Способ микроклонального размножения винограда "ин витро"Патент на изобретение №: 2041609 Автор: Музыченко Б.А., Дорошенко Н.П. Патентообладатель: Научно-производственное объединение "Виноград" Дата публикации: 20 Августа, 1995 Адрес для переписки: подача заявки01.02.1993 публикация патента20.08.1995 ИзображенияИспользование: в сельском хозяйстве и может быть использовано в виноградарстве для ускоренного размещения и оздоровления сортов винограда. Сущность способа: вначале осуществляют микрочеренкование пробирочных растений с 8 10-ю междоузлиями на фрагменты длиной 10 - 12 мм с узлом и листом, а затем высаживают их на твердую питательную среду Мурасиге Скуга. В питательную среду добавляют тонкоразмолотые семена винограда в концентрации 0,1 0,5 от объема среды. 5 табл. , , ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУИзобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к способам размножения растений, и может быть использовано в виноградарстве для ускоренного размножения и оздоровления перспективных сортов винограда, в исследованиях по физиологии винограда, служит охране окружающей среды. Известна основная модель клонального микроразмножения растений пролиферация пазушных побегов, основанная на снятии апикального доминирования [1] Есть два направления осуществления этого способа: получение побегов нормальных пропорций с последующим их делением на однопочковые микрочеренки, которые используются в качестве вторичных эксплантов для повторения цикла размножения, введение в питательную среду цитокининов, что приводит к формированию побегов с относительно укороченными междоузлиями, а пазушные почки и меристематические бугорки дают начало новым побегам. Недостатком данного способа является недостаточно высокий коэффициент размножения в процессе культивирования. Известен способ клонального микроразмножения винограда микрочеренкованием [2] при котором побег, образовавшийся из изолированной почки и имеющей 8-10 междоузлий, асептически разрезают на фрагменты, включающие узел с листом и почкой. Полученные микрочеренки высаживают в биологические пробирки на агаровую среду, так чтобы нижняя часть была погружена в агар, а затем культивируют в камере фитотрона. Недостатком способа является то, что в качестве индуктора корнеобразования взята феруловая кислота, которая способна ингибировать рост побегов и снижать выход растений из черенков. Известен способ микроклонального размножения винограда "Ин витро", включающий микрочеренкование пробирочных растений с 8-10 междoузлиями на фрагменты длиной 10-12 мм с узлом и листом и высадку их на твердую питательную среду Мурасиге Скуга [3] В качестве индукторов корнеобразования здесь используют индолилмасляную и индолилуксусную кислоты. Трудность заключается том, что при клональном микроразмножении растения растут относительно медленно и это ограничивает эффективность метода при размножении побегов микрочеренками. Одной из причин медленного роста являются стрессовые условия, в которых находятся растения "Ин витро". Кроме этого, основной сложностью технологии на первом этапе является ингибирование ростовых процессов экспланта токсическими веществами, выделямыми им в среду. В результате травмы, полученной эксплантом при изолировании, активизируются ферменты, окисляющие фенолы растений, различные фенолозы. Продукты окисления фенолов обычно ингибируют деление и рост клеток экспланта. Чтобы улучшить положение добавляют активированный уголь, который уменьшает число погибающих растений, или антиоксиданты. Изобретение предназначено для повышения эффективности клонального микроразмножения. В предложенном способе микроклонального размножения винограда "Ин витро", заключающем микрочеренкование пробирочных растений с 8-10-ю междоузлиями на фрагменты длиной 10-12 мм с узлом и листом и высадку их на твердую питательную среду Мурасиге Скуга, в питательную среду добавляют тонкоразмолотые семена винограда в концентрации 0,1-0,5% от объема среды. Новым в предложенном способе является то, что оптимизацию клонального микроразмножения осуществляют за счет питательной среды, в составе которой предлагают стимуляторы роста естественного прохождения, а именно семена винограда, в виде тонкоразмолотого порошка. Известно, что виноградные семена используют при производстве масла, кормовой муки, удобрений, естественного парника. В предложенном способе семена используются как стимуляторы роста ввиду того, что в них находятся вещества с ценными биологическим свойствами: абсцизовая и хлорогеновая кислоты, общий фенолы, рутин, свободные ауксины и цитокинины. В состав семян винограда входят такие осмотически активные вещества как соли, сахара, органические кислоты. Также входит большое количество фитогормонов (ауксинов и цитокининов), которые обладают трофическим действием, т.е. способны тормозить деструктивные процессы, которые являются характерной чертой старения органов или целых организмов. Использование семян винограда в виде тонкоразмолотого порошка позволяет адсорбировать токсические вещества, выделяемые растениями при их микрочеренковании в питательную среду, и заменить таким образом активированный уголь. Т.