Способ отбора трансформантов томатаПатент на изобретение №: 2037289 Автор: Седов Геннадий Иванович[MD], Чесноков Юрий Валентинович[MD] Патентообладатель: Институт генетики АН РМ (MD) Дата публикации: 19 Июня, 1995 Адрес для переписки: подача заявки26.06.1992 публикация патента19.06.1995 Изображения   Использование: биотехнология, сельское хозяйство, селекционно-генетические исследования, овощеводство. Сущность изобретения: трансформанты томата отбирают при выращивании зародышей размером 2,0 - 2,5 мм на канамицинсодержащей среде HLH. 4 табл. , , ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУИзобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к селекции растений, и может быть использовано для селекции в условиях in vitro трансформантов, полученных при генетической трансформации растений посредством переноса плазмидной ДНК в растительную зиготу с помощью прорастающей пыльцы. Трансфекция чужеродных генов в геном высших растений проводится на уровне целого растения, его органов, отдельных тканей, клеток (соматических и генеративных) и протопластов методами сокультивирования с агробактериями или прямым переносом ДНК в растительные клетки. Известен способ отбора трансформантов, основанный на появлении в результате трансформации у рецессивного генотипа семян с доминантными признаками [1] Известен также способ отбора трансформантов, в основе которого появление морфологически аномальных растений или опухолей, а также синтез специфических для агробактерий аминокислот [2] Однако эти способы отбора не позволяют использовать селективные среды, что делает процесс отбора длительным и трудоемким. Известен способ отбора трансформантов, заключающийся в том, что семена высевают на разбавленную вдвое питательную среду Мурасиге-Скуга, содержащую селективный агент антибиотик канамицин [4] Однако этот способ не позволяет проводить отбор на ранних этапах развития растения зародышах. Кроме того, идентификация трансформантов согласно данному способу возможна лишь тогда, когда разовьются семядольные листья и произойдет утрата хлорофилла под действием канамицина, что требует значительных затрат времени. К тому же, необходимость дезинфекации семян перед посадкой на селективную среду снижает их всхожесть, что влияет на эффективность оценки трансформантов и создает возможность появления артефактов. Задача изобретения ускорить процесс получения трансформантов и повысить эффективность отбора. Поставленная задача решается следующим образом: посев эксплантата осуществляют на питательную среду, содержащую селективный агент канамицин, при этом в качестве эксплантата используют зародыши размером 2,0-2,5 мм, а посев осуществляют на питательную среду HLH [3] Способ осуществляют следующим образом. Цветки томата кастрируют и опыляют пыльцой, предварительно обработанной плазмидой, несущей в качестве селектирующего маркера ген устойчивости к антибиотику канамицину. Спустя 18-20 дней по достижению зародышами размера не менее 2,0-2,5 мм, что существенно для их дальнейшего развития нормального прорастания и развития в условиях in vitro, плоды срывают, дезинфицируют, извлекают зародыши и высевают на среду HLH, включающую канамицин в дозе 200 мг/л. Через 7 дней по отсутствию артефактов развития выявляют трансформированные зародыши. П р и м е р. Исследования проводят на томатах сорта Факел. Цветки кастрируют и опыляют, как указано выше. Через 20 дней половину завязавшихся на растении плодов срывают, дезинфицируют, извлекают 2,0-2,5 мм зародыши и часть их высевают на селективную среду HLH, в состав которой вводят канамицин в количестве 200 мг/л. Данные взаимосвязи размеров зародышей с процентом их прорастания представлены в табл. 1. Вторую часть зародышей высевают на среду Мурасиге-Скуга, дополненную канамицином. Обоснование выбора среды HLH представлено в табл. 2. Спустя семь дней по нормальному прорастанию и развитию зародышей, т.е. по отсутствию некрозов либо других аномалий развития на селективной среде HLH, выявляют среди них трансформанты. На селективной среде Мурасиге-Скуга зародыши не прорастают и не развиваются. Для получения сравнительных данных вторую половину плодов сохраняют на растении до созревания семян, которое завершается на 42-43 день с момента опыления. Собранные семена дезинфицируют и высевают на селективную HLH среду с канамицином и на селективную среду Мурасиге-Скуга, также содержащую канамицин. Через 10-14 дней выявляют трансформанты по сохранению зеленой окраски семядольных листьев. Полученные данные представлены в табл. 3. Основные отличия предлагаемого способа от прототипа представлены в табл. 4. Из данных, представленных в табл. 1, видно, что максимальное прорастание зародышей наблюдается при размере зародыша не менее 2,0-2,5 мм, т.е. показатель размер зародыша является более точным и более информативным, чем возраст зародыша, поскольку при этом не наблюдается сортовой специфичности. Использование зародышей, больших чем 2,0-2,5 мм, т.е. более позднего возраста развития, не имеет смысла, поскольку задача способа ускорение процесса получения трансформантов. Из данных табл. 2 видно, что среда HLH выбрана с учетом того, что содержит повышенное количество солей, витаминов и сахарозы, т.е. как наиболее оптимальная среда для нормального (без отклонений) прорастания и развития зародышей. Из данных, представленных в табл. 3, видно, что использование питательной среды HLH с добавкой канамицина позволяет осуществить нормальное развитие только трансформированным, т. е. устойчивым к селектирующему агенту канамицину, зародышам. Сопоставительный анализ заявленного решения с прототипом показывает, что заявленный способ отличается от известного тем, что в качестве эксплантата используют зародыши определенного размера 2,0-2,5 мм, а посадку эксплантата осуществляют на питательную среду HLH. Данные существенные отличия предлагаемого способа отбора трансформантов томата позволяют обеспечить по сравнению с известным следующие преимущества: создается возможность выявить трансформанты на более ранних этапах развития растения (зародышах), что сокращает время оценки и ускоряет селекционный процесс; зародыши по сравнению с семенами более чувствительны к действию селективного агента; исключается возможность токсичного действия дезинфицирующих веществ на трансформанты, т.