Способ получения хлорофилла, меченного радиоактивным изотопом c14Патент на изобретение №: 2039728 Автор: Пилипенко Л.Н., Сава В.М., Лях Т.А. Патентообладатель: Одесский технологический институт пищевой промышленности им.М.В.Ломоносова Дата публикации: 20 Июля, 1995 Адрес для переписки: подача заявки01.10.1992 публикация патента20.07.1995 Изображения  Использование: биохимия, селекционно-генетические исследования. Сущность изобретения: хлорофилл, меченный радиоактивным изотопом C14, получают путем выращивания зеленых культур на искусственной питательной среде, содержащей радиоактивные элементы, с последующим выделением и очисткой целевого продукта. 1 з.п.ф-лы, 1 ил. 1 табл. , ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУИзобретение относится к технологии получения радиоактивных органических соединений, в частности к способам введения радиоактивной метки в природные соединения, и может быть использовано в научно-исследовательских лабораториях для изучения метаболизма и биологической активности хлорофилла и продуктов его биотрансформации. Известен способ введения радиоактивного изотопа в природные органические соединения жирные кислоты [1] предусматривающий обработку жирных кислот иодидом натрия. По аналогии с этим способом может быть получен и меченый хлорофилл. Экспериментально установлено, что при использовании данного способа хлорофилл подвергается достаточно жесткому воздействию иодида, в результате чего происходит образование побочных продуктов и почти полное превращение хлорофилла в феофитин. Известен также способ получения радиоактивных нуклеотидов [2] предусматривающий инкубирование (5,6 3Н) цитидинтрифосфата с клетками E.coli. По аналогии с этим способом меченый хлорофилл не может быть получен в результате его биосинтеза в присутствии радиоактивных предшественников, так как в клетках E.coli отсутствует хлорофилл. Известен также способ введения радиоактивной метки в хлорофилл биосинтетическим путем в результате выращивания зеленых растений в присутствии С14О2 [3] По своей сущности способ является наиболее близким к предлагаемому изобретению и выбран в качестве прототипа. Однако указанный способ не обеспечивает необходимой эффективности включения С14 в структуру хлорофилла. Это обусловлено тем, что в процессе выращивания растений происходит преимущественное включение С14 в продукты фотосинтеза крахмал, сахарозу, органические кислоты и др. а не в структуру хлорофиллов. Это приводит к уменьшению удельной радиоактивности хлорофилла, которая может лишь достигать величины 0,1-0,4 Ки/моль. Такое низкое качество меченого препарата затрудняет его использование на практике. Предлагаемый способ предназначен для получения хлорофилла, меченного радиоактивным изотопом С14 с удельной активностью 5-10 Ки/моль. Осуществление изобретения позволяет реализовать новый технический результат, которым является достижение величины удельной радиоактивности 5-10 Ки/моль. Сущность изобретения выражается в совокупности следующих существенных признаков. Способ получения хлорофилла, меченного радиоактивным изотопом С14, предусматривает его выделение из выращиваемого растительного объекта в присутствии радиоактивного элемента, при этом в качестве растительного объекта используют зеленные культуры, при этом выращивание осуществляют на питательной среде, содержащей следующие компоненты, мг/дм3 дистиллированной воды: Глицин, меченный в положении 1 0,05.0,1 Глицин, меченный в положении 2 0,05.0,1 Магния хлорид 10.25 Натрия хлорид 0,5.1,5 Калия хлорид 3.9 Меланин 10.20 Кислый фосфат калия 30.40 с последующим выделением и очисткой хлорофилла известными способами. Кроме того, в качестве зеленных культур используют шпинат или щавель, или амарант, или салат, или петрушку, или укроп. Отличительными признаками являются: использование в качестве растительных объектов зеленных культур (щавеля или шпината, или амаранта, или салата, или петрушки, или укропа); выращивание растительных объектов на среде, содержащей следующие компоненты, мг/дм3 воды: Глицин, меченный в положении 1 0,05.0,1 Глицин, меченный в положении 2 0,05.0,1 Магния хлорид 10.25 Натрия хлорид 0,5.1,5 Калия хлорид 3.9 Меланин 10.20 Кислый фосфат калия 30.40 Неизвестно использование культуры щавеля или шпината, или амаранта, или салата, или петрушки, или укропа для получения радиоактивного хлорофилла. Неизвестно также выращивание указанных растений на среде, содержащей компоненты, мг/дм3 воды: Глицин, меченный в положении 1 0,05.0,1 Глицин, меченный в положении 2 0,05.0,1 Магния хлорид 10.25 Натрия хлорид 0,5.1,5 Калия хлорид 3.9 Меланин 10.20 Кислый фосфат калия 30.40 Достижение технического результата в данном изобретении осуществляется за счет того, что в качестве растительных объектов используют культуры листовых овощных растений, которые выращивают на среде, содержащей следующие компоненты, мг/дм3 воды: Глицин, меченный в положении 1 0,05.0,1 Глицин, меченный в положении 2 0,05.0,1 