Консервирующая жидкость для трансплантантовПатент на изобретение №: 2053671 Автор: Гавриленко Г.А., Стадников А.А., Анненкова А.М., Гавриленко В.Г., Волков Д.В. Патентообладатель: Гавриленко Геннадий Андреевич Дата публикации: 10 Февраля, 1996 Адрес для переписки: подача заявки23.09.1992 публикация патента10.02.1996 Изображения  Изобретение относится к медицине, а именно к трансплантологии. С целью создания консервирующей среды, наиболее приближенной по своим свойствам к природным, предложена в качестве консервирующего раствора амниотическая жидкость рожениц, в которую после тщательного центрифугирования добавляли трасилол и солкосерил в концентрациях, соответствующих их оптимальному лечебному действию. В сравнении с известными консервирующими средами 199 и "Евроколлинз" установлено, что предложенная жидкость (условное название АЖ-90А) не уступает по своим качествам этим распространенным в практике консервантам. Ее стоимость ниже стоимости сред 199 и "Евроколлинз". Возможно дальнейшее совершенствование АЖ-90А и ее использование в трансплантологии. 2 табл. , ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУИзобретение относится к медицине, а именно к трансплантологии, и может быть использовано в клинической и экспериментальной медицине для консервации органов и тканей без их предварительной перфузии, а также для перфузии органов с целью очищения их сосудистого русла от остатков крови с последующей консервацией и пересадкой. Трансплантология постоянно испытывает большие трудности в связи с дефицитом донорских органов и сохранением их жизнеспособности, обусловленной несовершенством консервирующих сред. Из всех существующих к настоящему времени консервирующих сред лучшей является "Евроколлинз", хотя широкое распространение имеет среда 199, которая используется в микробиологии, экспериментальной хирургии и биологии. Среда 199 предложена в 1950 г. Morgan c cоавт. Среда 199 имеет чрезвычайно сложный состав, в нее входят аминокислоты, комплекс витаминов, липоиды, компоненты нуклеиновых кислот, глюкоза, альфа-глутатион, альфа-гуламин и т. д. (Анджапаридзе О.Г. и соавт. 1962, с.28-30). Наиболее широко применяется для культивирования различных тканей. Приготовление среды 199 трудоемкое и дорогостоящее. В центрах трансплантации всего мира для перфузии и временной консервации пересаживаемого органа хирургии применяют раствор "Евроколлинз". Он сохраняет жизнеспособность сердца, печени, почек и других органов на период от их изъятия у донора до включения в кровоток уже в организме реципиента (Шумаков В. И. и соавт. 1991). Имеются указания и на другие консервирующие среды без их рецептуры и характеристик (Лопухин Ю.М. 1978, Лопаткин Н.А. Лопухин Ю.М. 1989). Раствор "Евроколлинз" в своей основе состоит из уравновешенных по электролитному составу с внутриклеточной жидкостью компонентов. В него входят: калий фосфорнокислый однозамещенный 2,05 г/л; калий фосфорнокислый двузамещенный 7,4 г/л, калия хлорид 1,12 г/л, натрия гидрокарбонат 0,8; глюкоза 35,0 г/л; вода дистиллированная 1000,0. Авторы поставили задачу создание консервирующего раствора не уступающего по своим качествам среде 199 и раствору "Евроколлинз", главные преимущества которого должны заключаться в том, что свойства консерванта будут максимально приближены к природным. Существенным отличием предлагаемого изобретения является применение амниотической жидкости рожениц с добавлением в нее солкосарила и трасилола. Преимущества амниотической жидкости (АЖ) человека по сравнению со средой 199 и раствором "Евроколлинз" придают ее следующие основные свойства: 1) оптимальная близость по биохимическому составу к плазме крови человека; 2) ее значительная антибактериальная активность; 3) иммуносупрессивные свойства; 4) высокое содержание кислорода. Солкосерил депротеинезированный гемодиализат из крови телят. В его состав входят органические вещества низкого молекулярного веса, а также неорганические вещества. Этот препарат ускоряет поглощение и утилизацию кислорода, а также глюкозы клетками увеличивает резервы АТФ. Основным показанием к его применению служит нарушение циркуляции как артерального, так и венозного кровотока, а также их осложнения (гипоксия со всеми последствиями). Переносимость даже больших доз солкосерила хорошая ("Вадемекун") проспект, Солко Базель АГ, Бирсфельден Базель, 1987 г. Кроме того, было показано (Гавриленко Г.