Штамм бактерий bacillus thuringiensis var kurstaki для получения биоинсектицидаПатент на изобретение №: 2033721 Автор: Шевцов В.В., Щелокова Е.В., Жиглецова С.К. Патентообладатель: Малое государственное предприятие "Биотехнологический внедренческий центр" Дата публикации: 30 Апреля, 1995 Адрес для переписки: подача заявки10.10.1991 публикация патента30.04.1995 Изображения Использование: микробиологическая промышленность, производство энтомоцидных бактериальных препаратов, касается нового бесспорового штамма бактерий для получения вышеуказанного препарата. Сущность изобретения: штамм бактерий Bacillus thuringiensis var. kurstaki 7А получен в результате химического мутагенеза с помощью этилметансульфоната, депонирован во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов (ВКПМ) под N В-5155. Для получения биоинсектицида штамм выращивают на среде, содержащей кормовые дрожжи (БВК), кукурузную муку и водопроводную воду. Активность культуральной жидкости в отношении личинок непарного шелкопряда составляет 0,044%. 3 табл. ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУИзобретение относится к микробиологической промышленности и представляет собой новый, не образующий спор штамм Bacillus thuringiensis (ВТ) III серотипа (НЗ) var. kurstaki 7A (ВКПМ-5155) для получения на его основе экологически безопасного, не содержащего живых спор энтомоцидного биопрепарата для борьбы с чешуекрылыми насекомыми-вредителями сельского хозяйства. Выпускаемые в настоящее время энтомопатогенные препараты на основе Bac. thuringiensis содержат смесь сухих спор и кристаллов -эндотоксина. Хотя известно, что основным действующим началом является белковый инсектицидный -эндотоксин и наличие спор является не обязательным. Титр жизнеспособных спор в препаратах достигает 60-100 млрд/г. При применении таких препаратов белковые кристаллы разлагаются и через некоторое время исчезают, тогда как споры благодаря своей устойчивости продолжают длительное время существовать и в благоприятных условиях могут прорастать и размножаться. В связи с этим перспективным является создание бесспоровых биоинсектицидов еще более экологически безопасных, чем существующие средства защиты растений (СЗР). Известен штамм ВТ-Н3 Z-52 (аналог базовый) продуцент -эндотоксина (авт. св. СССР N 769787, 1984). Однако недостатком шт. Z-52 является образование кроме -эндотоксина значительного количества спор, которые могут прорастать, размножаться и загрязнять окружающую среду. Известен штамм ВТ-Н4 var. dendrolimus ИПМ-2а аспорогенный продуцент -эндотоксина (авт.св. СССР N 1367484, 1985). Однако недостатком указанного штамма является более низкая энтомоцидная активность и меньший выход -эндотоксина, чем у предлагаемого штамма. Известен штамм ВТ var/kurstaki ИПМ-13а аспорогенный мутант. Однако недостатком указанного штамма также является более низкая инсектицидная активность. Для достижения цели предлагается апорогенный штамм Bacillus thuringiensis var.kurstaki 7А. Штамм хранится в коллекции культур ВНИИ прикладной микробиологии и депонирован во Всесоюзной кол- лекции промышленных микроорганизмов (коллекционный номер ВКПМ N В-5155). Штамм 7А получен из штамма Z-52 путем химического мутагенеза помощью этилметанульфоната и последующей селекции по признаку отсутствия спорообразовния. Штамм 7А характеризуется следующими признаками. Морфолого-культуральные признаки. Аэроб. Грамположительный. Оптимум роста 29-32оС. Вегетативные клетки крупные подвижные палочки с закругленными концами, расположенные одиночно, парами или цепочками. Размер клеток (1,5-1,7) (3,6-6,2) мкм. В стационарной фазе развития продуцируются белковые кристаллические включения ромбовидной формы размером (0,6-0,8) (1,3-2,0) мкм, споры не образуются, так как споруляция блокирована на IV стадии. Характер роста на различных питательных средах. На мясо-пептонном агаре через 1 сут инкубации образуются округлые серовато-белые колонии диаметром 3-5 мм со слабоволнистым краем, матовой мелкозернистой поверхностью, пастообразной консистенцией. Через 3-5 сут колонии становятся серыми, гладкими, появляется прозрачная кайма по краю. На сухом питательном агаре рост обильный, колонии округлые, кремовато-белые, матовые, мелкозернистые со слегка изрезанным краем, пастообразной консистенции. На молочном агаре рост обильный, колонии белые, гладкие, матовые с зоной просветления до 18-20 мм. На картофельном агаре рост обильный, колонии округлые, белые, гладкие со слегка изрезанным краем. На ломтиках картофеля рост обильный, налет мелкозернистый, матовый, пигмент не образуется. На мясо-пептонном бульоне образуется равномерная муть. Желточная среда через 1 сут. инкубации образуются округлые серотова-белые колонии диаметром 