Хлорид магния 10.25 Хлорид натрия 0,5.1,5 Хлорид калия 3.9 Меланин 10.20 Кислый фосфат калия 30.40 На чертеже приведена кривая изменения активности хлорофилла в зависимости от кратности циклов очистки. Способ осуществляется следующим образом. Семена зеленных культур высаживают на искусственную почву (песок), которую смачивают питательной средой, содержащей вышеперечисленные компоненты. Семена проращивают в условиях искусственной инсоляции (300 Вт/м2) в течение 30-42 дней. Зеленную биомассу (листья) затем снимают, измельчают и заливают смесью этилового спирта с ацетоном при соотношении объемов 1:3 и массы листьев и экстрагента 1:10. Экстракцию биомассы проводят в течение 15.24 ч при температуре 0оС. После этого экстракт упаривают досуха на ротационном испарителе и затем сухой остаток снова растворяют в спирте. Процедуру повторяют 5-15 раз. Перед каждым упариванием отбирают аликвоту экстракта и определяют величину радиоактивности. По полученным данным строят зависимость изменения радиоактивности экстракта от количества циклов растворение-упаривание. При достижении стационарного уровня радиоактивности экстракт упаривают досуха, после чего его растворяют в 100-1000 мкл спирта и наносят на стартовую позицию тонкослойной хроматографической пластины. Пластину хроматографируют в системе растворителей гептан метилэтилкетон (5:3). Выделяют зону хлорофилла, который затем элюируют с пластины спиртом, и получают раствор готового препарата. Готовый препарат подвергают физико-химическому анализу, в результате которого определяют подлинность препарата, его радиохимическую чистоту и удельную радиоактивность. П р и м е р 1. Получали меченый хлорофилл по С14 для проведения фармакокинетических исследований. Для этого посадили 200 семян шпината на предварительно промытый песок, который смочили питательной средой, содержащей следующие компоненты, мг/дм3 в воде: Глицин, меченный в положении 1 0,05 Глицин, меченный в положении 2 0,05 Магния хлорид 10 Натрия хлорид 0,5 Калия хлорид 3 Меланин 10 Кислый фосфат калия 30 Через 30 дней зеленную массу сняли. Отобрали 100 г зеленной массы, которую измельчили ножницами и залили 1000 г экстрагента (спирт-ацетон 1:3) и поставили на 15 ч в холодильник. После этого экстракт отделили от листьев, отобрали аликвоту 0,1 мл, которую перенесли в сцинцилляционную кювету и измерили ее радиоактивность, которая составила 10 кБк. Затем раствор упарили досуха и снова растворили в 1000 г спирта. Процедуру повторили 8 раз. Перед каждым упариванием отбирали 0,1 мл раствора и измеряли его радиоактивность. По полученным данным строили график (чертеж), из которого определили, что для выхода на стационарный уровень достаточно провести 8 циклов растворение упаривание. После завершения 8 циклов растворения упаривания сухой остаток растворили в 0,5 мл спирта. Полученный раствор нанесли на тонкослойную пластину "Силуфол", которую хроматографировали в системе растворителей гептан метилэтилкетон (5:3). Зону хлорофилла элюировали с пластины спиртом. В результате получили 1 мл готового раствора хлорофилла, меченного С14. Радиохимическая чистота препарата составила 95% Удельная радиоактивность препарата составила 5,6 Ки/моль. Параллельно проводили получение С14-хлорофилла по прототипу. Данные приведены в таблице. П р и м е р ы 2-9 поясняют осуществление способа аналогично примеру 1 на различных зеленных культурах при различных концентрациях питательного раствора. Результаты исследований приведены в таблице. П р и м е р 10 поясняет получение хлорофилла, меченного радиоактивным изотопом С14, по прототипу. Результаты приведены в таблице. Как видно из таблицы, предлагаемый способ позволяет достичь нового технического результата, заключающегося в повышении по сравнению с прототипом удельной радиоактивности в 7-29 раз.ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ХЛОРОФИЛЛА, МЕЧЕННОГО РАДИОАКТИВНЫМ ИЗОТОПОМ C14, включающий выращивание растительного объекта в присутствии радиоактивного элемента, выделение и очистку целевого продукта, отличающийся тем, что в качестве растительного объекта используют зеленые культуры и выращивание осуществляют на питательной среде следующего состава, мг/л: Глицин, меченный в положении 1 0,05 0,1 Глицин, меченный в положении 2 0,05 0,1 Магния хлорид 10,0 25,0 Натрия хлорид 0,5 1,5 Калия хлорид 3,0 9,0 Меланин 10,0 20,0 Кислый фосфат калия 30,0 40,0 Вода дистиллированная До 1 л 2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве зеленных культур используют шпинат, щавель, амарант, салат, петрушку или укроп.Популярные патенты: 2415529 Нижняя тяга для навески трактора ... 