Изобретения в сфере сельского хозяйства, животноводства, рыболовства

 
Изобретения в сельском хозяйстве Обработка почвы в сельском и лесном хозяйствах Посадка, посев, удобрение Уборка урожая, жатва Обработка и хранение продуктов полеводства и садоводства Садоводство, разведение овощей, цветов, риса, фруктов, винограда, лесное хозяйство Новые виды растений или способы их выращивания Производство молочных продуктов Животноводство, разведение и содержание птицы, рыбы, насекомых, рыбоводство, рыболовство Поимка, отлов или отпугивание животных Консервирование туш животных, или растений или их частей Биоцидная, репеллентная, аттрактантная или регулирующая рост растений активность химических соединений или препаратов Хлебопекарные печи, машины и прочее оборудование для хлебопечения Машины или оборудование для приготовления или обработки теста Обработка муки или теста для выпечки, способы выпечки, мучные изделия

Способ утилизации целлюлозосодержащих отходов

 
Международная патентная классификация:       A01K C05F

Патент на изобретение №:      2488997

Автор:      Стом Дэвард Иосифович (RU), Быбин Виктор Александрович (RU), Протасов Евгений Станиславович (RU)

Патентообладатель:      Общество с ограниченной ответственностью "Экотехнолог" (ООО "Экотехнолог") (RU)

Дата публикации:      10 Августа, 2013

Начало действия патента:      3 Февраля, 2012

Адрес для переписки:      664011, Иркутская обл., г.Иркутск, ул. Свердлова, 24, оф.45, ООО "Экотехнолог"

Изобретение относится к области биотехнологии, точнее к способу утилизации целлюлозосодержащих отходов. Способ утилизации целлюлозосодержащих отходов с помощью вермикультуры с дождевыми червями Eisenia fetida и культуры грибов Trichoderma viride предусматривает предварительную пероральную инокуляцию дождевых червей Eisenia fetida инсулиновым шприцем со спиленным острием иглы суспензией мицелия и спор целлюлозоразрушающего штамма недельной культуры грибов Trichoderma viride с содержанием в ней колониеобразующих единиц в количестве 103 КОЕ/мл в количестве 0,05 мл или суточное выдерживание червей в субстрате, пропитанном такой суспензией. Осуществление изобретения позволяет интенсифицировать утилизацию целлюлозосодержащих отходов путем получения популяции дождевых червей, обладающих повышенной целлюлазной активностью. 1 табл.

Изобретение относится к области биотехнологии, точнее к способу утилизации целлюлозосодержащих отходов.

Известны способы усиления интенсивности утилизации отходов в системе микроорганизмы-дождевые черви по сравнению с действием этих организмов по отдельности / Терещенко Н.Н. Эколого-микробиологические аспекты вермикультивирования / Н.Н. Терещенко. - Новосибирск: Наука, 2003. - 113 с.2. Stom D.I. Transformation of Oil in Soil by a Microbial Preparation and Earthworms / D.I.Stom, D.S. Potapov, A.E. Balayan, O.N. Matveeva // Eurasian Soil Science. - 2003. - Vol.36, No.3. - P.329-331/.

Известен способ получения бактеризованного удобрения / Патент РФ 2186049 C05F 11/08, C12N 1/20, 2002 г./, включающем гуминосодержащую основу из биогумуса и бактериальную добавку, обладающую фунгицидной активностью, выбранную из группы бактерий Bacillus subtilis, Bacillus cereus, Bacillus polymyxa с сохранением жизнеспособности в аммиачной среде с pH не менее 9, в количестве 7,5·10 4-7,5·108 кл/г гуминосодержащей основы.

Известен способ получения биоудобрения /Патент РФ 2125549 C05F 11/08, C05F 11/00, 1999 г./. Способ заключается в том, что субстрат на основе органических отходов сельского хозяйства и промышленности вермикомпостируют при помощи новой промышленной линии дождевых червей "Оболенский гибрид", полученных путем скрещивания "Красного калифорнийского гибрида" с российской популяцией дождевых червей Eisenia fetida при 16-24°C в течение 4-6 месяцев. От полученного биогумуса отделяют червей. Целесообразно после отделения червей биогумус выдержать в естественных условиях для дозревания. В биогумус после отделения червей или после дозревания вводят микроорганизмы, обладающие фунгицидной активностью. В качестве микроорганизмов вводят штамм Bacillus subtilis ИПМ-215 в концентрациях 1-109-1-1012 спор на 1 кг или культуру микофильного гриба Trichoderma viride Per sex S.F. Cray N 16 в концентрациях 1·104-1·108 колониеобразующих единиц на 1 кг. Биоудобрение, полученное предлагаемым способом, улучшает агрохимические показатели почвы, обладает фунгицидными и ростостимулирующими свойствами для растений.