2-6 мм со слабо волнистым краем, матовые, с зоной побеления среды вокруг колоний до 5 мм. Физиолого-биохимические признаки. Отношение к источникам углерода. Использует глюкозу, мальтозу, крахмал, целлобиозу, салицин, эскулин. Не утилизирует сахарозу маннозу, маннит, лактозу. Отношение к источникам азота. Усваивает аммонийные формы азота. Восстанавливает нитраты. Молоко пентонизирует. Желатину разжижает. Мочевину разлагает. Образует ацетилметилкарбинол и лецитиназу. Антигенные свойства. Относится к III серотипу Bac.thuringiensis var.kurstaki (НЗа3в). Патогенные свойства. Не продуцирует термостабильный экзотоксин. Патогенен для многих видов насекомых из рода чешуекрылых. Не токсичен для теплокровных животных. Отношение к фагам. Устойчив к фагам И-77. 11, 25/16. Чувствителен к фагам с/п, 17, 22. Собственных вирулентных фагов не выделяет. Сущность предлагаемого изобретения заключается в следующем. Штамм 7А выращивают в течение 12-16 ч на скошенном МПА. Полученной культурой инокулируют ферментационную среду следующего состава, мас. дрожжи кормовые (БВК) 3,0, кукурузная мука 1,5, водопроводная вода остальное. рН среды после стерилизации 6,8-7,2. Культивирование проводят в колбах емкостью 750 мл с 30 мл питательной среды на круговой качалке со скоростью вращения 260 об/мин при 29-13оС в течение 48 ч. Полученную КЖ прогревают при 70оС в течение 20 мин и высевают по 0,1 мл на МПа. Визульано роста колоний штамма не наблюдают, что свидетельствует об отсутствии жизнеспособных спор в культуральной жидкости. П р и м е р 1. 5 мл суспензии спор (10 спор/мл) штамма Z-52 в фосфатном буфере (0,1 М, рН 7,0) прогревают на водяной бане при 70оС в течение 20 мин. После охлаждения суспензии до комнатной температуры добавляют 0,1 мл этилметансульфоната и инкубируют при 28оС на круговой качалке в течение 15-18 ч. Затем смесь центрифугируют при 4000 об/мин в течение 20 мин при 5оС. Осадок дважды отмывают физиологическим раствором и переносят в 2,5 мл фосфатного буфера. 100 мкл полученной суспензии высевают на чашки Петри с МПА и инкубируют при 30оС в течение 2-3 сут. Выросшие колонии исследуют с помощью фазово-контрольной микроскопии и отбирают клоны без споруляции. П р и м е р 2. Культуру штамма 7А выращивают на скошенном МПА при 30оС в течение 12-18 ч и используют для засева 300 мл ферментационной среды в колбе объемом 2 л. Посевную культуру выращивают в колбе на качалке при 30оС в течение 7 ч, проверяют отсутствие в ней фага и посторонней микрофлоры и используют для засева ферментера. Ферментационная питательная среда имеет следующий состав, мас. дрожжи кормовые (БВК) 3, мука кукурузная 1,5, водопроводная вода остальное. Ферментацию ведут до полного лизиса клеток и наличия в среде 50-70% свободных кристаллов, что контролируется фазово-контрастной микроскопией. Получают культуральную жидкость, содержащую кристаллы -эндотокcина, небольшую примесь нелизированных вегетативных клеток и остатки питательной среды. Инектицидная активность культуральной жидкости в отношении личинок непарного шелкопряда (в расчете на ЛК50) составляет 0,022-0,066% В приведенных ниже таблицах представлены свойства предлагаемого штамма и препаратов на его основе в сравнении прототипами. В табл. 1 приведены сравнительные данные по инектицидной активности культуральной жидкости и продуктивноти предлагаемого шт. 7А, прототипов (шт. ИПМ-13а, шт. ИПМ-2а) и аналога (шт. Z-52). Как следует из данных, приведенных в табл. 1, шт. 7А превосходит шт. ИПМ-13а, шт. ИПМ-2а и шт. Z-52 по инсектицидной активности соответственно в 1,88; 27,0 и 1,57 раз. В табл. 2 представлены сравнительные данные по чувствительности к фагам штаммов. Результаты, представленные в табл. 2, показывают, что по фагоустойчивости шт. 7А, шт. ИПМ-13а и шт. ИПМ-2а находятся на одном уровне: все штаммы чувствительны к трем из шести фагов, выделенных в производстве средств защиты растений. В табл. 3 представлены сравнительные данные по инсектицидной активности и содержанию -эндотоксина в образцах препаратов на основе предлагаемого штамма и штаммов-прототипов, полученных по регламенту производства лепидоцида концентрированного. Из данных, представленных в табл. 3, следует, что инсектицидная активность образца препарата на основе предлагаемого шт. 7А, полученного по традиционной технологии, превосходит таковую препаратов на основе штаммов-прототипов.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯШтамм бактерий Bacillus thuringiensis var. Kurstaki ВКПМ В-5155 для получения биоинсектицида.