Способ получения препарата для борьбы с болезнями растенийПатент на изобретение №: 2069953 Автор: Ермаков Виктор Николаевич, Ермакова Надежда Ивановна, Штерншис Маргарита Владимировна Патентообладатель: Ермаков Виктор Николаевич, Ермакова Надежда Ивановна, Штерншис Маргарита Владимировна Дата публикации: 10 Декабря, 1996 Адрес для переписки: подача заявки17.07.1992 публикация патента10.12.1996 Изображения  Использование: в сельском хозяйстве для борьбы с болезнями растений, в частности пероноспорозом антракнозом, черной ножкой серой и белой гнилью, фузариозом. Сущность изобретения: разработан способ получения безопасного непатогенного для растений препарата, эффективного против многих болезней растений с пролонгированным сроком хранения и действия, который включается в выращивании биомассы бактерий Pseudomonas species, адсорбировании ее на основу из цеолита с размером частиц 10-30 мк с последующим высушиванием в естественных условиях. Выращивание Pspesies проводят 23-27 часов к биологическом реакторе в жидкой среде при продувании стерильным воздухом. Кроме того, при осуществлении способа получения препарата может быть введен декстрий в количестве 0,5-1,5 вес.проц. 3 з.п. ф-лы, 4 табл. , ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУИзобретение относится к области сельского хозяйства, точнее, к способам получения биологических препаратов и может быть использовано для борьбы с болезнями растений, в частности, пероноспорозом, антракнозом, черной ножкой, серой и белой гнилями, фузариозом. Известен способ борьбы с болезнью пшеницы Gaeumonnomyces grominis с помощью бактерии Pseudomonas putida штамма 1 МЕТ 11286 (1). В соответствии с этим способом применяют суспензию бактерий. Средство вызывает повышение урожайности, в пересчете на сухую массу, и снижение коэффициента поражения в полевых и лабораторных опытах. Недостатком данного способа являются эффективность только против Gaeumonnomyces grominis, а также незначительный срок хранения препарата, обусловленный использованием раствора культуры Pseudomonas putida подвергающегося неблагоприятным воздействием внешней среды. Известен также способ получения биологического препарата для борьбы с болезнями растений на основе Fusarium oxysporum являющийся прототипом заявляемого способа получения препарата. Известный препарат содержит биологически активное вещество Fusarium oxysporum и добавки, включающие цеолит. Биоцид получают путем выращивания биомассы микроорганизмов в жидкой среде, адсорбирования полученной культуральной жидкости на основу из цеолита и сушки в естественных условиях. В другом варианте способа в диспергируемую среду на основе Д-сорбитола с добавкой в значительном количестве соли глутаминовой кислоты диспергируют Fusarium oxysporum и дисперсию подвергают вакуумной сублимационной сушке. Благодаря добавкам цеолита известный препарат обладает пролонгированным сроком хранения и действия, удобной формой. Однако, существенным недостатком известного способа получения препарата является опасность заражения растений Fusarium oxysporum что обусловлено тем, что Fusarium oxysporum является факультативным паразитом и сильно изменчивым организмом. Д-сорбитол, основа диспергируемой среды, на 50-80% ингибирует фермент полигалактуроназу, играющую основную роль в фузариозном увядании. Таким образом, вероятность отрицательного действия препарата на растения велика. Кроме того, добавки Д-сорбитол и глатуминовая кислота, снижающие вероятность негативного воздействия, относительно дороги, что ограничивает использование препарата. Задача настоящего изобретения разработка способа получения безопасного, непатогенного для растений препарата широкого спектра действия, эффективного против многих болезней растений, с пролонгированным сроком хранения и действия. Способ получения препарата осуществляется следующим образом, выращивают биомассу бактерий Pseudomonas species в жидкой среде, затем адсорбируют полученную культуральную жидкость на основе из цеолита с последующим высушиванием в естественных условиях. В смесь культуральной жидкости с цеолитом может добавляться декстрин в количестве 0,5-1,5% Биомассу бактерий выращивают в биологическом реакторе 23-27 часов при продувании стерильным воздухом. Время выращивания культуры Pseudomonas species в жидкой среде обусловлено тем, что данный микроорганизм при выращивании в предлагаемой среде достигает стационарной фазы (стадии, когда уменьшается качество питательных веществ и накопление продуктов метаболизма в среде) через 23-27 часов. За ней наступает фаза, в которой отмирание клеток преобладает над делением, т.