Изобретения в сфере сельского хозяйства, животноводства, рыболовства

 
Изобретения в сельском хозяйстве Обработка почвы в сельском и лесном хозяйствах Посадка, посев, удобрение Уборка урожая, жатва Обработка и хранение продуктов полеводства и садоводства Садоводство, разведение овощей, цветов, риса, фруктов, винограда, лесное хозяйство Новые виды растений или способы их выращивания Производство молочных продуктов Животноводство, разведение и содержание птицы, рыбы, насекомых, рыбоводство, рыболовство Поимка, отлов или отпугивание животных Консервирование туш животных, или растений или их частей Биоцидная, репеллентная, аттрактантная или регулирующая рост растений активность химических соединений или препаратов Хлебопекарные печи, машины и прочее оборудование для хлебопечения Машины или оборудование для приготовления или обработки теста Обработка муки или теста для выпечки, способы выпечки, мучные изделия

Способ получения водорастворимого бактерицидного препарата

 
Международная патентная классификация:       A01N A61K B02B

Патент на изобретение №:      2502259

Автор:      Голубева Ольга Юрьевна (RU), Шамова Ольга Валерьевна (RU), Терновая Наталия Юрьевна (RU), Орлов Дмитрий Сергеевич (RU), Кокряков Владимир Николаевич (RU), Шевченко Владимир Ярославович (RU), Корнева Елена Андреевна (RU)

Патентообладатель:      Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Ордена Трудового Красного Знамени Институт химии силикатов им. И.В. Гребенщикова Российской академии наук (ИХС РАН) (RU), Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины "Северо-Западного отделения Российской академии медицинских наук (ФГБУ "НИИЭМ" СЗО РАМН) (RU)

Дата публикации:      27 Декабря, 2013

Начало действия патента:      7 Июня, 2012

Адрес для переписки:      197227, Санкт-Петербург, а/я 405, С.А. Воропаю

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к бактерицидным препаратам с лизоцимной активностью. Смешивают водные растворы нитрата серебра и лизоцима в заданном соотношении с получением восстановленного металлического серебра. Восстановленное металлическое серебро стабилизируют добавлением водного раствора желатина в заданном соотношении. Полученную смесь подергают УФ-облучению при непрерывном перемешивании в течение 25-30 минут, в диапазоне коротковолнового излучения 254 нм. В течение 25-30 минут в диапазоне длинноволнового излучения 365 нм. В течение 55-60 минут в диапазоне коротковолнового излучения 254 нм. Проводят диализ обработанной смеси в течение 24-30 часов при непрерывном перемешивании, с использованием бидистиллированной воды с последующей сушкой под вакуумом. Изобретение позволяет получить нетоксичный и стабильный в растворе хлорида натрия бактерицидный препарат. 2 табл. 3 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к бактерицидным препаратам с лизоцимной активностью, содержащим ферменты животного происхождения, и к способу их получения. Препарат может быть использован в медицине и ветеринарии в качестве аппликаций наружного применения, при лечении гнойно-септических осложнений ран, язв, пролежней, ожогов, бактериальных поражений слизистой глаз и полости рта, а также грибковых заболеваний. Его важным свойством является проявление активности как в отношении грамположительных, так и грамотрицательных микроорганизмов.

Для оценки новизны и технического уровня изобретения рассмотрим ряд известных заявителю технических средств аналогичного назначения, характеризуемых совокупностью сходных с изобретением признаков, известных из сведений, ставших общедоступными до даты приоритета изобретения.

Использование лизоцима яичного белка в качестве бактериолитического фермента известно в медицине, см. Подборнов В.М. Сравнительная характеристика лизоцимов разного происхождения. - Антибиотики и химиотерапия, 1990, т.35, N 8, с 22-25.

К недостаткам использования лизоцима можно отнести узкий спектр его действия, так как он не оказывает литического действия на целый ряд микроорганизмов, в том числе и патогенных. В частности, он действует только против грамположительных бактерий.

Кроме того, антибиотическая активность природных антимикробных пептидов и белков, в том числе и лизоцима, в средах с повышенной концентрацией хлорида натрия снижается, что особенно неблагоприятно при использовании препаратов, в состав которых входят подобные полипептиды, при поражениях кожи, так как на поверхности кожи концентрация хлорида натрия на порядок превышает таковую в плазме крови.

Известен препарат для профилактики и лечения инфекционных болезней животных и человека (патент РФ 2169573), включающий лизоцим яичного белка и микробный лизоцим при соотношении ингредиентов 1:1-2 по активности.