А. и соавт. 1985; Гавриленко Г.А. и соавт. 1991), что солкосерил обладает заметной антиоксидантной активностью. Трасилол основной ингибитор протеаз. Получил широкое распространение не только при лечении панкреатита, но и при лечении инфаркта миокарда, тиреотоксического криза, шока, перитонита. Характеристика и испытания АК-90А. Обширная научная литература по составу АК свидетельствует о том, что она обладает оптимальным электролитным составом, значения ее pH находятся в пределах значений pH плазмы крови, кроме того она обладает иммуносупрессивными свойствами, содержит биологически активные вещества, стерильна, обладает антимикробными свойствами; напряжение в ней кислорода выше, чем в крови плода (Анкирская А.Р. 1985; Волкова А.С. 1980; Емельянова А.И. и соавт. 1982; Паллади Г.А. Карку Г.А. 1972, 1974; Савельева Г.М. Федорова К.В. 1984; Федорова М.В. Быкова Г.Ф. 1982). Нами использована АЖ женщин в возрасте 15-36 лет. Всем проведено общеклиническое, лабораторное и акушерское обследование. Среди обследованных женщин не было больных вирусным гепатитом, сифилисом, ВИЧ-инфицированных. По данным биохимических исследований (общий билирубин сыворотки крови и его фракции, активность АЛТ, АСТ, мочевина, креатинин) основные функции печени и почек не были нарушены. До вмешательства были исключены воспалительные заболевания гениталий и экстрагенитальная патология. Амниотическую жидкость брали в стерильных условиях тонкой стерильной иглой путем пункции плодного пузыря. В стерильный флакон одномоментно забирали 150-200 мл АЖ. Производили забор АЖ в пробирку для определения стерильности, флакон с АЖ закрывали стерильной пробкой и ставили в камеру бытового холодильника с температурой +4оС. Центрифугирования и выделения супернатанта перед хранением не проводили. Через 4 недели хранения АЖ отправляли в бактериологическую лабораторию на посев. Одновременно с забором АЖ на посев сразу после пункции плодного пузыря 4,0 мл жидкости брали для исследования в ней диеновых коньюгатов (ДН) и малонового диальдегида (МДА). Концентрацию ДК и АЖ определяли по методике И.Д. Стальной (1977). Посев АЖ на стерильность через 1 мес. хранения производили в бактериологической лаборатории с рассевом АЖ по 0,1 мл на плотные питательные среды. Использовали кровяной агар и среду Эндо. Посевы инкубировали при температуре 37оС и просматривали ежедневно. Окончательный вариант приготовленного раствора АЖ-90А представляет из себя следующее: 200 мл стерильной отцентрифугированной АЖ (10 мин, 3000 об/мин), куда добавлено солкосеила 0,8 мл и 40000 КIE трасилола. Расчет дозы солкосерила и трасилола производили по формуле Д где Д доза лекарства в 200 мл, АЖ-90А, Д1 максимальная разовая доза лекарства, вводимого внутривенно; 5000-5000 мл циркулирующей крови в организме человека с массой 70-80 кг. Экспериментальный раздел выполнен на беспородных белых крысах-самцах массой 3000  20 г. Животным производили декапитацию кусочки ткани сердца, печени и почки брали остро заточенным конхотомом. Это позволяло иметь биоптаты равного объема с незначительной травматизацией тканей. Изъятые кусочки отмывали в соответствующей жидкости, после чего каждый погружали в бюкс емкостью 5 мл и держали в холодильной камере при температуре +4оС. Окончательным сроком хранения было 3 сут. Кусочки одновременно изымали из бюкса с соответствующей жидкостью (табл.1). Перфузию органов (эксперимент 4) проводили после скрытия грудной и брюшной полостей и канюлирования левого желудочка сердца. К канюле подключали посредством переходной эластичной трубки 20 мл шприц с перфузионной жидкостью. Перфузию начинали после скрытия бедренной вены и проводили до остановки сердца и просветления паренхимы печени и почек. Методы оценки жизнеспособности тканей весьма разнообразны, также как и способы консервации. Так, сравнивая эффективность перфузионной консервации работающего на специальном стенде сердца, И.