е. налицо неоднозначность предлагаемого приема: адсорбирование токсических веществ, выделяемых пробирочными растениями в питательную среду при их микрочеренковании, и обогащение питательной среды цитокининами, ауксинами и другими фитогормонами, входящими в состав семян винограда. Адсорбирование токсических веществ осуществляют с целью уменьшения ингибирования наружного роста и увеличения регенеративной способности выделенных эксплантов. Способ осуществляют следующим образом. Отбирают клонально-размноженные из меристематических верхушек пробирочные растения винограда. Растения должны иметь 8-10 глазков, а затем приступают к приготовлению питательной среды Мурасиге Скуга по общепринятой методике. Применяют следующий порядок приготовления питательной среды. В 1 л бидистиллированной воды растворяют макроэлементы, микроэлементы, витамины и другие составные части среды. Навеску предварительно промытого и высушенного агара переносят в колбу, заливают половинным количеством (от объема среды) бидистиллированной воды 1 л и нагревают на плите до 80-100оС. Семена винограда тщательно промывают, просушивают, перемалывают на лабораторной мельнице до малой фракции около 5 мин. Добавляют их в раствор макро- и микроэлементов, сахара, витаминов и других составных частей среды. Молотые семена добавляют в концентрации 0,25% После растворения и некоторого охлаждения агара к нему добавляют приготовленный раствор. Температура агара и добавленного раствора одинаковая и составляет 80оС. Среду фильтруют через два слоя марли и доводят до нужного объема бидистиллятом. Готовую среду разливают по пробиркам, которые закрывают предварительно простерилизованными в автоклаве ватными пробками, штатив с пробирками закрывают целлофаном и обвязывают шпагатом, а затем среду автоклавируют в автоклаве ГК-1000. Микрочеренкование осуществляют в операционной комнате в ламинарном боксе "Роботрон". Побеги, имеющие 8-10 глазков, при помощи пинцета извлекают из пробирки, помещают на стерильную чашку Петри, разрезают на микрочеренки, имеющие узел с листом и почкой. Длина микрочеренка 10-12 мм, 2 мм над почкой, остальные под почкой. Получение микрочеренки высаживают в пробирки с приготовленной твердой средой, так чтобы нижняя часть до почки была погружена в агар. Культивирование осуществляют в культуральной комнате при освещенности 2,0-3,0 тыс.люксов, фотопериоде 16 ч, температуре 25-272оС, влажности воздуха 70-75% Наблюдения за ростом растений осуществляют через 15 дней. Добавление размолотых семян винограда в первую очередь влияет на развитие корневой системы увеличивается число корней и уменьшается их длина, что объясняется наличием в составе семян свободных ауксинов. В конечном итоге количество корней возрастает в 1,8 раза, соответственно уменьшается их длина, но корни от этого не ухудшаются, они становятся более мощными и общая их масса возрастает в 4,1 раза (табл.1.). Это оказывает положительное влияние на рост побегов, образование листьев и новых узлов, хотя на первом этапе отличалось угнетение этих процессов, но на втором месяце культивирования скорость роста пробирочных растений увеличивается за счет добавления в питательную среду размолотых семян винограда, что способствует мощному развитию корневой системы. Торможение же роста в течение первого месяца зависит от наличия в составе семян абсцизовой кислоты и фенолов, которые являются ингибиторами широкого спектра действия. Положительное действие добавки в питательную среду размолотых семян винограда наблюдали при их концентрации 0,1% от объема среды, максимальный положительный эффект был получен при концентрации 0,25% При дальнейшем увеличении концентрации размолотых семян в среде (0,5%) положительное действие сохраняется, но отмечается тенденция к его снижению. Развитие пробирочных растений в зависимости от количества молотых семян винограда, добавленных в питательную среду (через 63 дня после начала культивирования), представлено в табл.2. Таким образом, добавление в питательную среду естественных стимуляторов роста из размолотых семян винограда способствует значительному улучшению корневой системы пробирочных растений после их микрочеренкования, что в свою очередь благоприятствует лучшему росту побегов в высоту, развитию большой листовой поверхности, увеличению общей массы побегов. В результате этого увеличивается число узлов (листьев, в пазухе которых находится почка), которые дают начало новым растениям "Ин витро" после их микрочеренкования, т. е. увеличивается потенциальное микрочеренкование и эффективность клонального микроразмножения. В табл. 3 и 4 соответственно показаны признаки и состав питательной среды. Предложенная совокупность признаков способствует повышению эффективности клонального микроразмножения на 27,0% и достаточна для достижения поставленной цели. Добавление в питательную среду размолотых семян винограда оказывает, в первую очередь, положительное влияние на укоренение и развитие корневой системы пробирочных растений: уменьшается длина главного и придаточных корней, но возрастает их число, что способствует увеличению корневой системы. Динамика развития пробирочных растений без добавления и при добавлении в питательнуюс. реду размолотых семян винограда 0,25 об. среды представлена в табл.5.ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯСПОСОБ МИКРОКЛОНАЛЬНОГО РАЗМНОЖЕНИЯ ВИНОГРАДА "ИН ВИТРО", включающий микрочеренкование пробирочных растений с 8 10 междоузлиями на фрагменты длиной 10 12 мм с узлом и листом, посадку их на твердую питательную среду Мурасиге и Скуга и культивирование из них растений, отличающийся тем, что в питательную среду добавляют тонкоразмолотые семена винограда в концентрации 0,1 0,5% от объема среды.Популярные патенты: 2048055 Устройство для отрезания и погрузки сенажа и силоса ... на криволинейном участке траектории. Устройство для отрезания и погрузки сенажа и силоса состоит из рамы с горизонтальными вилами 1, несущего бруса 2, на котором закреплен механизм 3 поворота с гидроцилиндром 4 и телескопическими рычагами 5 и 6, механизма 7 привода ножа 8, -образной направляющей рамки 9 и кронштейнов 10 со штырями 11 прямоугольного сечения. Рычаги 5 и 6 опираются на рамку 9 с помощью роликов 12. Нож выполнен составным из трех частей: рукояти 13 (см. фиг.2), двух режущих частей 14 и 15, соединенных между собой с возможностью поворота друг относительно друга и относительно рукояти 13. Рукоять 13 составная и выполнена с двумя сквозными отверстиями 16 прямоугольного ... 2289908 Способ получения рассады стевии ... зелеными черенками в рассадочных ящиках и бумажных кассетах (см. Зубенко В.Ф., Ковальчук М.И., Гресь Е.И. Сахарная свекла, 1992. - №6. - С.38-39).Недостатком данного способа является предварительная обработка зеленых черенков водой и стимуляторами роста, дополнительные операции по присыпке посадочного материала, отсутствие изоляции растений в случае появления фитоинфекции, нерегулируемая испаряемость воды листовой поверхностью, нарушение корневой рассады при извлечении рассады из ящиков перед посадкой.РАСКРЫТИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯЗадачей предлагаемого изобретения является разработка простого в применении и экологически чистого способа выращивания рассады стевии из зеленых ... 2027341 Бункер для сыпучих материалов ... аппарат 42 получает питание от пневмопровода 61 при помощи задвижки а, а кольцевые полости 24 и конусообразная полость 49 - от пневмопровода 61 при помощи задвижки b, a в отключенном от пневмопровода 61 состоянии - при помощи задвижки с пневмопровода 62, через воздухоприемную камеру 15, сообщаются с окружающей средой. Зернопродукты в бункере размещаются исходя из взаимоположения окон В и С. Бункер работает следующим образом. При отсутствии необходимости утилизации отходов в сухом виде, получаемых в результате обработки зернопродуктов при их провеивании или перелопачивании с помощью пневмопровода 4, пневмоциклон 6 может не включаться как агрегатное звено. При этом шламосборник 7 ... 2407282 Способ выращивания корнесобственных саженцев винограда и машина для его осуществления ... температурный режим и влажность почвы. Пленка 22 подавляет сорную растительность, исключает испарение влаги и поддерживает равную влажность почвы по всей ширине гребня 5. При высоте лозы 0,6 0,8 м проводят прищипывание верхушек лозы и убирают пасынки. В позднеосенний период производят копку саженцев скобой и ручную выборку каждого саженца с последующей обвязкой в пучок по 10 штук.Описанный способ выращивания корнесобственных саженцев винограда реализуют машиной для формирования гребней 5 за один проход при непрерывном выполнении всех энергоемких технологических операций. При этом в обслуживании машины участвуют тракторист (механизатор) и оператор (рабочий), следящий за ... 2015633 Способ переработки отходов животноводческих комплексов и устройство для его осуществления ... входе устройства размещен трехслойный фильтр 1, предназначенный для наиболее полной очистки от механических примесей и крупных комков непереваренной пищи. Этот фильтр содержит три слоя фильтрующего материала и разделен тремя сетками с ячейками разного диаметра. Сетки и пропускная способность каждого материала подобраны таким образом, что по ходу продвижения через фильтр исходного продукта первоначально отделяются наиболее крупные включения, затем менее крупные и наконец самые мелкие. Емкость 2 является накопителем отфильтрованного продукта и обеспечивает квазинепрерывное питание всей последующей технологической цепи. Внутри емкости 2 размещен теплообменник 3, который может быть ... |
Еще из этого раздела: 2468582 Инсектицидно-фунгицидный состав и способ борьбы с вредителями и болезнями крестоцветных культур 2153256 Инсектицидное средство и способ борьбы с вредителями сельскохозяйственных культур 2261588 Способ электростимуляции жизнедеятельности растений 2281645 Устройство для размещения цветов и растений с подсветкой (варианты) 2033002 Орудие для междурядной обработки почвы 2216903 Устройство для отделения плодов от ветвей 2040152 Способ выращивания корнеплодных культур в контролируемых условиях и установка для его осуществления 2121263 Способ лесоводственной оценки технологического комплекса машин 2438305 Способ выращивания цыплят-бройлеров 2238970 Штамм mycelia sterilia лх-1-продуцент комплекса биологически активных веществ, обладающих рострегуляторными свойствами |