54 прилегают к первой стенке 50 полого пространства 34. Прямые области 72 прилегают к фронтальной стенке 56, в то время как искривленные области 70 прилегают ко второй стенке 52 полого пространства 34. Показанный на фиг.6 и 7 стопорный элемент 38 содержит внешнюю оснащенную выемкой область 74, в которую входят изогнутые области 70 пружины 40, и центральное отверстие 76 со стенкой 80, к которой прилегают плечи 66 и соединительная область 68 пружины 40. Обе симметричные части пружины 40 согласованы с обеими сторонами стопорного элемента 38. Поскольку пружина 40 имеет такие размеры, что первые плечи 54 и изогнутые области 70 соответственно под воздействием предварительного ... 2453091 Способ обработки почвы ... При этом разница в величине плотности соседних участков должна сохраняться (0,2-0,3 г/см3).Формирование участков с разной плотностью необходимо производить одновременно с посевом для исключения переуплотнения почвы и исключения несвоевременности посева.Поставленная цель достигается благодаря тому, что, во-первых, урожайность растений, высаженных вблизи границы раздела участков с разной плотностью, при всех погодных условиях выше, чем урожайность растений, выращиваемых на однородном участке оптимальной плотности.Во-вторых, каждая плотность почвы обеспечивает максимальную урожайность (при прочих равных условиях), при характерном только для нее режиме увлажнения. То ... 2262826 Способ сташевского и.и. переработки навоза личинками синантропных мух и устройство для его осуществления ... загрузки исходного и выгрузки переработанного навоза, курятники с насестами и свинарники с выгульными дворами и кормушками, которые связаны с курятниками цепочно-скребковым транспортером для удаления помета из-под насестов курятников и перемещения его для кормления свиней. Выгульные дворы птичников имеют расположенные на разных уровнях подпольные каналы самотечной системы удаления навоза с шлюзами, решетчатыми и мостовыми перекрытиями и снабжены водородными трубами и шлангом для гидравлического смыва навоза. Мостовые перекрытия каналов расположены через равные отрезки длины. Подпольные каналы системы удаления навоза через подпольные каналы карантинной зоны сообщены с расположенными ... 2242875 Энергосберегающий способ зимовки и содержания пчел на воле в однокорпусном улье усова ... представляющий собой действующую модель термоса, в котором роль клапана-пробки выполняет клуб пчел, после крайней рамки установлен межрамочный вкладыш и диафрагма, а в образованном воздушном промежутке между диафрагмой и стенкой проложена манжетная резиновая трубка по внутреннему контуру корпуса для создания неподвижной воздушной прослойки-теплоизолятора между корпусными стенками и рамочным гнездовым пространством с межрамочными вкладышами, причем все гнездовое пространство находится под теплоизолирующей оболочкой из неподвижного воздуха, заключенного между рамочным объемом, стенками и крышей улья, в нижней части улья у задней стенки имеются донные отверстия для удаления из ... 2440712 Автоматизированная система для хранения в поле, возможности оперативного контроля и выгрузки убранных продуктов урожая из уборочной машины ... выполненного непрерывным гибкого контейнера после прикрепления средства для возможности оперативного контроля.10. Способ по п.9, дополнительно включающий открытие выполненного непрерывным гибкого контейнера, вызывающее высвобождение убранного продукта по меньшей мере в одно из транспортных средств для транспортировки или устройств для хранения после сбора выполненного непрерывным гибкого контейнера. 11. Способ по п.6, в котором выполненный непрерывным гибкий контейнер является непрерывным листом пластмассового материала. 12. Способ по п.6, в котором средством для возможности оперативного контроля является по меньшей мере одно из штрихового кода или радиометки (RFID).13. Способ ... |
Еще из этого раздела: 2437864 Способ микробиологической переработки птичьего помета 2027341 Бункер для сыпучих материалов 2184433 Рабочий орган щелевателя 2040900 Фунгицидное средство 2427999 Способ повышения плодородия мерзлотных засоленных почв в условиях криолитзоны 2061349 Рама универсальной навесной сельскохозяйственной машины 2196418 Устройство для укладки, сушки и хранения прессованного сена и соломы в рулонах 2182765 Имитатор звуков рыб 2195808 Способ хранения корнеплодов, картофеля и капусты 2015654 Теплица для подземной выработки |
Изобретения в сельском хозяйстве
Обработка почвы в сельском и лесном хозяйствах
Посадка, посев, удобрение
Уборка урожая, жатва
Обработка и хранение продуктов полеводства и садоводства
Садоводство, разведение овощей, цветов, риса, фруктов, винограда, лесное хозяйство
Новые виды растений или способы их выращивания
Производство молочных продуктов
Животноводство, разведение и содержание птицы, рыбы, насекомых, рыбоводство, рыболовство
Поимка, отлов или отпугивание животных
Консервирование туш животных, или растений или их частей
Биоцидная, репеллентная, аттрактантная или регулирующая рост растений активность химических соединений или препаратов
Хлебопекарные печи, машины и прочее оборудование для хлебопечения
Машины или оборудование для приготовления или обработки теста
Обработка муки или теста для выпечки, способы выпечки, мучные изделия
|
|
||