В. Ступин и соавт. (1978) нашли, что уже через 3 ч после начала перфузии, как солевым раствором, так и средой 199, 50% разведенной кровью, криоприципитатной плазмой происходят значительные измерения функции миокарда. При этом отмечены некоторые преимущества среды 199 (Лопухин Ю.М. 1978). При бесперфузионной жидкостной консервации органов в условиях гипотермии "достоверную жизнеспособность органов" констатировали на сроках от 3 до 36 ч. Бесперфузионная газовая консервация обеспечивала жизнеспособность от 3 до 46 ч (там же). Достоверная жизнеспособность при перфузионной нормотермической консервации достигнута в интервале от 3 до 12 ч (Биленко М.В. и др. 1966). Способы оценки жизнеспособности также весьма разнообразны: от электронно-микроскопического контроля до определения качества работы органа (чисто функциональная оценка) на стенде (Лопухин Ю.М. 1978). Нами применен простой, но достаточной информативный метод оценки переживаемости тканей морфологический контроль с морфометрическим анализом. Материал фиксировали в 10%-ном растворе нейтрального формалина. Обезвоживание и уплотнение производили в спиртах возрастающей крепости и заливали в смесь парафина и воска (соотношение 9:1). Парафиновые срезы толщиной 5-6 микрометров окрашивали гематоксилином Майера и эощином. Проводили морфологический и морфометрический анализ структур изучаемых органов. Всего морфологическое исследование проведено на 66 биоптатах. Результаты исследования и их обсуждение. Хранение набранной в стерильных условиях в стерильную посуду АЖ в бытовом холодильнике при температуре +4оС в течение месяца без добавления в нее каких-либо антибактериальных лекарственных веществ показало полную ее стерильность. Во всех 48 случаях посевы АЖ в бактериологической лаборатории не дали роста микрофлоры. Это позволило еще раз убедиться в том, что АЖ обладает антибактериальной активностью. Определение содержания в АЖ ДК и МДА выявило в целом довольно однообразные показатели их концентрации в этой среде. Наиболее существенным оказалось значительно меньшая их концентрация в АЖ по сравнению с содержанием в плазме крови здоровых людей. Так, концентрация МДА в плазме 49 здоровых людей (доноров) составляла в среднем 2,24 0,01 нмоль/мл. В АЖ концентрация МДА достигала лишь 1,74 0,005 кд. опт. плотности, в АЖ 1,14 0,14 ед.опт. плотности. Вместе с тем, у отдельных женщин были обнаружены концентрации ДК и МДА в АЖ значительно превышающие средние показатели. Нам не удалось связать эти отклонения с какими-либо клиническими или биохимическими проявлениями какого-то заболевания. Да и заболеваний, как следует из анализа историй болезни, у них не было. Возможно, подобные всплески (до 3,82 и 5,27 нмоль/мл) содержание МДА и ДК (до 4,76 и 3,68 ед, опт.плотности) следует объяснять различной стрессовой реакцией. Однако, определив высокие уровни ДК и МДА в АЖ, мы исключили подобные случаи из эксперимента, а брали в опыт АЖ от тех женщин, у которых концентрация МДА и ДК были минимальными. Морфологические изменения в органах после консервации. Печень. При использовании среды 199 и раствора "Евроколлинз" без предварительной перфузии на всех стадиях инкубации отмечается пикноз ядер гепатоцитов, вакуолизации цитоплазмы, ее "осыпание". В центральной части долек появляются оксифильные клетки, что свидетельствуют о паранекротических процессах. Периферические участки при этом сохраняют базофильную окраску цитоплазмы гепатоцитов. В синусоидных капиллярах отмечаются явления стаза форменных элементов крови. Наряду с гибнущими и паранекротически измененными гепатоцитами наблюдаются сохранные клетки, содержащие в своей цитоплазме гранулы липофуоцина. Структурный гетероморфизм гепатоцитов нарастает к третьим суткам инкубации. В целом, однако, исследованные фрагменты печени не утрачивают структурной организации своих стромальных и паренхиматозных элементов. В этом варианте экспериментов несколько более благоприятный эффект на сохранность тканей печени оказала среда "Евроколлинз" (табл.2). Почки. Установлено, что основные структурные компоненты коркового и мозгового вещества почки сохраняются во все сроки наблюдения. Общими морфологическими признаками реактивных изменений этого органа были следующие: резкое расширение полостей капсул Шумлянского-Боумена, разрушение щеточной каемки проксимальных отделов