В известном препарате в качестве исходного продукта использован лизоцим яичного белка. Недостаток лизоцима яичного белка как исходного продукта для изготовления препарата для профилактики и лечения инфекционных болезней заключается в том, что его активность проявляется в отношении инфекций, вызываемых грамположительными бактериями. Кроме того, он не может быть использован для лечения гнойно-септических осложнений ран, язв, пролежней, ожогов, бактериальных поражений слизистой глаз и полости рта, а также грибковых заболеваний и инфекций, вызванных грамотрицательными бактериями.

Известен способ получения водорастворимой бактерицидной композиции (повиаргола), содержащей высокодисперсное металлическое серебро, стабилизированное защитным полимером. Композиция получена путем восстановления ионного серебра в водных растворах при нагревании с последующей сушкой. Восстановление ионного серебра ведут в атмосфере инертного газа при взаимодействии 0,025-29,73 мас. раствора нитрата серебра с 5,0-38,6 мас. водным раствором этилового спирта, содержащим 0,065-11,0 мас. поли-N-винилпирролидона-2, при этом реакцию проводят в темноте с нагреванием до 65-75°С (патент РФ 2088234).

Этот способ выбран в качестве прототипа заявляемого технического решения. Недостатком прототипа является то, что он не обеспечивает полное восстановление ионного серебра. Наличие ионного серебра в полученной водорастворимой бактерицидной композиции определяет токсичность полученного препарата и нестабильность в растворе хлорида натрия.

На практике стабильность антимикробных препаратов в присутствии хлорида натрия является необходимым условием их эффективности, поскольку в организме человека хлорид натрия присутствует в широком диапазоне концентраций в различных биологических жидкостях. Стабильность серебросодержащих препаратов при контакте с биологическими жидкостями также невысока. При их практическом применении в присутствии хлорида натрия происходит образование осадка, что не позволяет этим препаратам равномерно распределяться в жидкостях и тканях организма, что снижает их эффективность.

Задачей изобретения является создание способа получения нетоксичного, стабильного в растворе хлорида натрия бактерицидного препарата с расширенным спектром действия за счет обеспечения его активности по отношению к грамотрицательным бактериям, обеспечивающим повышение эффективности лечения гнойно-септических осложнений ран, язв, пролежней, ожогов, бактериальных поражений слизистой глаз и полости рта.

Сущность изобретения как технического решения выражается в следующей совокупности существенных признаков, достаточной для достижения указанного выше обеспечиваемого изобретением технического результата.

Способ получения водорастворимого бактерицидного препарата, включающий смешение исходных компонентов, с последующей стабилизацией металлического серебра полимером путем восстановления ионного серебра в водных растворах с последующей сушкой, характеризуется тем, что восстановление ионного серебра в водном растворе ведут при взаимодействии нитрата серебра, лизоцима и желатина при следующем соотношении компонентов, мас.%: лизоцим 0,043-0,045, нитрат серебра - 0,073-0,085, желатин 0,071-0,080, вода - остальное, после чего полученную смесь подвергают чередующемуся воздействию УФ-облучения, затем проводят диализ и сушку под вакуумом.

Заявленное техническое решение характеризуется также наличием ряда факультативных признаков, а именно:

- полученную смесь исходных компонентов подвергают УФ-облучению при непрерывном перемешивании в течение 25-30 минут, в диапазоне коротковолнового излучения 254 нм, затем в течение 25-30 минут в диапазоне длинноволнового излучения 365 нм и 55-60 минут в диапазоне коротковолнового излучения 254 нм, а диализ обработанной смеси проводят в течение 24-30 часов при непрерывном перемешивании.

Наличие наночастиц серебра позволяет усилить бактерицидную способность лизоцима и получить водорастворимый бактерицидный препарат, обладающий активностью по отношению к грамотрицательным бактериям. Введение желатина позволяет стабилизировать серебро в форме наночастиц и улучшить активность получаемого препарата в растворах NaCl.

В таблице 1 приведены примеры составов исходного продукта для получения водорастворимого бактерицидного препарата.

Таблица 1 Название компонентовСоставы исходного продукта для получения препарата, мас.% 12 345 лизоцим0.043 0.0440.043 0.0420.046 желатин0.0710.073 0.0740.071 0.071нитрат серебра 0.0730.0790.08 0.0730.073 вода99.813 99.80499.803 99.81499.810

Продолжение таблицы 1 Название компонентов Составы исходного продукта для получения препарата, мас.% 67 8910 11лизоцим 0.0430.0430.043 -- 0.2желатин 0.0710.0710.025 0.026- -нитрат серебра 0.0720.0860.073 0.0730.85 -вода 99.81499.80399.816 99.90499.15 99.8

В таблице 1 составы 1-3 подтверждают качественное и количественное соответствие заявленных компонентов, составы 4-8 количественно выходят за рамки заявленного диапазона, в составах 9-11 приведены примеры с наличием или отсутствием компонентов заявленных составов.

