Способ определения жизнеспособности коконов земляных червейПатент на изобретение №: 2199211 Автор: Антонова Е.В., Стом Д.И. Патентообладатель: Иркутский государственный университет Дата публикации: 27 Февраля, 2003 Начало действия патента: 9 Января, 2001 Адрес для переписки: 664003, г.Иркутск, ул. Карла Маркса, 1, ИГУ, патентный отдел Изображения Изобретение относится к биотехнологии, а именно к определению жизнеспособности коконов дождевых червей. Коконы помещают в раствор ТТХ концентрацией 8-12 г/л. Инкубируют в термостате при температуре 37-40oС в течение 55-60 мин. Степень жизнеспособности коконов оценивают визуально по наличию и интенсивности красной окраски таковых. Изобретение позволяет уменьшить длительность и повысить точность определения жизнеспособности коконов дождевых червей. 1 табл. ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУИзобретение относится к области биотехнологии, а именно к способам определения жизнеспособности коконов дождевых червей. Известен способ определения физиологического состояния активного ила по дегидрогеназной активности микроорганизмов /1/. В основе данного метода лежит способность некоторых веществ (индикаторов, из которых наиболее чувствительным на ферменты дегидрогеназы является 2,3,5-трифенилтетразолий хлористый (ТТХ)) приобретать стойкую ярко-красную окраску при переходе из окисленного состояния в восстановленное. Период инкубации 1-3 часа в термостате при температуре 37oС, так как при данной температуре ферменты дегидрогеназы наиболее активны, концентрация ТТХ - 5 г/л. Ближайшим аналогом является способ определения жизнеспособности коконов земляных червей по вылуплению червячков /2/. Для этого готовят среды с нейтральным рН и влажностью 80-85%, помещают коконы червей из расчета 1 кокон на 5-10 мл субстрата. Во время периода инкубации коконов (20-25 суток) поддерживают температуру 20-25oС. Визуально определяют выход червячков (коконы, из которых вылупились черви, имеют вид пустой прозрачной оболочки) и их количество. Недостатками известного способа являются его длительность (для созревания кокона требуется 25 и более суток в зависимости от внешних условий), дороговизна и трудоемкость (ввиду необходимости создания оптимальных условий: специальные контейнеры, субстрат, поддержание постоянных температуры 20-25oС, влажности 80%, рН 7), недостаточная точность, так как коконы при длительном инкубировании могут погибнуть в процессе эмбриогенеза под влиянием изменения внешних факторов. При биотестировании на дождевых червях, а также вермитрансформации загрязненных, в частности нефтепродуктами, субстратов необходимо иметь данные по токсикорезистентности не только самих червей, но и их яйцевых коконов, чтобы предотвратить опасность гибели популяции на стадии эмбрионов. Задачей предлагаемого изобретения является создание способа определения жизнеспособности коконов дождевых червей, позволяющего повысить эффективность способа. Поставленная задача достигается тем, что в известном способе коконы помещают в раствор ТТХ концентрацией 8-12 г/л и инкубируют в термостате при температуре 37-40oС в течение 55-60 минут, степень жизнеспособности коконов оценивают визуально по наличию и интенсивности красной окраски таковых. Наиболее оптимальная концентрация ТТХ для проведения дегидрогеназной реакции на коконах - 8-12 г/л (лучшие результаты при концентрации ТТХ - 10 г/л), при которой окрашивается в среднем 93% коконов. При дальнейшем увеличении концентрации ТТХ количество окрашенных коконов уменьшается, возможно, вследствие переизбытка субстрата, а следовательно, и повышения его токсичности. Время экспозиции коконов при температуре 37-40oС может быть 55-60 минут. Увеличение времени инкубации, скорее всего, нецелесообразно, так как при этом количество окрашенных коконов увеличивается незначительно (на 10% за 2-5 часов) или остается приблизительно на одном уровне (за 10-24 часа). Наиболее приемлемая температура для проведения дегидрогеназной реакции на коконах - 37-40oС (84-90% окрашенных коконов). При уменьшении до 20oС или увеличении до 60oС количество окрашенных коконов снижается на 11 и 27% соответственно. Лучше всего окрашиваются неповрежденные коконы (в среднем 92%). Надрезание оболочки практически не влияет на количество окрашенных коконов (в среднем 86%), но окраска точечная. Гомогенизированные коконы окрашиваются всего в 13% случаев. Наивысший процент окрашенных коконов можно получить при использовании коконов, возраст которых 5-15 суток (в среднем 90%). 0-5-дневные коконы почти не дают дегидрогеназной реакции, возможно, так как большинство яиц еще не оплодотворены и ферменты недостаточно активны. 