Хладоограждающий раствор для замораживания тромбоцитов при умеренно-низкой температуре

Международная патентная классификация:       A01N A61K

Патент на изобретение №:      2230454

Автор:      Сведенцов Е.П. (RU), Яленский А.Ю. (RU), Утёмов С.В. (RU), Костяев А.А. (RU)

Патентообладатель:      Государственное учреждение Кировский научно- исследовательский институт гематологии и переливания крови (RU)

Дата публикации:      10 Января, 2004

Начало действия патента:      24 Мая, 2002

Адрес для переписки:      610027, г.Киров обл., ул. Красноармейская, 72, ГУ Кировский НИИ гематологии и переливания крови

Изобретение относится к медицине, а именно к криоконсервированию клеток крови. Хладоограждающий раствор для замораживания тромбоцитов имеет следующий состав, мас.%: гексаметиленбистетраоксиэтилмочевина - 10,0, фумарат натрия 1,5-2,3, лимонная кислота - 0,9-1,1, вода для инъекций - остальное. Раствор обеспечивает сохранение высокого процента физиологически полноценных тромбоцитов при криоконсервировании при умереннонизкой температуре. 3 табл.

Изобретение относится к медицине, в частности к криоконсервированию клеток крови.

В качестве прототипа нами использована работа Е.П.Сведенцова и соавт. вЂњВодный раствор для криоконсервирования тромбоцитоввЂќ при -196

С (1).

Существенными недостатками прототипа являются: 1) отсутствие в составе криозащитного раствора антигипоксанта, способствующего быстрому восстановлению энергетических процессов в клетке после ее выхода из холодового анабиоза; 2) наличие в прототипе умеренно токсичного антиагреганта - ЭДТА Na2; 3) обязательное использование ультранизкой температуры (-196

С) при замораживании биообъекта, что сопряжено с высокой дороговизной криогенного оборудования, большой затратностью применяемого жидкого азота и необходимостью обслуживания высококвалифицированным техническим персоналом.

Для устранения вышеуказанных недостатков в известный раствор вводят компонент - фумарат натрия с целью восстановления и усиления энергетического потенциала клетки после ее оттаивания, т.к. фумаровая кислота участвует в цикле Кребса, обеспечивающего жизнедеятельность клетки, из состава же раствора исключен компонент - ЭДТА Na2. Кроме того устранена высокозатратная жидкоазотная технология криоконсервирования, т.к. новый состав раствора позволяет применять доступный, экономичный метод замораживания тромбоцитов до -40

С по экспоненциальной программе в электроморозильниках.

Таким образом, предлагаемый хладоограждающий раствор содержит следующие ингредиенты, мас.%:

1) криопротектор - гексаметиленбистетраоксиэтилмочевину (ее аббревиатура - ГМБТОЭМ), имеющую наименьшую токсичность из всех эффективных криофилактиков: ее ЛД50 составляет 15,5

0,6 г/кг массы мыши (Сведенцов Е.П. и др. (2);

2) антигипоксант - фумарат натрия;

3) антикоагулянт - лимонную кислоту;

4) воду для инъекций.

Все ингредиенты, входящие в хладоограждающий раствор, производятся в РФ.

Пример использования средства: хладоограждающий раствор, содержащий ГМБТОЭМ в концентрации 10%, фумарат натрия 1,9%, лимонную кислоту 1%, воду для инъекций до 100 мл, имеющий рН 5,5-6,5, смешивают с тромбоцитным концентратом в полимерном контейнере вЂњКомпопластвЂќ. Смесь выдерживают при комнатной температуре в течение 20 мин; замораживают по экспоненциальной программе в электрическом морозильнике в 4-литровой ванне с этиловым спиртом, охлажденном до -28

С, выдерживая в нем 15 мин. Затем контейнер с тромбоцитами переносят в электроморозильник для замораживания до -40

С и оставляют в нем для хранения. Термограмму записывают по датчику, установленному в аналогичном контейнере вЂњКомпопластвЂќ с данным хладоограждающим раствором. Размораживание осуществляют в 20-литровой ванне при +38

С в течение 35-45 с при покачивании контейнера 3-4 раза в секунду. Определяют морфологическую сохранность размороженных тромбоцитов (подсчет в камере Горяева), их функциональную активность (адгезию к стеклу, индуцированную агрегацию и реакцию на гипотонический шок). Расчет производится в процентах в сравнении с аналогичными показателями клеток до замораживания.