Известен способ переработки органических отходов / Заявка РФ 2011107180 C05F 11/08, 2011 г./ с помощью вермикультуры с дождевыми червями Eisenia fetida, в исходный субстрат одновременно с червями вносят штамм Trichoderma asperellum МГ-97 (ВКПМ F-765) в виде спор и мицелия или препарат триходермин М в количестве 105-106 КОЕ/кг исходного субстрата.

Ближайшим аналогом является способ получения биогумуса /Патент РФ 2408563 C05F 11/08, 2011 г. / заключающийся в том, что субстрат на основе органических отходов сельского хозяйства вермикомпостируют при помощи промышленной линии дождевых червей "Красный калифорнийский гибрид" и вводят культуру микофильного целлюлозолитического гриба Trichoderma viride. В качестве субстрата применяют смесь торфа и подстилочного соломистого навоза крупного рогатого скота в соотношении 1:4 по массе и влажностью 75-80%, а культуру микофильного целлюлозолитического гриба Trichoderma viride вносят на разваренном зерне пшеницы в количестве 2% от веса субстрата за 2 недели до запуска червей в количестве 40 половозрелых особей (30-35 г) на 1 кг субстрата. Вермикомпостирование осуществляют в условиях стеллажной культуры в течение 3-4 недель при температуре +20+250°С.

Недостатком известного способа является недостаточная интенсификация целлюлозосодержащих отходов.

Задачей предлагаемого изобретения является интенсификация целлюлозосодержащих утилизации отходов, путем получение популяции дождевых червей, обладающих повышенной целлюлазной активностью.

Поставленная задача достигается тем, что в способ утилизации целлюлозосодер-жащих отходов, с помощью вермикультуры с дождевыми червями Eisenia fetida и культуры грибов Trichoderma viride, предварительно производят пероральную инокуляцию дождевых червей Eisenia fetida инсулиновым шприцем со спиленным острием иглы суспензией мицелия и спор целлюлозоразрушающего штамма недельной культуры грибов Trichoderma viride с содержанием в ней колониеобразующих единиц (КОЕ) в количестве 10 КОЕ/мл в количестве 0,05 мл, или суточное выдерживание червей в субстрате, пропитанном такой суспензией.

Красный калифорнийский гибрид. Относится к типу Annelida, классу Oligochaeta, семейству Lumbricidae, роду Eisenia Malm 1877 Emend Michaelsen, 1900, виду Е. fetida andrei Bouche, 1963. В лаборатории червей разводили в ящиках при температуре 20-25°C и влажности 80-85%. В опытах использовали половозрелых, имеющих поясковую зону - clitellum, червей длиной 8-10 см. Красный калифорнийский червь был выведен в 1959 году в результате селекционной работы в США. В отличие от своих диких родственников, которые дают только 4-6-кратное воспроизводство, Е. fetida способны давать в год более чем 500-кратное воспроизводство / Викторов А.Г. Eisenia fetida Andrei - модельный вид для вермикультур / А.Г. Викторов // Современные экологические проблемы провинции: материалы международного экологического форума, 4 июля 1995 г. - Курск: РАН, 1995. - С.44-45./.

Грибы рода Trichoderma имеют важное хозяйственное значение в связи с широким использованием многих видов для получения ферментов, биологически активных веществ и препаратов для защиты растений. С другой стороны, почти все виды Trichoderma образуют сильные токсины и могут быть причиной аллергии, а некоторые способны вызывать глубокие микозы у людей с подавленным иммунитетом. В связи с этим точная идентификация видов этого рода важна как для специалистов, занимающихся практическим использованием, так и для изучения распространения этих грибов в природе. Представление о таксономии этого важного рода значительно отстает от масштабов промышленного использования и взаимодействия Trichoderma с человеком. Успешная работа биотехнологов, фитопатологов и медицинского персонала с видами этого рода невозможна без их точной идентификации. Т. viride обладает целлюлозоразрушающими свойствами. Штамм был предоставлен д.б.н. Огарковым Б.Н. / Огарков Б.Н. Биотехнология на основе грибов / Б.Н. Огарков, Г.Р. Огаркова, Л.В. Самусенок // моногр. - Иркутск: Иркут. ун-т, 2005. - 234 с/.

Способ осуществляется следующим образом.

Приготавливают суспензию мицелия и спор целлюлозоразрушающего штамма недельной культуры грибов Trichoderma viride с содержанием в ней колониеобразующих единиц (КОЕ) в количестве 103 КОЕ/мл. Затем половозрелых особей дождевых червей, прошедших 3-х суточное голодание, инокулируют инсулиновым шприцем данной суспензией. Далее червей помещают на увлажненную фильтровальную бумагу в чашки Петри.