е. фаза гибели. Стационарная фаза оптимальная при приготовлении сухого препарата для сохранения жизнеспособности микроорганизмов. Параметры Pseudomonas species (0,51 микрон) вполне соизмеримы с полиэдрическими полостями и даже микропорами структур природных цеолитов, что обеспечивает высокую степень адсорбирования. Декстрин, входящий в состав препарата, является нейтральным нетоксичным веществом, продлевающим срок хранения биопрепарата, повышающим стабильность рабочей суспензии. Кроме того, декстрин выполняет функцию прилипателя в случае использования при опрыскивании растений. Экспериментально установлено, что добавка декстрина менее 0,5 не обеспечивает упомянутых качеств, а выше 1,5% экономически невыгодно ввиду отсутствия приращения этих качеств. Пример 1. Осуществление способа получения биопрепарата. Готовят инокулят на среде, состоящей из мелассы (12%) и пептона (0,81%). Колбы объемом 0,51 и заполняют средой на 1/4 часть, закрывают ватными пробками и стерилизуют. В стерильную остывшую среду вносят иглой кусок культуры Pseudomonas species из пробирки возле пламени спиртовки. Культуру растят на качалке при температуре 25 2 o С в течение 24 часов. Готовый инокулят содержит до 1013 клеток/мл среды. Используя Кинга на чашках Петри определяют титр действующего начала инокулята. При подсчете учитывают две серии параллельных разведений, расхождение между ними не должно превышать 30% Подсчитывают среднее значение числа колоний  для каждого выбранного разведения, а затем определяют средневзвешенное  (соответствующее максимальному разведению) число колоний  из простых средних, соответствующих двум последовательным разведениям. Результаты подсчета колоний в чашках Петри (клеток (мл) при разведениях 1 1010 и 11011 инокулята приведены в таблице 1. Средне взвешенное число колоний, соответствующее максимальному разведению)  составляет 38,8, титр культуры С 38,81012Я. Потребность инокулята для засева биологического реактора 5% от объема среды в реакторе, стартовый титр инокулята при этом составляет 109 клеток/мл. Для приготовления среды пользуются варочным котлом, в который заливают среду, состоящую из раствора мелассы (1%) и пептона (0,5% ). После остывания среды в реакторе стерильно вносят инокулят в количестве 5% от объема среды) в посевное отверстие. Культивацию проводят в биологическом реакторе при аэрации до 1 л стерильного воздуха на 1 л среды в течение 23-27 часов. К концу культивации в среде образуется 11013 51013 клеток бактерий Pseudomonas species на 1 мл среды. Полученную биомассу бактериальных клеток сливают и адсорбируют на основу из цеолита. Для этого природный цеолит с размером частиц 13-30 мк заливают культуральной жидкостью в соотношении цеолит: культуральная жидкость, равном (0,8):1 по весу, перемешивают и оставляют при комнатной температуре. Через 24 часа надосадочную жидкость сливают или отсасывают, осадок высушивают в естественных условиях в вентилируемом помещении, раскладывая слоем 0,51 см в течение 24-36 часов. Контролируют титр полученного препарата порошка сероватого или светло-коричневого цвета. Он составляет 11013 клеток на 1 сухого препарата. Экспериментально установлено, что порошок при заявленном способе получения препарата хранится при +4 o С в течение года без потери активности. Пример 2. Получение биопрепарата с добавлением декстрина. Все операции по выращиванию биомассы Pseudomonas species проводятся аналогично примеру 1. К концу 24-часовой культивации в биологическом реакторе известными методами определяют титр культуры Pseudomonas species в среде. Он составляет 18,61012 клеток/мл. Цеолит с размером частиц 10-13 мк заливают культуральной жидкостью в соотношении по весу 1:1, добавляют декстpин в количестве 0,5-1% от веса смеси цеолита с культуральной жидкостью, перемешивают и оставляют на сутки. Далее также, как в примере 1, получают порошок биопрепарата. Определяют титр высушенной культуры на носителе с добавлением декстрина. В таблице 2 даны результаты подсчета количества колоний в чашках Петри высушенной культуры на носителе цеолите с добавлением декстрина (сухая форма). Средневзвешенное число колоний составляет N приблизительно 40,2, титр препарата С 40,21912 клеток/г. Пример 3. Действие против Fusarium oxysporium на зерновых культурах и овощных. Для приготовления рабочей суспензии хорошо