Изобретения в сфере сельского хозяйства, животноводства, рыболовства

 
Изобретения в сельском хозяйстве Обработка почвы в сельском и лесном хозяйствах Посадка, посев, удобрение Уборка урожая, жатва Обработка и хранение продуктов полеводства и садоводства Садоводство, разведение овощей, цветов, риса, фруктов, винограда, лесное хозяйство Новые виды растений или способы их выращивания Производство молочных продуктов Животноводство, разведение и содержание птицы, рыбы, насекомых, рыбоводство, рыболовство Поимка, отлов или отпугивание животных Консервирование туш животных, или растений или их частей Биоцидная, репеллентная, аттрактантная или регулирующая рост растений активность химических соединений или препаратов Хлебопекарные печи, машины и прочее оборудование для хлебопечения Машины или оборудование для приготовления или обработки теста Обработка муки или теста для выпечки, способы выпечки, мучные изделия

Способ криоконсервирования пуповинной крови

 
Международная патентная классификация:       A01N A61K

Патент на изобретение №:      2263448

Автор:      Мхеидзе Д.М. (RU), Гришина В.В. (RU)

Патентообладатель:      Государственное учреждение Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина РАМН (RU)

Дата публикации:      10 Ноября, 2005

Начало действия патента:      28 Мая, 2004

Адрес для переписки:      115478, Москва, Каширское ш., 24, ГУ Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина РАМН, патентно-лицензионное отделение

Изобретение относится к области криобиологии, а именно к способам криоконсервации пуповинной крови, и может быть использовано при ауто- и аллотрансплантации в онкологии и гематологии. Сущность способа заключается в том, что к свежесобранной пуповинной крови добавляют равный объем полиглюкина, перемешивают, смесь выдерживают в течение 50-60 минут до появления четкой границы раздела, отделяют супернатант, центрифугируют его, отделяют осадок, к полученному осадку добавляют равный объем 10-12% раствора деметилсульфоксида в полиглюкине при постоянном перемешивании, смесь помещают в термостатируемый объем, снижая температуру со скоростью 1-2°С в минуту в течение 1-2 часов, после чего ее хранят при ультранизких температурах. Предлагаемый способ позволяет максимально сохранить жизнеспособность ядросодержащих клеток и может успешно применяться для трансплантаций при многих тяжелых заболеваниях крови, включая онкологические.

(56) (продолжение):

CLASS="b560m"Прокопюк О. С. и др. Криоконсервированные эритроциты пуповинной крови - антианемическая гемотрансфузионная среда. Влияние охлаждения на биологические объекты. Харьков, 1990, с. 121-124.Donaldson C. et al. Optimal cryopreservation of human umbilical cord blood. Bone Marrow Transplant. 1996 Oct, 18(4), p. 725-31.

Изобретение относится к области криобиологии, а именно к способам криоконсервации пуповинной крови, и может быть использовано при ауто- и аллотрансплантации в онкологии и гематологии. В последние годы широкое развитие получила трансплантация периферических ядросодержащих клеток (ЯСК), извлеченных из пуповинной крови (ПК) человека.

Многочисленные исследования показали, что ПК является богатым источником гемопоэтических ЯСК, и что лимфоидные клетки ПК менее иммунореактивны, поэтому частичная несовместимость по антигенам HLA-системы при трансплантации гемопоэтических клеток допустима, а частота тяжелой реакции "трансплантат против хозяина" (РТПХ) встречается реже, чем при аллогенных трансплантациях периферических стволовых клеток и костного мозга.

Использование пуповинной крови для пересадок имеет ряд преимуществ по сравнению с другими источниками гемопоэтических клеток:

Отсутствует риск здоровью матери и ребенка (донора) и не требуется общая анестезия при сборе ПК.

Появляется возможность длительного хранения гемопоэтических клеток в замороженном состоянии как аллогенного трансплантата.

Выявлена большая возможность использования не полностью совместимых по HLA-системе (от 1 до 3 антигенов) трансплантатов.

Увеличивается вероятность нахождения редких HLA-типов трансплантатов, что имеет большую значимость для этнических меньшинств.

Значительно снижается риск передачи некоторых латентных инфекций, передаваемых трансмиссивным путем.

Требуются меньшие затраты времени для поиска необходимого HLA-типа трансплантата.

Появляется недорогая форма биологического страхования жизни в связи с возможностью использования клеток пуповинной крови в качестве аутологичного трансплантата.

В связи с малым объемом ПК, получаемым при разовом сборе, и невозможностью повторного сбора основной задачей при заготовке ПК является максимальный забор ПК, максимальное выделение ядросодержащих клеток из ПК и оптимальный способ замораживания их. Известны способы криоконсервирования ПК, описанные в работах К.М.Абдулкадырова и др. [1, 2, 3]. Как следует из упомянутых работ, в мировой современной практике криоконсервирования для выделения ЯСК и удаления эритроцитов используют как различные седиментирующие средства, например фиккол, метилцеллюлозу, желатин, гидроксиэтилкрахмал (ГЭК) и т.д., так и центрифугирование, а также сочетание указанных приемов.