к. стерилизуют целый плод, стенки которого надежно защищают зародыши; использование культуры изолированных зародышей позволяет полностью исследовать завязавшиеся зародыши (включая те, что не смогли по каким-либо причинам полностью созреть) в плодах и дает возможность тем самым увеличить выход трансформантов.ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯСПОСОБ ОТБОРА ТРАНСФОРМАНТОВ ТОМАТА, включающий выращивание эксплантов на селективной питательной среде в присутствии канамицина, отличающийся тем, что в качестве эксплантов используют зародыши размером 2,0 2,5 мм, а в качестве питательной среды среду HLH.Популярные патенты: 2404898 Устройство на воздушной подушке для разбрасывателей органоминеральных удобрений ... ТОМУ 37.По габаритным и другим конструкционным параметрам устройство обеспечивает транспортабельность тягачом (трактором) по сельской дорожной сети.Устройство работает следующим образом.Устройство дышлом 4 навешивают на гидрокрюк трактора и транспортируют к обрабатываемому полю. Туда же приезжает агрегат в составе трактора и полуприцепного разбрасывателя жидких 36 или твердых 37 органоминеральных удобрений. Снимаются с гидрокрюка трактора петли 5, и дышло 4 разводится. Блокировочные тросы 6 расцепляют. Запускается станция гидропривода 11. Включают гидромоторы вентиляторов 10. Давление воздуха в камерах устанавливают на режим разворачивания устройства. Цилиндром 16 портала 3 ... 2092004 Композиционный состав для обработки растений и их органов ... а в качестве целевых добавок он содержит стеарат щелочного металла, натриевую соль гуминовой кислоты, жидкие макроэлементы, включающие жидкие комплексные удобрения и/или жидкие азотные удобрения, а также микроэлементы, включающие сульфат двухвалентного железа и/или сульфат меди, стимулятор роста 1-этоксисилатран и средство защиты растений при следующем соотношении компонентов, мас. Карбамидоформальдегидная смола /по сухому остатку/ 0,1 1,0 Стеарат щелочного металла 0,001 0,05 Натриевая соль гуминовой кислоты 0,005 0,15 Жидкие макроэлементы 1,0 45,0 Микроэлементы 0,1 2,0 1-этоксисилатран 0,001 0,01 Средство защиты растений 0,1 20,0 Вода Остальное В качестве наилучших вариантов ... 2127511 Композиция пленочного полимерного материала для покрытия теплиц и оптический активатор для полимерного материала (варианты) ... ... 2206985 Упряжь для собак ... 6 элементах и расположены равномерно и пропорционально по всей площади шлейки. Количество карманов 20, которые подлежат загрузке, регулируются в зависимости от того, какие группы мышц подлежат развитию. В качестве груза используется: металл, мешочки с песком или дробью и т. п. Карманы 20 позволяют использовать груз разного веса, делая шлейку универсальной как для малоподвижных собак, так и более подготовленных к нагрузкам. Для более разновидной подготовки собаки и определенных групп мышц возможно дополнительное использование карманов 20 на ошейнике 21, что увеличивает разновидность грузовых комбинаций для животного. Таким образом, предлагаемая упряжь является универсальной, ... 2010519 Способ биологической борьбы с вредителями растений ... N 3, 1989, с. 17. Формула изобретения 1. СПОСОБ БИОЛОГИЧЕСКОЙ БОРЬБЫ С ВРЕДИТЕЛЯМИ РАСТЕНИЙ, заключающийся в введении в пищевой рацион птиц в период их развития веществ, обладающих запаховыми и вкусовыми качествами, соответствующими конкретному виду вредителей, при этом количество вводимого вещества постепенно увеличивают во времени и перед выпуском птиц для уничтожения вредителей уменьшают количество естественного корма, отличающийся тем, что, с целью повышения производительности путем увеличения количества особей за счет использования различных видов птиц, первоначально производят принудительное уменьшение количества естественного корма в местах их обитания и одновременно вводят ... |
Еще из этого раздела: 2114555 Способ электродиагностики вымени крупного рогатого скота и устройство для его осуществления 2446688 Композиция для получения растительного организма с улучшенным содержанием сахара и ее применение 2005344 Способ облучения живых организмов или растений 2495561 Машина лесозаготовительная 2112337 Рабочий орган культиватора 2262220 Способ возделывания кормовых культур в условиях астраханской области (варианты) 2444885 Посевной агрегат 2197796 Рабочий орган ручного почвообрабатывающего орудия 2469534 Перезаряжаемая электронная ловушка для животных с перегородкой, механическим переключателем в конфигурации с множеством поражающих пластин 2189718 Пневматический высевающий аппарат |
Изобретения в сельском хозяйстве
Обработка почвы в сельском и лесном хозяйствах
Посадка, посев, удобрение
Уборка урожая, жатва
Обработка и хранение продуктов полеводства и садоводства
Садоводство, разведение овощей, цветов, риса, фруктов, винограда, лесное хозяйство
Новые виды растений или способы их выращивания
Производство молочных продуктов
Животноводство, разведение и содержание птицы, рыбы, насекомых, рыбоводство, рыболовство
Поимка, отлов или отпугивание животных
Консервирование туш животных, или растений или их частей
Биоцидная, репеллентная, аттрактантная или регулирующая рост растений активность химических соединений или препаратов
Хлебопекарные печи, машины и прочее оборудование для хлебопечения
Машины или оборудование для приготовления или обработки теста
Обработка муки или теста для выпечки, способы выпечки, мучные изделия
|
|
||