Создавалась контрольная группа червей. В течение 30 суток отбирали копролиты, описывали их внешний вид, микроструктуру, интенсивность питания подстилающим бумажным диском.

Для получения кишечного сока (жидкой фракции гомогената кишечника) дождевых червей пятьдесят олигохет с наполненным почвой кишечником замораживали при - 3°С в течение 2-х часов. Ледяных червей вскрывали, вынимали кишечник. Кишечники перетирали в ступке с добавлением мелкого речного песка. Полученную массу центрифугировали для отделения жидкой фракции. Преципитат тщательно перемешивали в 5 см цитратного буфера (ацетат натрия - лимонная кислота, pH 4,4) и вновь центрифугировали с той же целью. Первый супернатант смешивали со вторым и для осаждения белка 1 см полученной смеси разбавляли в 9 см3 воды и добавляли 3,9 г сульфата аммония. После тщательного перемешивания и полного растворения соли смесь помещали в холодильник на 60 минут. Далее смесь центрифугировали в течение 5 минут при 10 тысячах об/мин. После супернатант сливали, а осадок растворяли в 1 см3 цитратного буфера. У полученного раствора определяли количество белка биуретовой реакцией и определяли целлюлазную активность с динитросалициловым реактивом по методу Мендельс-Вебера / Mandels M. The production ofcellulases / M.Mandels, J.Weber // Advances in Chemistry. - 1969. 95. - P.391-414./

С помощью указанных методов измеряли и сравнивали целлюлазную активность кишечного сока червей, которым скармливали с почвенным субстратом Т. viride (2,5×10 3 КОЕ/г почвенного субстрата).

Пероральная инокуляция особей E.fetida суспензией 3-суточной культуры Т. viride (с титром ~103 КОЕ/см3) интенсифицировала переваривание целлюлозы. Бумажный диск, на котором червей содержали без корма в течение 40 суток, черви съедали в 2 раза быстрее, чем в контроле. В этом случае копролиты были более крупными, плотными, имели характерную веретеновидную форму, начинали темнеть через 2-3 суток, а спустя 15 дней чернели. В контроле копролиты имели более светлый цвет и округлую форму, что говорит об их слабой спрессованности (Фиг.1).

Культура микромицета Trichoderma viride сохранялась в кишечнике червей Е. fetida в течение 40 суток. На 1-е сутки инкубирования червей жизнеспособные споры Т. viride были выделены из переднего и среднего отделов кишечника (1,2±0,1×107 и 4,0±0,3×10 5 КОЕ/г, соответственно). В дальнейшем споры микромицета обнаруживались во всех отделах кишечника, преобладая в количественном отношении в заднем отделе кишечника. Следует отметить, что численность популяции Т. viride в кишечнике червя оставалась достаточно высокой на протяжении всего эксперимента. Так, на 40-е сутки инкубации червей количество спор микромицета в переднем отделе кишечника составляло 8,0±0,2×106, в среднем - 7,0±0,3×10 6, в заднем - 3,0±0,6×107 КОЕ/г (Фиг.2).

Известно, что Т. viride активный целлюлозолитик, в связи с этим определяли изменение целлюлазной активности червей Е. fetida, контаминированных спорами триходермы. После содержания олигохет в течение суток в почве, обработанной споровой суспензией Т. viride, целлюлазная активность червей увеличилась с 0,005±0,0008 до 0,07±0,01 МЕ/см (в 14 раз) и превышала таковую в контроле (см. таблицу).

Изменение целлюлазной активности Е. fetida после контаминации культурой Т. viride ПробаУдельная активность, МЕ/см3Примечание Жидкая фракция гомогената кишечника червей, инкубируемых в почве, обработанной споровой суспензией Т. viride (2,5×103 КОЕ/г почвенного субстрата) 0,07±0,01Из преципитата пробы выделялась культура Т. virideЖидкая фракция гомогената кишечника червей (контроль) 0,005±0,0008Кудьтура T. viride в преципитате отсутствовала

Предлагаемый способ позволит интенсифицировать утилизацию целлюлозе - и лигнинзосодержащих отходов и позволяет получить промышленную популяцию дождевых червей с повышенной целлюлазной ферментативной активностью.

Формула изобретения

Способ утилизации целлюлозосодержащих отходов с помощью вермикультуры с дождевыми червями Eisenia fetida и культуры грибов Trichoderma viride, отличающийся тем, что предварительно производят пероральную инокуляцию дождевых червей Eisenia fetida инсулиновым шприцом со спиленным острием иглы суспензией мицелия и спор целлюлозоразрушающего штамма недельной культуры грибов Trichoderma viride с содержанием в ней колониеобразующих единиц в количестве 103 КОЕ/мл в количестве 0,05 мл, или суточное выдерживание червей в субстрате, пропитанном такой суспензией.