На этапе замораживания используются различные криопротекторы: ДМСО или ДМСО в сочетании с ГЭК, человеческим альбумином и другие. Однако известные способы криоконсервирования пуповинной крови длительны, трудоемки, требуют отмывания седиментирующих средств, дорогостоящи и ненадежны за счет использования программных замораживателей (возможный отказ электронных микросхем). Задачей настоящего изобретения является создание способа криоконсервирования пуповинной крови, лишенного указанных недостатков, позволяющего обеспечить максимальное сохранение жизнеспособности ядросодержащих клеток при одновременном ускорении и упрощении способа, и абсолютной надежности процесса криоконсервации.

Сущность способа заключается в том, что к свежесобранной пуповинной крови добавляют равный объем полиглюкина, перемешивают, смесь выдерживают в течение 50-60 минут до появления четкой границы раздела, отделяют супернатант, центрифугируют его, отделяют осадок, к полученному осадку добавляют равный объем 10-12% раствора диметилсульфоксида в полиглюкине при постоянном перемешивании, смесь помещают в термостатируемый объем, где температура биоматериала понижается со скоростью 1-2°С в минуту в течение 1-2 часов, после чего его хранят при ультранизких температурах.

Способ осуществляется следующим образом: свежесобранную пуповинную кровь разделяют на фракции путем добавления равного объема полиглюкина, тщательно перемешивают, вертикально подвешивают контейнер, содержащий полученную смесь. Смесь выдерживают в течение 50-60 минут до появления четкой границы раздела, отделяют супернатант, центрифугируют его при 2000 об/мин, в течение 10 минут при +18°С, плазму удаляют, а к оставшемуся осадку, представляющему собой концентрат ядросодержащих клеток, добавляют равный объем 10-12% раствора диметилсульфоксида в полиглюкине при постоянном перемешивании, затем смесь в запаянном криомешке помещают в контейнер для замораживания, выполненный из многослойной фанеры (общая толщина 10 мм) с плотно закрывающейся крышкой и соответствующий размеру криомешка. Контейнер с криомешком помещают в пары жидкого азота. Скорость охлаждения материала составляет 1-2°С в минуту, время охлаждения 1-2 часа. Затем криомешок из контейнера переносят в основное хранилище с жидким азотом, где он сохраняется до трансплантации.

По предложенному способу было произведено выделение ядросодержащих клеток в 50 образцах пуповинной крови. Процент выделенных ядросодержащих клеток в среднем составил 84,53±8,51% от исходного количества,% удаленных эритроцитов в среднем составил 97,27±2,43% от исходного (в известных способах 82,6%; 97,9% соответственно). Потерь ЯСК после размораживания не наблюдалось (оценивали количество ядросодержащих клеток до и после замораживания).

В РОНЦ РАМН в отделениях взрослой и детской трансплантации проведено около 200 пересадок ядросодержащих клеток, у всех больных было восстановлено кроветворение. Кроме того, криоконсервированный по предложенному способу биоматериал, успешно применялся для трансплантаций больным, находящимся на лечении в ГНЦ РАМН, ГНЦ-институте биофизики МЗ России, госпитале им.Бурденко МО РФ.

Технический результат

Предложенный способ позволяет максимально сохранить жизнеспособность ядросодержащих клеток, что обеспечивает восстановление кроветворения реципиента при лечении заболеваний крови, в том числе после высокодозной полихимиотерапии, и в то же время достигается упрощение и ускорение способа за счет сокращения числа манипуляций. Используемый полиглюкин является доступным для любого медицинского учреждения. Благодаря физиологичности полиглюкина способ не требует отмывания клеточной взвеси. Кроме того, остающийся после седиментации эритроцитов осадок используется в качестве образцов для различных анализов, необходимых для тестирования пуповинной крови; в настоящее время для тестирования используют цельную пуповинную кровь.

Таким образом, предлагаемый способ криоконсервации пуповинной крови, позволяющий максимально сохранить жизнеспособность ядросодержащих клеток, прост в исполнении, не требует дорогостоящей аппаратуры и может успешно применяться для трансплантаций при многих тяжелых заболеваниях крови, включая онкологические.

Литература

1) К.М.Абдулкадыров и др. "Получение и клиническое применение периферических гемопоэтических стволовых клеток из пуповинной крови", "Вопросы онкологии 2000". т.46, №4, с.513-536.

2) К.М.Абдулкадыров и др. "Плацентарная кровь: альтернативный источник кроветворных стволовых клеток для трансплантаций. Создание банков пуповинной крови", ж-л "Терапевтический архив", 2001 г., т.73, №7, с.76-78.

3) К.М.Абдулкадыров "Гематология. Новейший справочник". М., 2004 г, с.890-901.