15-30-дневные коконы окрашиваются в 67% случаев. Вероятно, этот показатель снижается из-за гибели эмбрионов или их вылупления. Экспозиция коконов в физиологическом растворе до проведения дегидрогеназной реакции для выравнивания уровня рН оболочек коконов в течение 1-5 часов практически не изменяет показателей, дальнейшая инкубация (10-120 часов) наоборот снижает процент окрашенных коконов (в среднем на 17%). Коконы, предварительно содержавшиеся 2 часа при температуре 100-150oС, не окрашивались, это подтверждает то, что дегидрогеназная реакция проявляется только у живых коконов. Данный способ осуществляется следующим образом. Готовят раствор ТТХ концентрацией 10 г/л. В пробирки наливают по 5 мл дистиллированной воды и по 0,5 мл раствора ТТХ. В каждую пробирку помещают по 10 коконов (возраст 5-15 суток). Плотно закрытые пробирки оставляют в термостате на 55-60 минут при температуре 37oС. Критерием оценки служит окраска коконов: при положительной дегидрогеназной реакции коконы приобретают красную окраску (в зависимости от активности фермента окрашивается весь кокон или окраска точечная), окраска погибших коконов не изменяется. Пример. В колбы (в двух экземплярах) наливают по 20 мл растворов нефти и нефтепродуктов различных концентраций от 85 до 10-2 мл/л с интервалом в полпорядка, помещают по 10 неповрежденных коконов, возраст которых 5-15 суток. В качестве контроля используют дехлорированную водопроводную воду с коконами, не подвергшимися никакому воздействию (живые), и коконы, которые кипятят при температуре 100-150oС в течение 2 часов (мертвые). Колбы оставляют на 24 часа при комнатной температуре. Коконы из первой серии помещают в дерново-подзолистую почву и содержат до вылупления червячков (20-25 суток) при оптимальных условиях (температура 20-25oС, влажность 80% рН 7). В пробирки наливают по 5 мл дистиллированной воды и по 0,5 мл раствора ТТХ (концентрацией 10 г/л), помещают туда коконы из второй серии. Пробирки ставят в термостат на 55-60 минут при температуре 37oС. После чего оценивают жизнеспособность коконов по наличию и интенсивности красной окраски. Необработанные коконы окрашивались в среднем в 90% случаев, при этом из одного такого кокона вылуплялось в среднем 2,8 0,6 червячков. Коконы, подвергшиеся кипячению, не окрасились, из них не вылупилось ни одного червячка. Полученные результаты по определению дегидрогеназной активности коконов и по вылуплению червячков из коконов, находившихся в растворах токсикантов, позволяют выявить минимальные действующие и максимальные недействующие концентрации нефти и нефтепродуктов для коконов красных калифорнийских червей (см. таблицу). Как видно из материалов таблицы, данные по дегидрогеназной реакции коконов и по вылуплению червячков практически полностью совпадают. Таким образом, данный способ определения жизнеспособности коконов позволяет достаточно быстро и объективно определить токсикорезистентность коконов земляных червей к различным токсикантам. Источники информации 1. Городний Н. М., Мельник И.А., Повхан М.Ф. Биоконверсия органических отходов в биодинамическом хозяйстве. - Киев.: Урожай, 1990. - 256 с. 2. Фридман Р. А., Рудненко Е.В. Определение дегидрогеназной активности микроорганизмов активного ила//Охрана окружающей среды, 1983. - 12 с.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯСпособ определения жизнеспособности коконов дождевых червей, отличающийся тем, что коконы помещают в раствор 2,3,5-трифенилтетразолия хлористого (ТТХ) концентрацией 8-12 г/л и инкубируют в термостате при температуре 37-40oС в течение 55-60 мин, степень жизнеспособности коконов оценивают визуально по наличию и интенсивности красной окраски таковых.Популярные патенты: 2389173 Способ выращивания земляники садовой ... мТл.При заданной длине "L" (м) плоского индуктора 1 (см. чертеж), установленного на навесном устройстве 4, необходимую скорость "v" (км/час) механического передвижения трактора 3 определяли по формуле (1) где L - заданная длина плоского индуктора 1 (м) в направлении скорости передвижения трактора 3, фиг.1; F - частота следования (Гц) последовательности импульсов магнитной индукции;N - число импульсов магнитной индукции бегущей последовательности, воздействующей на одно растение 5 при непрерывном механическом перемещении над ним, параллельно почве, вдоль ряда насаждения 6 индуктора 1, установленного на навесном устройстве 4 трактора 3.Обработку кустов ... 