перемешивали порошок биопрепарата, полученный в примере 1 и 2, в небольшом количестве воды и оставляли на 4-24 часа. Затем разводили препарат до нужной концентрации в зависимости от способа применения: при обработке семян зерновых овощных культур и картофеля 11,5% пролив почвы 0,1-0,2% опрыскивание растений 0,01-0,02% Провели вегетационные опыты и производственные испытания. Стерилизованную нагреванием почву смешивали с суспензией гриба Fusarium oxysporium получая максимальную инфекционную нагрузку почвы 100 спор/г почвы. В качестве чистого контроля взята стерильная почва. Варианты опыта: 1. Чистый контроль (стерильная почва, обработка препаратом, полученным по заявленному способу, не проводилась). 2. Почва заражена Fusarium oxysporium обработка препаратом не проводилась. 3. Почва заражена Fusarium oxysporium, семена овса и огурцов обработаны препаратом за 7 дней до посадки. 4. Почва заражена Fusarium oxysporium, семена овса и томатов обработаны препаратов в день посадки. 5. Почва заражена Fusarium oxysporium семена овса и томатов обработаны препаратом за 7 дней до посадки, почва полита суспензией препарата. 6. Почва заражена Fusarium oxysporium, семена не обработаны, почва пролита суспензией во время посадки культур. На каждый вариант брали 4 повторности. Через 15 дней корни растений повреждали продольным разрезом ножом вдоль рядка и в сделанную ножом бороздку вводили суспензию конидий и фрагментов гиф Fusarium oxysporium для ускорения развития заболевания. Через 30 дней после посадки учитывали симптомы поражения. Для этого корни растений отмывали в среде и определяли развитие болезни на каждом растении в баллах по шкале ВИЗР (3). Результаты вегетационного опыта по влиянию полученного по заявляемому способу препарата на развитие заболевания, вызванного Fusarium oxysporium на культурах представлены в таблице 3 (овес) и в таблице 4 (томат). Эффективность препарата, полученного по заявляемому способу, при предпосевной обработке семян овса составляет 88% по степени поражения корневой системы и 32-39% по количеству пораженных растений, как при обработке в день посева. Дополнительный полив почвы увеличивает эффективность препарата по количеству пораженных растений до 56% Эффективность полученного по заявляемому способу препарата на томатах против Fusarium oxysporium при предпосевной обработке семян составляет до 92% степени поражения корневой системы и до 76% по количеству пораженных растений. Пример 4. Действие против черной ножки на томатах. Проводили вегетационный опыт по выявлению влияния полученного по заявляемому способу препарата против черной ножки на томатах аналогично примеру 3. Эффективность на томатах против черной ножки при поливе почвы составила 94% Пример 5. Производственные испытания в защищенном грунте против пероноспороза, серой и белой гнилей на огурцах. После двукратной обработки растений опрыскиванием суспензией полученного препарата, приготовленной как в примере 4, эффективность препарата составила 85-90%
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Способ получения препарата для борьбы с болезнями растений, включающий выращивание биомассы бактерий в жидкой среде, адсорбирование полученной культуральной жидкости на основу из цеолита с последующим высушиванием в естественных условиях, отличающийся тем, что для выращивания биомассы используют культуру бактерий Pseudomonas spesies. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что биомассу бактерий P. spesies выращивают в биологическом реакторе 24 27 ч при продувании стерильным воздухом. 3. Способ по пп.1 и 2, отличающийся тем, что полученный культуральной жидкостью заливают цеолит с размером частиц 10 30 мк в соотношении 1 мас. ч. культуральной жидкости на 0,8 мас. ч. 4. Способ по пп.1 и 3, отличающийся тем, что в смесь цеолита и культуральной жидкости добавляют декстрин в количестве 0,5 1,5 мас.Популярные патенты: 2007901 Устройство для хранения овощей и фруктов ... блока питания и входу первого диода и через девятый резистор - к первому контакту реле, второй контакт которого соединен с управляющим входом тиристора непосредственно, выход тиристора подключен к второму входу блока нагревателей, выход компаратора подключен к входу седьмого резистора, третий и четвертый входы - к первому выходу блока питания, пятый вход - к выходу первого резистора, датчик температуры выполнен в виде терморезистора и подключен параллельно второму конденсатору. Другие изменения, связанные с зарегистрированными изобретениями Изменения: Зарегистрирован переход исключительного права без заключения договораДата и номер государственной регистрации перехода ... 