Питательная среда для культивирования пыльников льнаПатент на изобретение №: 2120741 Автор: Поляков А.В., Пролетова Н.В. Патентообладатель: Всероссийский научно-исследовательский институт льна Дата публикации: 27 Октября, 1998 Адрес для переписки: подача заявки27.06.1996 публикация патента27.10.1998 Изображения Изобретение относится к биотехнологии, предназначено для культивирования in vitro пыльников льна и может быть использовано для получения нового исходного материала для создания сортов льна. Предлагаемая питательная среда содержит, мг/л: кальций хлористый двухводный - 435; калий фосфорнокислый однозамещенный - 170; калий азотнокислый - 1900; магний сернокислый семиводный - 370; аммоний азотнокислый - 1650; железо сернокислое семиводное - 27,8; этилендиамин-тетрацитат натрия (ЭДТА) одноводный - 37,3; кобальт хлористый шестиводный - 0,025; медь сернокислая пятиводная - 0,025; кислота борная - 6,2; калий иодистый - 0,75; марганец сернокислый одноводный - 22,3; натрий молибденовокислый двухводный - 0,25; цинк сернокислый семиводный - 8,6; мезоинозит - 100; тиамин - 0,1; глутамин - 25; пантотенат кальция - 4,0; кислота никотиновая - 0,5; пиридоксин - 0,5; аспарагин - 250; глицин - 2,0; серин - 125; сахароза - 50000; агар-агар - 7000; 6-бензиладенин - 1,0; кислота нафтилуксусная - 0,5; кислота индолилуксусная - 0,3 и бидистиллированная вода - до 1 л. Использование питательной среды обеспечивает увеличение каллусогенеза относительно известных питательных сред минимум в 2 раза. 1 табл. ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУИзобретение находится к биотехнологии, в частности к культивированию in vitro льна, и может быть использовано при культивировании пыльников растений для получения нового исходного материала. Известны многочисленные питательные среды для культивирования пыльников растений, которые содержат необходимые компоненты для индуцирования процесса образования каллуса и эмбриоидов на их основе (Ф.А. Калинин и др. Методы культуры тканей в физиологии и биохимии растений. Киев: Наукова думка, 1980. С. 238-242). Показано, что нет универсальной питательной среды позволяющей получить достаточный результат на разных растениях, в связи с чем разрабатываются среды для конкретных видов растений (Биотехнология растений: культура клеток /Пер. с англ. В.И. Негрука; с предисл. Р.Г. Бутенко. М.: Агропромиздат. 1989. 280 с. (с. 41-43)). Применение основных хорошо зарекомендовавших себя сред таких как N6 (Cu С.С., 1978), МС (Murashige, Skoog, 1962), Монниера (Monnier М. , 1978), B5 (Gamborg O.L., 1965) и др. на льне сопровождалось образованием лишь отдельных случаев каллусирования пыльников или возникновения эмбриоидов на их основе. Известна питательная среда (ближайший аналог) для культивирования пыльников льна, называемые A 22 (Nichteriein K., et al. New methods and recent progress in the breeding of fiax / Flax as a fibre and oil bearing crop. Proceedings of the FAO European regional workshop on flax.-Brno, Czechoslovakia, 18-20 June 1991. P. 175-183; Nichterlein K., Umbach H., Friedt W. Genotypic and exogenоus factors affecting shoot regeneration from anther callus of linseed (Linum usitatissimum L). Euphytica. 1991. 58. P. 157-164), которая содержит (мг/л): кальций хлористый двухводный - 435; калий фосфорнокислый однозамещенный - 170; калий азотнокислый - 1900; магний сернокислый семиводный - 370; аммоний азотнокислый - 165; железо сернокислое семиводное - 27,8; этилендиамин-тетрацитат натрия ((ЭДТА) одноводный - 37,3; кобальт хлористый шестиводный - 0,025; медь сернокислую пятиводную - 0,025; кислоту борную - 6,2; калий иодистый - 0,75; марганец сернокислый одноводный - 22,3; натрий молибденовокислый двухводный - 0,25; цинк сернокислый семиводный - 8,6; мензоинозит - 100; тиамин - 0,1; глутамин - 750; сахарозу - 60000; агарозу - 4000; 