.C. Использование газожидкостной хроматографии для анализа фузариотоксинов (трихотеценп, зеараленон)// Оценка загрязнения пищевых продуктов микотоксинами. Т.3. С. 206-215, М. 1985. 5. Соболев B.C. Химические методы анализа трихотеценовых микотоксинов // Оценка загрязнения пищевых продуктов микотоксинами. Т.3. С. 216-239, М. 1985. 6. Методические указания по обнаружению, идентификации и определению содержания дезоксиниваленола (вомитоксина) в зерне и зернопродуктах. Минздрав ССCР, ГСЭУ, М. 1988.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Способ оценки устойчивости пшеницы к фузариозу колоса, включающий визуальный отбор высокоустойчивых сортообразцов, отличающийся тем, что в зерне отобранных сортообразцов проводят дополнительно одновременное определение содержания мицелиальных белков фузариума и дезоксиниваленола, причем как устойчивые оценивают те сортообразцы, в зерне которых при испытании в трех независимых опытах в течение двух лет накопление мицелиальных белков фузариума не более или равно 100 мкг г-1 зерна, а дезоксиниваленола не более или равно 1 мкгг-1 зерна. 2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что определение содержания мицелиальных белков фузариума проводят при помощи специфического к этим белкам иммунохимического или иммуноферментного анализа. 3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что определение содержания дезоксиниваленола проводят методом газожидкостной или тонкослойной хроматографии.Популярные патенты: 2264065 Способ возделывания сельскохозяйственных культур на корм ... нормой высева 3 млн. всхожих семян на 1 га. В качестве контроля высевали одновидовой посев тритикале и его смесь с озимой викой. Весной возобновлял вегетацию сначала тритикале, и только через 7-10 дней начинал отрастать донник. Поэтому в начальный период вегетации донник отставал от тритикале в росте, и преимущество по урожайности и качеству корма имела смесь тритикале с викой. Но, начиная с фазы колошения тритикале, когда донник вступал в фазу бутонизации и цветения и интенсивно наращивал надземную биомассу, тритикале-донниковая смесь существенно превосходила тритикале-виковую по урожайности абсолютно сухого вещества (табл.2). Таблица 2Влияние способа посева озимого тритикале с ... 2161391 Комбинированная почвообрабатывающая посевная машина ... a.с. N 1523066, МКИ A 01 B 49/02 от 24.3.88), содержащая навесную часть, раму, на которой смонтированы плоскорезные рабочие органы, опорные колеса, навеску и прицепную часть соединенную с навесной частью оборудованной пассивными рабочими органами. К недостаткам известной машины относится то, что во время работы происходит залипание дисков катка из-за попадания пожнивных остатков и влажной почвы в междисковое пространство, недостаточное крошение почвы, не создается уплотненное посевное ложе. При использовании этой машины предусмотрен только раздельный посев зерновых культур. Задачей изобретения является устранение указанных недостатков известных технических решений. Технический ... 2040900 Фунгицидное средство ... Описанный способ консервирования представляет часть настоящего изобретения. Активные вещества формул I и II применяют соответственно изобретению в виде совместных составов и могут использоваться в данном случае совместно с другими употребительными в технике составления смесей вещества носителями, поверхностно-активными веществами или другими добавками, способствующими нанесению. Пригодные носители и добавки могут быть твердыми или жидкими и соответствовать веществам целевого назначения, употребительным в технике составления рецептур или смесей. Примерами служат, например, минеральные вещества природного или искусственного происхождения, растворяющие, диспергирующие, ... 2168887 Машина для добычи корней ... узлов привода и современный дизайн машины в целом. Предложенная машина характеризуется широкими возможностями. Она с успехом может эксплуатироваться во всех природно-климатических зонах не только Российской Федерации, но и в других регионах. Машина приспособлена для добычи и других лекарственных растений с аналогичным строением корневой системы (например, алтей Althaea officinalis L.). Следовательно, заявленное изобретение соответствует требованию "промышленная применимость" по действующему законодательству. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Машина для добычи корней, содержащая раму на опорах, подкапывающий лемех, элеватор, ротор и его привод, причем ротор выполнен двухлопастным, ... 2400963 Передвижной перегрузчик для зерна сельскохозяйственных культур ... транспортные средства - самоходным зернопогрузчиком. Перемещение бункера производится без зерна.Недостатком такого перегрузчика является то, что при смене места его расположения на поле требуется сравнительно много рабочего времени на его подготовку в транспортное положение, перемещение и установку в рабочее положение. Это связано с тем, что из-за громоздкости перегрузчика приходится раздельно перемещать эстакаду и бункер, а затем устанавливать их в рабочее положение. Для выполнения этой работы необходимо два трактора. Можно использовать один и тот же трактор как для перемещения эстакады, так и для перемещения бункера, но тогда время доставки перегрузчика на другое место ... |
Еще из этого раздела: 2146444 Способ выявления и отбора стрессоустойчивых животных 2399194 Способ и устройство контроля воздушного режима в корнеобитаемой среде 2444885 Посевной агрегат 2447645 Аппарат для обмолота коробочек семян 2091380 Производные пиколиновой кислоты или их кислотно-аддитивные соли, способ их получения, нербицидная композиция и способ борьбы с сорняками 2397634 Жалюзийное решето 2473211 Приспособление для автоматической дойки молочного скота 2388213 Способ измерения урожайности травяного покрова 2197082 Установка для охлаждения молока с использованием естественного холода 2232490 Машина для обработки почвы |
Изобретения в сельском хозяйстве
Обработка почвы в сельском и лесном хозяйствах
Посадка, посев, удобрение
Уборка урожая, жатва
Обработка и хранение продуктов полеводства и садоводства
Садоводство, разведение овощей, цветов, риса, фруктов, винограда, лесное хозяйство
Новые виды растений или способы их выращивания
Производство молочных продуктов
Животноводство, разведение и содержание птицы, рыбы, насекомых, рыбоводство, рыболовство
Поимка, отлов или отпугивание животных
Консервирование туш животных, или растений или их частей
Биоцидная, репеллентная, аттрактантная или регулирующая рост растений активность химических соединений или препаратов
Хлебопекарные печи, машины и прочее оборудование для хлебопечения
Машины или оборудование для приготовления или обработки теста
Обработка муки или теста для выпечки, способы выпечки, мучные изделия
|
|
||