Популярные патенты:

2099929 Почвенная растительная смесь для культурных газонов и способ их создания

... искусственный полив газона, выдерживая его под паром. Полив должен обеспечивать у спортивных газонов влажность верхнего слоя почвы на глубину от одного до трех сантиметров. Полив осуществляют мелкокапельными и равномерными, хорошо распыленными порциями воды, не допуская попадания на поверхность газона плотных и под высоким давлением струй воды, чтобы исключить размыв почвы. После выкладывания почвенной растительной смеси вся площадь газона огораживается с целью исключения возможности хождения по газону посторонних лиц или проезда транспортных средств. Через несколько дней после обильных поливов, почва даст достаточную усадку. В случае появления неровностей, их устраняют сразу ...


2452155 Лапа культиватора

... износостойкий слой выполнен на наружной поверхности каждого лезвия вдоль режущей кромки под углом 1-30° относительно края режущей кромки к носовой части, а носовая часть с наружной стороны имеет наплавленный слой. Толщина наплавленного слоя каждого лезвия составляет 0,04-0,85 от толщины крыла, а ширина наплавленного слоя составляет 2-30 от толщины наплавленного слоя. Толщина наплавленного слоя носовой части составляет 0,15-5,2 от толщины наплавленного слоя лезвий, а его ширина составляет 0,15-2,8 от ширины наплавленного слоя лезвий. Наплавленный слой лезвий и носовой части наряду с другими легирующими элементами содержит по массе 1,0-6,5% углерода и 2,5-45,0% хрома.На ...


2193304 Захват лесозаготовительной машины

... и сучкорежущих средств, может быть контролируемым, например в случае, когда силовой привод реализован как гидравлический цилиндр, путем ограничения давления гидравлической жидкости, подаваемой к силовому приводу, подходящими ограничительными устройствами. Также возможно регулировать сжимающее усилие так, что пружина вращения будет иметь некоторую начальную подкрутку, составляющую часть полного закручивания пружины вращения. Следует иметь в виду, что пружина вращения может быть упругой в обоих направлениях. Кроме этого, пружина вращения может быть закреплена на обоих концах пары качания, перемещаемой единым приводом 6, при этом достаточно снабдить пружиной вращения только одну ...


2157603 Способ послепосевного прикатывания озимых культур и каток для его осуществления

... озимых культур, в частности пшениц. Указанный агротехнический результат при осуществлении группы изобретений по объекту - способу достигается тем, что известный способ поверхностной обработки почвы поля озимой пшеницы включает выравнивание с одновременным уплотнением почвы в верхнем горизонте катками. Этот достаточно известный агроприем приводит к восстановлению капиллярной системы почвы, благодаря чему лучше подтягивается влага к семенам, улучшая их прорастание, кроме того, исключается возможность последующего попадания посторонних комочков почвы в режущий аппарат косилок. В предложенном способе одновременно с выравниванием и уплотнением почвы формируют волновой рельеф поверхности ...


2086081 Рабочий орган культиватора

... предусмотрены преимущественно треугольные вырезы, являющиеся продолжением вырезов на горизонтальных сторонах профиля и снабженные пазом, расположенным на вершине треугольника и одновременно на оси симметрии профиля. 5. Рабочий орган по пп.1 4, отличающийся тем, что [-образный профиль соединен со стойкой посредством резьбового элемента и стержня с головками по концам, взаимодействующими с пазами на вертикальной стороне профиля. 6. Рабочий орган по п.1 или 2, отличающийся тем, что вертикальная сторона [-образного профиля выполнена в виде двух геометрически подобных трапеций, обращенных друг к другу короткими сторонами, параллельными горизонтальным сторонам профиля. 7. Рабочий орган ...


Еще из этого раздела:

2434381 Технологическая линия для приготовления и раздачи влажных кормов

2050341 Устройство для переработки органического субстрата в биогумус

2238970 Штамм mycelia sterilia лх-1-продуцент комплекса биологически активных веществ, обладающих рострегуляторными свойствами

2123784 Сетное каскадное устройство для промысла поверхностных объектов лова

2145478 Гранулированное либо пеллетированное средство для защиты растений, способ его получения и способ борьбы с грибами

2169462 Улей (варианты), способ его сборки и способ круглогодичного содержания в нем пчел

2114555 Способ электродиагностики вымени крупного рогатого скота и устройство для его осуществления

2005344 Способ облучения живых организмов или растений

2492623 Портативный электроинструмент с управлением спусковым механизмом

2400963 Передвижной перегрузчик для зерна сельскохозяйственных культур