Формула изобретения

Способ криоконсервирования пуповинной крови, заключающийся в том, что к свежесобранной пуповинной крови добавляют равный объем полиглюкина, перемешивают, смесь выдерживают в течение 50-60 мин до появления четкой границы раздела, отделяют супернатант, центрифугируют его, отделяют осадок, к полученному осадку добавляют равный объем 10-12% раствора диметилсульфоксида в полиглюкине при постоянном перемешивании, смесь помещают в термостатируемый объем, снижая температуру со скоростью 1-2°С в минуту в течение 1-2 ч, после чего ее хранят при ультранизких температурах.





Популярные патенты:

2415560 Способ выращивания корнесобственных саженцев винограда

... борозды. В первую декаду апреля пленка снимается, и на месте борозды специальным агрегатом формируются слегка возвышенные гряды. За счет пленки боковые валики в течение зимы остаются увлажненными и в рыхлом состоянии. Гряда легко формируется. Прогретая рыхлая почва сдвигается в борозду. Таким образом, создается глубокий слой рыхлой прогретой почвы. На вновь созданную гряду раскладывается капельная линия. Толщина стенки не менее 0,7 мм (во избежание повреждения грызунами). И накрывается той же полиэтиленовой пленкой. Края пленки присыпаются землей. Гряда готова к высадке черенков. Высадка черенков начинается при достижении температуры почвы на глубине 10 см в утренние часы ...


2477044 Искусственная рыболовная приманка (варианты)

... Они предназначены для закрепления основного или дополнительных крючков или привлекающих элементов. На фиг.2 позицией 6 обозначен гибкий элемент, позицией 7 - сквозной канал в корпусе приманки.Искусственная рыболовная приманка работает следующим образом.По первому варианту осуществления изобретения (фиг.1) гибкий элемент встроен в корпус при изготовлении приманки («влитой» элемент) и сам по себе ограничивает растяжение мягкого корпуса при поклевке, то есть является ограничителем 4 растяжения корпуса приманки и предотвращает отрыв хвостовой части. Ограничитель 4 в виде цепочек или гибких элементов (поводки, пластинки) размещают вдоль головной части 1 корпуса с ...


2215407 Способ создания исходного материала для селекции растений

... и числу на их поверхности микропор, форме, характеру поверхности и размерам бобов и семян и проверяли уровень плоидности реплоидов прямым подсчетом хромосом. Выделенные реплоиды сои сравнивали по комплексу качественных и количественных признаков в сравнении с исходным диплоидным сортом, выделяли формы с улучшенными хозяйственно ценными признаками и использовали их как исходный материал для селекции сои (табл. 2-3). Анализ табл. 2 свидетельствует о наличии морфологических рекомбинаций по ряду признаков у реплоидов, выделенных из рекомбинированных полиплоидов. Так, высота реплоидных растений варьировала от 85 до 147 см у сорта Вилана и от 69 до 150 см у сорта Фора, в отдельных ...


2269243 Капсулированный посадочный материал с регулируемыми свойствами и способ его получения

... из которых содержит фунгицид-тетраметилтиурамдисульфид (ТМТД), второй - смесь компоста с вермикулитом, причем сотношение компост:вермикулит меняется в оболочке от 1:1 до 1:10, а третий - вермикулит, подвергают термообработке при температуре 20-35°С и относительной влажности воздуха 70-90% до момента появления корешков.На фиг.1 представлена фотография внешнего вида исходных капсулированных семян кукурузы (верхний ряд) и обработанных по предлагаемому способу - общий вид и разрез.На фиг.2 представлена фотография растений, выращенных из капсулированных семян кукурузы, обработанных по предлагаемому способу (верхний ряд), и контрольных растений; выращенных из капсулированных семян ...


2172085 Способ управления групповым вождением машин

... линии симметрии ведущей машины через соответствующие элементы индикации, а ведомая машина ориентирует по дополнительно полученным сигналам свое движение в направлении, перпендикулярном основному движению ведущей машины до полного их соприкосновения, сокращается время стыковки, упрощается процесс управления вождением машин и расширяются функциональные возможности управления в полевых условиях. Формула изобретения 1. Способ управления групповым вождением машин, заключающийся в том, что ведущая машина излучает сигнал, а ведомая машина принимает сигнал, отличающийся тем, что ведущая машина излучает постоянный визуальный сигнал о скорости и переменный визуальный сигнал о ...


Еще из этого раздела:

2236787 Способ испытаний опрыскивателей и устройство для его осуществления

2127256 Замещенные простые оксимовые эфиры и фунгицидное, инсектицидное, арахноицидное средство

2015654 Теплица для подземной выработки

2399194 Способ и устройство контроля воздушного режима в корнеобитаемой среде

2302109 Способ снижения уровня никеля и свинца в крови и молоке коров техногенной провинции

2312500 Способ защиты смородины от вредителей и болезней

2126616 Устройство управления навесной системой трактора

2228024 Способ профилактики мастита у коров и устройство для его осуществления

2384052 Способ повышения эмбриональной жизнеспособности и естественной резистентности цыплят-бройлеров

2469534 Перезаряжаемая электронная ловушка для животных с перегородкой, механическим переключателем в конфигурации с множеством поражающих пластин