Экспериментальные исследования выполнены в лаборатории консервирования крови и тканей ГУ Кировского НИИ гематологии и переливания крови. Изучены три варианта хладоограждающих растворов для замораживания тромбоцитного концентрата, различающихся по процентному содержанию входящих в него ингредиентов. Состав растворов представлен в табл. 1.

При смешивании с тромбоцитами донорской крови в соотношении 1:1 конечная концентрация веществ (табл. 2), входящих в состав растворов 1, 2, 3, уменьшалась в 2 раза по сравнению с исходной, рН среды оставалась в пределах 5,5-6,5, оптимальной для тромбоцитов.

Замораживание происходило по двухступенчатой экспоненциальной программе: на первом этапе погружали контейнер с подготовленной смесью хладоограждающего раствора с тромбоцитным концентратом в 4-литровую спиртовую ванну, охлажденную до -28

С, через 15 мин контейнер с тромбоцитами вынимали из ванны и помещали в электроморозильник для замораживания при умеренно низкой температуре до -40

С, на это затрачивалось 8 мин. Контроль за охлаждением проводили по термограмме, записываемой по датчику, введенному в контейнер с хладоограждающим раствором с конечной концентрацией его ингредиентов.

Размораживание производили через 1-28 суток в 20-литровой водяной ванне при +38

С в течение 35-40 с.

Отогревали до +2

С. Выполняли исследования тромбоцитов на морфологическую сохранность и функциональную полноценность (табл.3); показатели даны в процентах к исходным (до замораживания).

Получены выраженные положительные результаты после замораживания и отогрева тромбоцитов с различными вариантами предложенного хладоограждающего раствора: сохранилось морфологически 76,6

0,7% - 81,7

0,4% к исходному числу клеток (до замораживания), функциональная активность по разным тестам равнялась от 60,1

0,8% до 82,4

0,8%, а реакция на гипотонический шок (РГШ) составила от 44,6

1,2% до 51,5

0,3% к исходным показателям. Надо отметить, что РГШ является наиболее важным тестом для тромбоцитов, т.к. прямо коррелирует с их состоянием после трансфузии тромбоцитного концентрата в сосудистое русло.

Разработанный нами хладоограждающий раствор прозрачен, со слабым желтоватым оттенком, без запаха, рН 5,5-6,5. Он хорошо смешивается с тромбоцитным концентратом, предотвращает агрегацию клеток, обеспечивает морфологическую и функциональную сохранность при положительной температуре и высокий процент физиологически полноценных тромбоцитов после замораживания-оттаивания. Это дает возможность применять его для консервирования замораживанием тромбоцитов при умеренно низкой температуре в лечебных учреждениях и учреждениях службы крови, которые имеют электроморозильники на -40

С и отделения длительного хранения крови.

Литература

1. Сведенцов Е.П., Селезнева О.М., Симкин Д.С., Новосадов В.М. Водный раствор для криоконсервирования тромбоцитов. Патент №1561227 (Роспатент). Регистр. 12.04.93.

2. Сведенцов Е.П., Селезнева О.М., Костяев А.А. О токсичности нового криоконсерванта для тромбоцитов. - В кн.: Вопросы трансфузиологии и клинической медицины. Киров, 1992 - С.7-8.

Формула изобретения

Хладоограждающий раствор для замораживания тромбоцитов, включающий гексаметиленбистетраоксиэтилмочевину, лимонную кислоту и воду для инъекций, отличающийся тем, что раствор дополнительно содержит фумарат натрия при следующем соотношении ингредиентов, мас.%:

Гексаметиленбистетраоксиэтилмочевина 10,0

Фумарат натрия 1,5 - 2,3

Лимонная кислота 0,9 - 1,1

Вода для инъекций Остальное

при этом раствор используют для замораживания при умеренно низкой температуре.

MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 25.05.2004

Извещение опубликовано: 10.06.2006 БИ: 16/2006

Популярные патенты:

2112361 Контроллер программируемого управления поливом

... управления рабочим органом и к входу первой схемы И, а второй его выход - к входу второй схемы И, один вход второго триггера соединен с заданным выходом адресного счетчика, а его выход - с входом третьей схемы И, вход первого переключателя соединен с выходом таймера, его второй выход - с технологическим датчиком, а его выход - с входом второго переключателя, второй вход второго переключателя подключен к выходу второй схемы И, его третий вход - к выходу первой схемы И, а его объединенный выход - к второму входу третьей схемы И, выход технологического датчика подключен к второму входу первой схемы И, выход таймера - к второму входу второй схемы И, выход третьей схемы И подключен к ...

2477036 Агрегат для предпосевной обработки почвы и посева

... зоны, находящиеся от стоек культиваторных лап 9 на расстоянии, равном 1/4 установочной ширины между лапами, подаются туки. Далее Г-образные ножи 6 фрезерного ротора 4 интенсивно измельчают верхний слой почвы на глубину, превышающую на 2 4 см глубину посева семян зерновых культур. Неровности микрорельефа почвы сглаживаются выравнивателем 15 поверхности почвы. Сошники 18 для посева зерновых культур формируют в зонах локального внесения туков бороздки, в которые через них по семяпроводам 19 из семенного ящика 20 подаются семена. Укрытие семян зерновых культур почвой выполняется загортачами 21. Каток 22 производит послепосевное прикатывание для обеспечения лучшего контакта высеянных ...

2476277 Способ защиты почв от остатков пестицидов

... именно оптимальные параметры пористой структуры активного угля, позволяющие достичь цели изобретения. Так, если объем микропор АУ ниже 0,36 см 3/г, снижается величина поглощения молекул пестицида, а если объем микропор превышает величину 0,50 см3/г, то увеличивается его доля по отношению к транспортным порам, что приводит к ухудшению кинетики поглощения молекул пестицида, и значит, возрастает время их контакта с корневой системой тест-растений. Если величина размера микропор (а они имеют щелевидную форму) ниже 0,6 нм, то крупная молекула пестицида просто стерически не проникает в микропору, а если размер микропор превосходит величину 0,8 нм, то энергия адсорбции в них значительно ...

2184433 Рабочий орган щелевателя

... кромка 23 элемента 6 разрезает растительные и корневые остатки верхнего слоя и способствует ускоренному заглублению левой и правой нижних частей стойки 1. При заглублении долот 7 и 8 на глубину 20...25 см в работу вступает горизонтально смонтированный съемный элемент 3. Режущий кромкой 17 элемента подрезается слой почвы на глубину до 18. ..23 см. Ширина подрезанного слоя, в частном случае, - 1,4 м. Слой почвы при заглублении от поверхности старопахотного поля или сеяных трав при заглублении элемента 3 на глубину 0,18...0,23 м оказывается в пространстве между верхними частями стойки 1. При установившемся движении в направлении движения первым в технологическом процессе участвует ...

2229127 Способ испытания растущих деревьев после рубок прореживания и проходных

... перечета и измерения таксационных параметров осматривают деревья с регистрацией их естественных внешних пороков и искусственных повреждений (обломы, ошмыги, задиры и прочее). По этим внешним характеристикам на каждой ленте 3 выбирают по 1-2 наихудшие растущие деревья. Одновременно осматривают пни, которые оставляют достаточно информации о способе и качестве валки, а также о качестве бывших деревьев.На отобранных худших по качеству деревьях выбирают место на стволе с северной стороны около высоты 1,3 м. Взятие и последующий анализ кернов древесины выполняют по прототипу. На основе этих данных получается минимальная оценка по результатам испытания растущих деревьев, оставленных после ...

Еще из этого раздела:

2440721 Способ определения вредоносности насекомых комплекса "гнус" для крупного рогатого скота

2472336 Соломорезка и оснащенная такой соломорезкой уборочная машина

2459398 Способ рекультивации почв, загрязненных минерализованными водами

2453090 Способ минимальной обработки почвы

2488422 Сеть фильтров

2465761 Способ повышения плодородия песчаных почв

2064741 Устройство для обработки почвы

2247490 Способ освоения закустаренных земель и устройство для его осуществления

2423033 Способ укрепления склонов посевом семян древесных растений

2265314 Устройство системы зашторивания теплиц с регулируемым ходом

Изобретения в сфере сельского хозяйства, животноводства, рыболовства

Хладоограждающий раствор для замораживания тромбоцитов при умеренно-низкой температуре

Формула изобретения