Популярные патенты: 2260943 Способ подращивания личинок осетровых рыб ... (предличинка) 57,2123,7 4*Т3, 2,6 0,19-е44-я (предличинка) 160,850 5**Т4,1,5 0,19-е44-я (предличинка) 158,761,9 6**Т4,1,5 0,114-е4-дн. личинка 107,1105,2 * - личинки осетра с низким уровнем смертности (7%)** - личинки осетра с относительно высоким уровнем смертности (30,7%) Формула изобретения Способ подращивания личинок осетровых рыб, включающий гормональную их обработку после выклева путем погружения на 1 ч в раствор с тиреоидным гормоном и кортизолом (последний в концентрации 0,1 мг/л), отличающийся тем, что в качестве тиреоидного гормона используют тироксин в концентрации 1,5 мг/л в сочетании с кортизолом, а гормональную обработку проводят на 44-й стадии ... 2492623 Портативный электроинструмент с управлением спусковым механизмом ... и 6 соответственно, при этом управляющий спусковой механизм не задействован, тогда как вспомогательный спусковой механизм повернут в положение включения. Фиг.9 и 10 представляют собой виды, подобные видам по Фиг.1 и 2 соответственно, при этом управляющий спусковой механизм задействован для осуществления закрывания режущих ножей, тогда как вспомогательный спусковой механизм не задействован.Фиг.11 и 12 представляют собой виды, подобные видам по Фиг.9 и 10 соответственно, при этом вспомогательный спусковой механизм изображен в рабочем положении.Обратимся к чертежам для описания не ограничительного примера выполнения портативного электроинструмента по изобретению, который образован ... 2462016 Устройство для протравливания семян ... для протравливания семян, содержащее шнековый смеситель, емкость для ядохимикатов, распылитель ядохимикатов, отличающееся тем, что шнековый смеситель выполнен в виде ленточного двухзаходного шнека, установленного в ковше фронтального погрузчика и на выходной конец вала шнека, посаженного на радиально-упорные подшипники, расположенные в съемных корпусах, прикрепленных с возможностью монтажа-демонтажа к боковым стенкам ковша, установлена ведомая звездочка цепной передачи, приводимая в движение от гидромотора, прикрепленного к кронштейну задней стенки ковша, на балке которой приварены проушины, в которых шарнирно установлены корпуса вилок и головки рычагов ... 2204241 Способ определения поливных норм при капельном орошении томатов ... ... 2145478 Гранулированное либо пеллетированное средство для защиты растений, способ его получения и способ борьбы с грибами ... к такой водной дисперсии от 5 до 40 мас.% воска из этиленового сополимера, состоящего из 10-25 мас. %. - олефиново-ненасыщенной моно- или дикарбоновой кислоты с 3-8 C-атомами и 90-75 мас.% этилена, значение индекса расплава (ИР) которого, измеренное при 190oC и при нагружении 2,16 килопонд, составляет от 1 до 600, предпочтительно от 5 до 500, прежде всего от 15 до 300, или значение ИР которого, измеренное при 160oC и 0,325 килопонд, составляет от 1 до 600, 0,1-5 мас.% гидроксида щелочного металла, аммиака, алканоламина или диалканоламина и их смеси и воду для получения объема в 100%. Применяемые для приготовления восковой дисперсии сополимеры этилена содержат 10-25 мас. %, ... |
Еще из этого раздела: 2106081 Животноводческая ферма с применением помещений круглой формы и способ содержания в ней, например, крупного рогатого скота 2140137 Универсальный способ получения проросших семян сельскохозяйственных культур 2429594 Палец штампосварной для режущего аппарата (варианты) и способ его изготовления 2404898 Устройство на воздушной подушке для разбрасывателей органоминеральных удобрений 2490849 Способ переработки безподстилочного помета птиц клеточного содержания и навоза свиней в топливные брикеты 2488263 Система механической подачи недомолота для вторичного обмолота на возвратную доску 2140738 Производные n-арилгидразина, способ их получения, способ подавления насекомых и композиция для подавления насекомых 2415552 Питатель молотилки зерноуборочного комбайна 2099929 Почвенная растительная смесь для культурных газонов и способ их создания 2487516 Почвообрабатывающая машина |
Изобретения в сельском хозяйстве
Обработка почвы в сельском и лесном хозяйствах
Посадка, посев, удобрение
Уборка урожая, жатва
Обработка и хранение продуктов полеводства и садоводства
Садоводство, разведение овощей, цветов, риса, фруктов, винограда, лесное хозяйство
Новые виды растений или способы их выращивания
Производство молочных продуктов
Животноводство, разведение и содержание птицы, рыбы, насекомых, рыбоводство, рыболовство
Поимка, отлов или отпугивание животных
Консервирование туш животных, или растений или их частей
Биоцидная, репеллентная, аттрактантная или регулирующая рост растений активность химических соединений или препаратов
Хлебопекарные печи, машины и прочее оборудование для хлебопечения
Машины или оборудование для приготовления или обработки теста
Обработка муки или теста для выпечки, способы выпечки, мучные изделия
|
|
||