нефрона. Локальная десквамация нефроцитов, особенно на стадии 3 сут инкубации, когда значительно увеличивалось число клеток с признаками кариопикноза и кариорексиса. Сравнительный анализ по трем используемым средам показал, что среда "Евоколлинз" относительно лучше воздействовала на сохранность структур почки (табл.2). Жидкость А-90 и среде 199 оказали близкий эффект. Эти два консерванта в данном варианте эксперимента не обеспечивают сохранности большей части гломерул и извитых канальцев на стадиях двух и трех суток. Неблагоприятным фактором при этом является мозаичный процесс разрушения сосулистых клубочков, а также канальцевых отделов нефронов через трое суток во всех наблюдениях. Сердце. Здесь особых различий в действии испытанных консервантов обнаружено не было. Отмечен выраженный пикноз ядер кардиомиоцитов, просветление цитоплазмы в парануклеарной зоне за счет разрушения миофибрилл. Характерным также является отек интеротициальной ткани и инфильтрация ее лейкоцитами. К трем суткам исчезает поперечная исчерченность клеток, увеличивается число пикноморфных кардиомиоцитов. Результаты этой серии экспериментов позволили сделать заключение о том, что среда "Евроколлинз" оказывает более благоприятное воздействие на сохранность гистоструктур печени и почек нежели среды 1099 и АЖ-90А. Хотя и в случае использования среды "Евроколлинз", явления структурных повреждений клеточных и тканевых элементов имели место. Изменения гистоструктуры сердца после консервации в трех средах не выявили сколько-нибудь достоверных различий при тщательном морфометрическом контроле. Заметное превосходство раствора АЖ-90А над двумя другими выявлены при условии консервации тканей указанных органов после предварительной кратковременной изотермической перфузии этих органов предлагаемым раствором. Морфометрические данные представлены в табл.2. Таким образом, анализ проведенного экспериментального сопоставления консервирующих качеств среды 199, раствора "Евроколлинз" и амнистической жидкости человека с добавлением в нее трасилола и солкосерила (АЖ-90А) показал их сходные качества, а в отдельных проявлениях консервирующие свойства АЖ-90А превосходили таковые среды 199 и "Евроколлинз". Консервация этих же органов при таких же условиях, но после кратковременной перфузии раствором АЖ-90А значительно улучшали морфометрические показатели переживаемости органов (тканей) в течение 3 сут при температуре +4оС. Получаемая консервирующая жидкость не требует специальных затрат. Появляется возможность расширения ассортимента консервирующих сред, причем предлагаемая по качеству превосходит известные растворы, по цене она дешевле. Возможно приготовление АЖ-90А в достаточно больших количествах с небольшими экономическими затратами.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯКОНСЕРВИРУЮЩАЯ ЖИДКОСТЬ ДЛЯ ТРАНСПЛАНТАНТОВ, отличающаяся тем, что включает амниотическую жидкость, солкосерил и трасиол при следующих соотношениях компонентов : Солкосерил - 0,8 мл Трасилол - 40,000 К1Е Амниотическая жидкость - 200 мл.Популярные патенты: 2239968 Способ предпосевной обработки семян овощных культур ... мВ, содержанием активного хлора 0,03-0,05% на 0,5-3 ч, а затем в католитном растворе с рН 6-9, окислительно-восстановительным потенциалом (-300) - (-500) мВ на 2-24 ч и высушивают до состояния сыпучести (RU, патент № 2170499, С2, МПК7 А 01 С 1/00. Способ предпосевной обработки семян /Н.А.Болотов, Е.Е.Кашкин, В.Е.Шевченко (RU). - Заявка № 99121038/13; заявлено 05.10.1999; опубл. 20.07.2001, БИ № 20 //Изобретения и полезные модели. - 2001, - № 20).К недостаткам данного способа относятся то, что растворы католит и аналита лишь подавляют развитие на поверхности семян патогенных микроорганизмов и не способствуют энергии роста зародышей.Известно также средство для предпосевной ... 2476068 Фильтр для использования при переработке пищевых продуктов ... движения в соответствующей прорези (2).9. Фильтр по п.7 или 8, отличающийся тем, что в основном элементе (30) предусмотрен промывочный канал (3) для пропуска промывочной жидкости, причем промывочный канал (3) имеет ответвляющиеся сливные каналы (4), которые соответственно оканчиваются в прорези (2).10. Фильтр по п.9, отличающийся тем, что сливные каналы (4) имеют прямоугольное поперечное сечение, ширина которого соответствует ширине прорези (2).11. Применение фильтра по одному из предыдущих пунктов в качестве «вторичного» фильтра (Rework-Filter), выполненного с возможностью задерживать в виде остатка добавляющиеся к продукту зернистые ингредиенты и тем самым ... 