6-бензиладенин - 2,0; нафтилуксусную кислоту - 1,0. Недостатком этих сред является низкий выход каллусирующих пыльников льна-долгунца и пыльников с эмбриоидами. Увеличение частоты образования капсулирующих пыльников у льна очень важно, так как технология культуры пыльников in vitro довольно дорогостоящая, к тому же селекционеры не всегда располагают достаточным количеством ценного растительного материала. Повышение же частоты каллусогенеза позволяет уменьшить объем приготовления среды, лабораторной техники, объем растительного материала, расход рабочего времени и создает базу для технологии массового получения регенерантов в культуре пыльников льна. Заявляемое изобретение направлено на устранение вышеотмеченных недостатков и от его использования может быть получен следующий технический результат: увеличение выхода каллусирующих пыльников с 5,8% до 11,5% (или в два раза больше). Указанный технический результат достигается за счет того, что в питательную среду, включающую следующие компоненты: кальций хлористый двухводный, калий фосфорнокислый однозамещенный, калий азотнокислый, магний сернокислый семиводный, аммоний азотнокислый, железо сернокислое семиводное, этилендиамин-тетрацитат натрия ((ЭДТА) одноводный, кобальт хлористый шестиводный, медь сернокислую пятиводную, кислоту борную, калий иодистый, марганец сернокислый одноводный, натрий молибденовокислый семиводный, мезоинозит, тиамин, глутамин, сахарозу, уплотнитель 6-бензиладенин, кислоту нафтилуксусную и бидистиллированную воду, дополнительно вводят пантотенат кальция (4,0), кислоту никотиновую (0,5), пиридоксин (0,5), аспарагин (250), глицин (2,0), серин (125), кислоту индолилуксусную (0,3) и в качестве уплотнителя она содержит агар-агар (700). Способ иллюстрируется следующими примерами. Пример 1. Пыльники льна культивируют на среде, известной ранее, которую готовят по следующей технологии. В 400 мл бидистиллированной воды добавляют 7000 мг агар-агара и путем кипячения готовят агаровый гель. Затем в него добавляют растворенные в бидистиллированной воде ингредиенты (мг/л): кальций хлористый двухводный - 435; калий фосфорнокислый однозамещенный - 170; калий азотнокислый - 1900; магний сернокислый семиводный - 370; аммоний азотнокислый - 165; железо сернокислое семиводное - 27,8; этилендиамин-тетрацитат натрия ((ЭДТА) одноводный - 37,3; кобальт хлористый шестиводный - 0,025; медь сернокислую пятиводную - 0,025; кислоту борную - 6,2; калий иодистый - 0,75; марганец сернокислый одноводный - 22,3; натрий молибденовокислый двухводный - 0,24; цинк сернокислый семиводный - 8,6; мезоинозит - 100; тиамин - 0,1; глутамин - 750; сахарозу - 60000; агарозу - 4000; 6-бензиладенин - 2,0; нафтилуксусную кислоту - 1,0. Общий объем приготавливаемой среды доводится до 1000 мл добавлением бидистиллированной воды. Затем среду тщательно перемешивают. Раствором NaOH устанавливают pH среды 5,5-5,6. Горячую питательную среду разливают в большие биологические пробирки, которые закрывают алюминиевой фольгой и автоклавируют при 0,75 атм. два раза по 15 минут. Пыльники льна высаживают на застывшую агаризованную поверхность в стерильных условиях. Пробирки с пыльниками помещают в термостат при температуре 23-27oC и отсутствие света. Через 28 дней подсчитывают количество пыльников, давших каллус объемом более 5 мм3 (табл.). Пример 2. Условия проведения эксперимента аналогичны описанным в примере 1, но содержание компонентов в предлагаемой среде, следующее (мг/л): кальций хлористый двухводный - 435; калий фосфорнокислый однозамещенный - 170; калий азотнокислый - 1900; магний сернокислый семиводный - 370; аммоний азотнокислый - 1650; железо сернокислое семиводное - 27,8; этилендиамин-тетрацитат натрия ((ЭДТА) одноводный - 37,3; кобальт хлористый шестиводный - 0,025; медь сернокислая пятиводная - 0,025; кислота борная - 6,2; калий иодистый - 0,75; марганец сернокислый одноводный - 22,3; натрий молибденовокислый двухводный - 0,25; цинк сернокислый семиводный - 8,6, мезоинозит - 100; тиамин - 0,1; глутамин - 25; пантотенат кальция - 4,0; кислота никотиновая - 0,5; пиридоксин - 0,5; аспарагин - 250; глицин - 2,0; серин - 125; сахароза - 50000; агар-агар - 7000; 6-бензиладенин - 1,0; нафтилуксусная кислота - 0,5; кислота индолилуксусная - 0,3. Как следует из экспериментальных данных, использование предлагаемого варианта питательной среды обеспечивает увеличение каллусогенеза относительно известных питательных сред минимум в 2 раза.ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯПитательная среда культивирования пыльников льна, включающая кальций хлористый двухводный, калий фосфорнокислый однозамещенный, калий азотнокислый, магний сернокислый семиводный, аммоний азотнокислый, железо сернокислое семиводное, этилендиамин-тетрацитат натрия (ЭДТА) одноводный, кобальт хлористый шестиводный, медь сернокислую пятиводную, кислоту борную, калий иодистый, марганец сернокислый одноводный, натрий молибденовокислый двухводный, цинк сернокислый семиводный, мезоинозит, тиамин, глутамин, сахарозу, уплотнитель, 6-бензиладенин, кислоту нефтилуксусную и бидистиллированную воду, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит пантотенат кальция, кислоту никотиновую, пиридоксин, аспарагин, глицин, серин, кислоту индолилуксусную, и в качестве уплотнителя агар-агар при следующем соотношении компонентов, мг/л: Кальций хлористый двухводный - 435 Калий фосфорнокислый однозамещенный - 170 Калий азотнокислый - 1900 Магний сернокислый семиводный - 370 Аммоний азотнокислый - 1650 Железо сернокислое семиводное - 27,8 Этилендиамин-тетрацитат натрия (ЭДТА) одноводный - 37,3 Кобальт хлористый шестиводный - 0,025 Медь сернокислая пятиводная - 0,025 Кислота борная - 6,2 Калий иодистый - 0,75 Марганец сернокислый одноводный - 22,3 Натрий молибденовокислый двухводный - 0,25 Цинк сернокислый семиводный - 8,6 Мезоинозит - 100 Пантотенат кальция - 4 Кислота никотиновая - 0,5 Пиридоксин - 0,5 Тиамин - 0,1 Аспарагин - 250 Глицин - 2 Глутамин - 25 Серин - 125 Сахароза - 50000 Агар-агар - 7000 6-Бензиладенин - 1 Кислота нафтилуксусная - 0,5 Кислота индолилуксусная - 0,3 Бидистиллированная вода - Остальное до 1 ллПопулярные патенты: 2099929 Почвенная растительная смесь для культурных газонов и способ их создания ... и выдержку, высев семян дернообразующих трав в почвенный растительный слой, при этом супесчаную или суглинистую почвы или чернозем, а также торф или песок, предварительно просеивают через грохоты с ячейками до 12 мм. Выкладывание смеси на дренажную систему или подстилающий грунт производят в сухую погоду. Смесь выкладывают толщиной слоя 3 - 50 см, в зависимости от назначения культурного газона от середины газона к краям с сохранением уклонов грунта и дренажной системы, укатывают деревянным катком, выдерживают выложенную смесь под паром в течение 3 - 4 недель для ее усадки с ежедневным поливом, в случае отсутствия дождей. При рH почвы <6 производят ее известкование, а при ... 2263431 Устройство для предпосевной обработки семян ... трубопроводу 6 рассол бишофита перемещается в емкость смесительной камеры 1. При вращающемся роторе 17 его криволинейными лопастями 18 (см. фиг.1 и 2) порции семян приподнимаются над уровнем рассола и вновь в него сбрасываются.Многократные окунания семян в нагретый рассол бишофита и интенсивное смешивание приводит к тому, что поверхность и зародыш каждого семени покрывается пленкой парафина и насыщается солями и микроэлементами из рассола бишофита. По истечении 1-1,5 минут из смесительной камеры 1 рассол бишофита при открытом вентиле 7 сбрасывается через всасывающий патрубок 4 в камеру 10.Далее оператор рычагом 20 желоб 16 переводит в положение, изображенное на фиг.3, и ... 