2200377 Сельскохозяйственный агрегат ... близким по своей сущности и достигаемому эффекту, принимаемым за прототип, является сельскохозяйственный агрегат, содержащий навешенный на самоходное энергонасыщенное транспортное средство многокорпусной плуг с хребтовой балкой, на которой установлены плужные корпусы и расположенные в горизонтальной плоскости с возможностью поворота вокруг и перестановки вдоль своих продольных осей передний и задний брусья, на бороздных концах которых установлены с возможностью поворота вокруг и перестановки вдоль осей стойки с прикрепленными к ним соединительными узлами концов свободно вращающегося цепного модуля с рыхлящими зубьями на звеньях цепи (см. патент Украины 17384, по классу А 01 В ... 2195801 Картофелекопатель швыряльного типа ... скатываются по ним в тот же просвет - на поверхность поля - в валок. Превышение угла наклона к горизонту плоскости крышки 22 в сравнении с углом наклона нижнего среза боковин 6 канала, а также установка экрана 8 под углом к горизонтальной плоскости в продольном направлении позволяют повысить площадь контакта клубненосной массы с соответствующими рабочими поверхностями. Регулирование угла установки экрана 8 в зависимости от вида, состояния почвы и скорости потока клубненосной массы позволяет увеличить сепарирующую часть копателя по длине за счет использования для этого пространства, образованного под экраном 8. Это улучшает качество сепарации клубней без увеличения габаритных ... 2185064 Вещество, обладающее пестицидной активностью, способ его получения, пестицидная композиция и способ контролирования вредителей ... 2,01 мОм и рН 4,8. Разведенный образец наносят со скоростью 17 мл/мин на колонку, уравновешенную 20 мМ ацетат-аммонийным буфером с рН 5,0. После нанесения образца колонку промывают 3 л 20 мМ ацетат-аммонийного буфера, рН 5,0. Элюцию проводят со скоростью 18 мл/мин 5 л непрерывного градиента ацетат-аммонийного буфера от 20 мМ до 1 М, рН 5,0. Фракции собирают каждую минуту и каждую пятую фракцию подвергают биологическому исследованию при использовании Diabrotica undecimpunctata, как описано выше. Активность, обнаруживаемая с помощью биологического исследования, ассоциировалась с фракциями 25-95. Активные фракции объединяют, лиофилизируют и растворяют в 50 мл деионизованной воды. На ... 2496309 Зубчатое устройство для вычесывания домашних животных с механизмом выброса шерсти ... животных, причем устройство для вычесывания домашних животных содержит зубчатую часть, ручку и выбрасывающую шерсть часть, и зубчатая часть содержит множество зубцов, размещенных по меньшей мере в один ряд, и множество граничных сегментов при наличии зазора между каждой соседней парой зубцов, причем граничные сегменты чередуются с зубцами и перекрывают зазоры между зубцами, а выбрасывающая шерсть часть содержит кромку, которая может перемещаться между первым положением и вторым положением относительно зубчатой части, при этом, когда выбрасывающая шерсть часть находится в первом положении, граничные сегменты зубчатой части находятся в основном между кромкой выбрасывающей шерсть части ... |
Еще из этого раздела: 2228024 Способ профилактики мастита у коров и устройство для его осуществления 2452155 Лапа культиватора 2502793 Масло, семена и растения подсолнечника с модифицированным распределением жирных кислот в молекуле триацилглицерина 2027346 Лесозаготовительная машина 2402189 Роликовая сортировальная машина 2206985 Упряжь для собак 2403705 Способ автоматического управления температурно-световым режимом в теплице 2440712 Автоматизированная система для хранения в поле, возможности оперативного контроля и выгрузки убранных продуктов урожая из уборочной машины 2262826 Способ сташевского и.и. переработки навоза личинками синантропных мух и устройство для его осуществления 2209542 Контейнер |
Изобретения в сельском хозяйстве
Обработка почвы в сельском и лесном хозяйствах
Посадка, посев, удобрение
Уборка урожая, жатва
Обработка и хранение продуктов полеводства и садоводства
Садоводство, разведение овощей, цветов, риса, фруктов, винограда, лесное хозяйство
Новые виды растений или способы их выращивания
Производство молочных продуктов
Животноводство, разведение и содержание птицы, рыбы, насекомых, рыбоводство, рыболовство
Поимка, отлов или отпугивание животных
Консервирование туш животных, или растений или их частей
Биоцидная, репеллентная, аттрактантная или регулирующая рост растений активность химических соединений или препаратов
Хлебопекарные печи, машины и прочее оборудование для хлебопечения
Машины или оборудование для приготовления или обработки теста
Обработка муки или теста для выпечки, способы выпечки, мучные изделия
|
|
||