2175477 Способ борьбы с тлями ... незначительно. Испытание более высоких концентраций соли угольной кислоты от 0,15 до 0,25% также показало снижение эффективности. Это связано с тем, что афидицидная композиция под действием более высоких дозировок (более 0,1%) соли угольной кислоты расслаивалась с выпрессовкой масляной фазы (табл.2). При этом исключалась возможность получения стабильной рабочей эмульсии, что сопровождалось снижением ее гидрофильности и уменьшением эффективности опрыскивания. Результаты испытаний соли угольной кислоты в концентрации 0,1% на фоне соотношения мыла зеленого и масла горчичного по 0,3 - 0,5% и 0,6 - 1% по эффективности практически не отличались (табл. 1). Причем высокое ... 2474105 Плодосъемник шолина ... на решение которой направлено заявляемое изобретение, является упрощение конструкции плодосъемника и расширение арсенала технических средств для дистанционного и непосредственного съема плодов с кустов и деревьев, преимущественно красной и черноплодной рябины, калины и других гроздей ягод. Технический результат, получаемый при осуществлении изобретения, заключается в реализации назначения заявляемого технического решения и в обеспечении возможности использования прогрессивной технологии выдувания изделий для изготовления заявляемого устройства, а также возможности использования в качестве заготовок устройства бывших в употреблении пластиковых бутылок и выпускаемых ... 2261588 Способ электростимуляции жизнедеятельности растений ... жизнедеятельности растений без подведения электрической энергии от внешних источников, посредством использования различных металлов, вносимых в почву, при различном составе почвы; - внесение металлических частиц, пластин в почву можно совмещать с другими процессами, связанными с обработкой почвы. При этом помещать металлические частицы, пластины можно без определенной направленности;- возможность воздействия слабыми электрическими токами, без использования электрической энергии от внешнего источника, в течение длительного времени;- получение токов электростимуляции растений различного направления, без подвода электрической энергии от внешнего источника, в зависимости от ... 2395497 Способ стимулирования роста подсолнечника регулятором роста ... раствор 1,73 г (11 ммоль) 2-фторбензоилхлорида в 10 мл безводного бензола в течение 50 мин. Перемешивание продолжают еще 2,5-3 ч, затем осадок отфильтровывают, промывают 5 мл бензола, сушат, затем обильно промывают водой. После перекристаллизации из этанола получают 2,2 г (68%) целевого соединения 1 в виде белых кристаллов с т.пл. 184-185°С. Найдено, %: С 56,39; Н 4,23; N 13,27; C15 H13ClFN3O2;Вычислено, %: С 56,00; Н 4,07; N 13,06.ЯМР 1Н, , м.д. (группа): 2,32 (3Н, с, 4-СН3), 2,42 (3Н, с, 6-СН3), 7,00 (2Н, уш. с, NH2), 7,21 (1Н, с, 5-Н Ру), 7,54 8,10 (4Н, м, Ar).Масс-спектр: m/z (относ. интенсивность): М+ 321 (11); 181 [М- 2-FС6 Н4-СООН]+ (48); 168 [М- N-О-СО-С6 ... |
Еще из этого раздела: 2423807 Культиватор (варианты) и фреза для него 2028749 Капустоуборочная машина 2261592 Ферма двухконсольного дождевального агрегата 2263431 Устройство для предпосевной обработки семян 2115638 Способ переработки органических отходов животного происхождения в кормовой белок и биогумус 2482660 Способ выращивания рапса ярового на семена 2111642 Высевающий аппарат 2056100 Доильный стакан 2027346 Лесозаготовительная машина 2216903 Устройство для отделения плодов от ветвей |
Изобретения в сельском хозяйстве
Обработка почвы в сельском и лесном хозяйствах
Посадка, посев, удобрение
Уборка урожая, жатва
Обработка и хранение продуктов полеводства и садоводства
Садоводство, разведение овощей, цветов, риса, фруктов, винограда, лесное хозяйство
Новые виды растений или способы их выращивания
Производство молочных продуктов
Животноводство, разведение и содержание птицы, рыбы, насекомых, рыбоводство, рыболовство
Поимка, отлов или отпугивание животных
Консервирование туш животных, или растений или их частей
Биоцидная, репеллентная, аттрактантная или регулирующая рост растений активность химических соединений или препаратов
Хлебопекарные печи, машины и прочее оборудование для хлебопечения
Машины или оборудование для приготовления или обработки теста
Обработка муки или теста для выпечки, способы выпечки, мучные изделия
|
|
||