2087614 Способ создания травяного газонного покрытия открытых спортивных площадок и ухода за ним ... площадки. Эта работа проводится на следующий день после каждой игры и тренировки. Ремонтная почвенная смесь состоит из следующих компонентов, мас. чернозем 60-80 торф 35-10 сухие хвойные опилки 5-10 Один-два раза в год производят землевание выравнивание всей поверхности площадки подсыпкой почвенной ремонтной смеси без семян с соблюдением всех соответствующих уклонов площадки. После окончания сезона землевание проводится с целью как выравнивания, так и укрытия дернины и обеспечения питания травостоя в следующем сезоне. Ремонтная смесь на площадке высыпается равномерными порциями по поверхности. Затем гладилками разравнивают ремонтную смесь, покрывая поверхность площадки ровным ... 2415560 Способ выращивания корнесобственных саженцев винограда ... Эта технология подготовки почвы к высадке черенков позволяет начать их высадку на 10-15 дней раньше традиционных сроков.Подготовка черенков к высадке включает в себя следующие операции. Хранение черенков в подвальном помещении (хранилище) при температуре 1-3°C. Черенки хранятся в невысоком бурте на слое влажных опилок. Поверх бурта подсыпается слой влажных опилок и плотно укрывается полотном полиэтиленовой пленки. Укороченные черенки нарезаются непосредственно перед посадкой на 2-3-почковые длиной 17-25 см. Верхний срез делается на расстоянии 3-4 см от верхнего узла, нижний срез - на расстоянии 5-7 мм от узла. Проводится бороздкование, которое заключается в нанесении ... 2060659 Установка для переработки органического субстрата в биогумус ... мостовой кран 8 на подвесном пути 9 при помощи колес 10. Колеса 10 снабжены электрическим двигателем 11. На рельсовом пути 12 установлен тельфер 13. Тельфер 13 состоит из ходовых колес 14 и лебедки 15. Колеса 14 снабжены электрическим двигателем 16. Лебедка 15 снабжена электрическим двигателем 17. Погрузочные работы в камере 1 проводят фронтальным погрузчиком 18 специально изготовленными вилками. Внесение навоза или помета птиц на слой соломы после увлажнения и уплотнения проводят разбрасывателем 19 органических удобрений РСУ-6 в агрегате с трактором МТЗ-80. Оправку соломы на площадке, увлажнение и уплотнение, перемешивание с навозом, пометом, опилками и другими компонентами ... |
Еще из этого раздела: 2182765 Имитатор звуков рыб 2182420 Устройство для перерезания стволов деревьев 2453090 Способ минимальной обработки почвы 2420058 Способ выращивания зеленных культур в интенсивной светокультуре 2100354 Макроциклический лактон, фармацевтическая композиция, обладающая антибиотической активностью, и инсектоакарицидная композиция 2110911 Способ выращивания птицы 2464765 Сепарирующее устройство корнеклубнеуборочной машины 2404581 Способ изготовления муляжей анатомических препаратов полых и трубчатых органов 2071371 Способ нагрева тканей животного и устройство для его осуществления 2492623 Портативный электроинструмент с управлением спусковым механизмом |
Изобретения в сельском хозяйстве
Обработка почвы в сельском и лесном хозяйствах
Посадка, посев, удобрение
Уборка урожая, жатва
Обработка и хранение продуктов полеводства и садоводства
Садоводство, разведение овощей, цветов, риса, фруктов, винограда, лесное хозяйство
Новые виды растений или способы их выращивания
Производство молочных продуктов
Животноводство, разведение и содержание птицы, рыбы, насекомых, рыбоводство, рыболовство
Поимка, отлов или отпугивание животных
Консервирование туш животных, или растений или их частей
Биоцидная, репеллентная, аттрактантная или регулирующая рост растений активность химических соединений или препаратов
Хлебопекарные печи, машины и прочее оборудование для хлебопечения
Машины или оборудование для приготовления или обработки теста
Обработка муки или теста для выпечки, способы выпечки, мучные изделия
|
|
||