2482663 Способ мелиорации почвы рисовой оросительной системы к посеву риса ... на 4-6%, подвижным калием на 5-6% и подвижным фосфором 7-9%. Получена 15% прибавка урожая риса. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ мелиорации почвы рисовой оросительной системы к посеву риса, включающий осеннюю зяблевую вспашку почвы, ремонтно-мелиоративные работы в межвегетационный период, весеннюю предпосевную обработку почвы, отличающийся тем, что после вспашки зяби по предшественникам определяют агромелиоративное состояние рисовой оросительной системы, которое оценивают по критериям: «хорошее», «удовлетворительное» или «неудовлетворительное»; затем в зависимости от фактического агромелиоративного состояния рисовой оросительной системы ... 2056737 Способ диагностики морозоустойчивости плодовых культур ... культур и судят об их морозоустойчивости. Все вышеизложенное позволяет сделать вывод о соответствии признака критерию "изобретательский уровень". Оценка морозоустойчивости сортов плодовых культур может осуществляться на ранних этапах развития растения (в однолетнем возрасте), что значительно сократит селекционный процесс при создании новых сортов с отмеченным свойством. В качестве критерия оценки морозоустойчивости сортов использовано изменение содержания фруктозы в растительной ткани (почках) под действием низких отрицательных температур, характеризующее стрессовое состояние растения. Кроме того, в данном случае облегчается отбор ткани для анализа. П р и м е р. Для проверки ... 2064741 Устройство для обработки почвы ... и увеличивает энергозатраты, так как для снижения энергозатрат необходимо уменьшать скорость воздействия на почву рабочих органов, а для увеличения производительности необходимо увеличивать поступательную скорость движения машины. Шарниры звеньев движителя при работе движутся по плоской кривой, в первом варианте близкой к циклоиде, во втором варианте кривая движения не оговаривается. При такой траектории движения рабочие органы создают в почве излишние деформации сжатия, ухудшающие качество и энергоемкость почвообработки. Устройство снабжено рамой, гусеничным движителем, включающем прикрепленные к раме ведущее, натяжное колесо и поддерживающие катки, охваченные гусеничным ... |
Еще из этого раздела: 2158069 Способ повышения урожайности сельскохозяйственных культур 2167510 Способ и устройство для изготовления круглых тюков соломы или подобного материала с пленочным защитным покрытием 2166252 Способ удаления костного мозга из губчатых костных трансплантатов 2272399 Зерноуборочный комбайн 2124290 Препаративная форма в виде раствора для местного применения для обработки животных (варианты), способ получения и способ обработки животных (варианты) 2095957 Устройство для транспортирования подстилочного навоза 2007901 Устройство для хранения овощей и фруктов 2423036 Биоконтейнер для посадки растений 2159030 Способ широкорядного посева пропашных культур 2275801 Способ выращивания рыбы в рисовых чеках (варианты) |
Изобретения в сельском хозяйстве
Обработка почвы в сельском и лесном хозяйствах
Посадка, посев, удобрение
Уборка урожая, жатва
Обработка и хранение продуктов полеводства и садоводства
Садоводство, разведение овощей, цветов, риса, фруктов, винограда, лесное хозяйство
Новые виды растений или способы их выращивания
Производство молочных продуктов
Животноводство, разведение и содержание птицы, рыбы, насекомых, рыбоводство, рыболовство
Поимка, отлов или отпугивание животных
Консервирование туш животных, или растений или их частей
Биоцидная, репеллентная, аттрактантная или регулирующая рост растений активность химических соединений или препаратов
Хлебопекарные печи, машины и прочее оборудование для хлебопечения
Машины или оборудование для приготовления или обработки теста
Обработка муки или теста для выпечки, способы выпечки, мучные изделия
|
|
||