В сравнительной таблице 2 приведены свойства водорастворимого бактерицидного препарата в соответствии с составами исходного продукта для его получения.

Таблица 2 Замеряемые параметрыПримеры составов исходного продукта и их антимикробная активность 12 345 Стабильность в NaCl (0.15М) +++++++++ +- Антимикробная активность (МИК), мкг/мл: Ecsherichia coli ML35p 3131 315518 Acinetobacter baumannii (клиничекий изолят) 88 8-- Stahylococcus aureus SG511 MRSA ATCC 33591 313131 11018 6262 62110 36Токсичность для фибробластов человека11 11 1для нейтрофилов человека 11 122

Продолжение таблицы 2 Замеряемые параметры Примеры составов исходного продукта и их антимикробная активность 67 89 1011Стабильность в NaCl (0.15М)+ --+ -+++Антимикробная активность (МИК), мкг/мл: Ecsherichia coli ML35p 6524 32316 2100Acinetobacter baumannii (клиничекий изолят) -- -6 -Stahylococcus aureus SG511 6548 32806 60MRSA ATCC 33591 не акт.9664 806 2100Токсичность для фибробластов человека12 21 40для нейтрофилов человека2 222 40

Результаты исследований составов исходного продукта для получения водорастворимого бактерицидного препарата, описанных выше, представлены следующими характеристиками: антимикробная активность, токсичность, стабильность в 150 мм растворе хлорида натрия NaCl.

Антимикробная активность представлена как минимальная ингибирующая рост микробов концентрация (МИК) препаратов, в мкг/мл. Антимикробную активность образцов, полученных по заявляемому способу, изучали методом серийных разведений в питательной среде. Антимикробную активность исследовали в отношении грамотрицательных бактерий - Escherichia coli ML35p, Acinetobacter baumannii, грамположительных бактерий Staphylococcus aureus SG511 и MRSA АТСС 33591.

Также была исследована токсичность полученных образцов для фибробластов и нейтрофилов человека. Для оценки цитотоксичности препаратов для культивируемых клеток использовали следующую шкалу: 0 баллов - отсутствие цитотоксического действия; 1 балл - слабое токсическое действие (20-25% гибель клеток); 2 балла - мягкое токсическое действие (50% гибель клеток); 3 балла - умеренное токсическое действие (70-75% гибель клеток); 4 балла - тяжелое токсическое действие (100% гибель клеток) - при использовании препаратов в концентрациях, в 5 раз превышающих МИК.

При проведении исследований были использованы следующие нормативные документы:

Оценка токсичности и опасности дезинфицирующих средств Методические указания МУ 1.2.1105-02 (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 10 февраля 2002 г.).

Методические указания по использованию культуры диплоидных клеток человека, рекомендуемых для токсиколого-гигиенических исследований. Утверждены МЗ СССР 18.09.91 15-6/21. М., 1991. 20 с.

Образец удовлетворяет требованиям безопасности, если ни одна из опытных клеточных культур не имеет степень более 1.

Стабильность известных ранее серебросодержащих препаратов при контакте с биологическими жидкостями также невысока. При их практическом применении в присутствии хлорида натрия NaCl происходит образование осадка, что не позволяет этим препаратам равномерно распределяться в жидкостях и тканях организма, что снижает их эффективность.

Результаты проведенных исследований свидетельствуют, что составы 1-3, представляющие собой сочетание лизоцима, желатина и нитрата серебра в заявленных соотношениях, подтверждают возможность решения поставленных нами задач и достижения указанного технического результата, а именно получены образцы, стабильные в растворе хлорида натрия, они обладают антимикробной активностью широкого спектра действия и не являются токсичными. Заявленные составы исходного продукта для получения водорастворимого бактерицидного являются оптимальными и в сравнении с чистым лизоцимом (состав 11), раствором нитрата серебра (состав 10), а также с наночастицами серебра (состав 9), стабилизированными желатином.

Состав 4, содержащий меньше лизоцима, чем составы 1-2-3, обладает меньшей антимикробной активностью. Увеличение содержания лизоцима (состав 5) приводит к нестабильности получаемого препарата в растворе NaCl. Снижение количества нитрата серебра (состав 6) приводит к снижению антимикробной активности препарата, увеличение же его содержания (состав 7) ведет к возникновению нестабильности в растворе NaCl. Уменьшение количества желатина ниже 0.071 мас.% (состав 8) приводит к снижению стабильности препарата в среде NaCl.

Кроме того, были проведены дополнительные испытания (пример не включен в таблицу 1) с увеличением содержания желатина до величин, превышающих 0.8 мас.%, что приводит к нежелательному гелированию получаемой композиции, и как следствие, к снижению технологичности процесса.

Таким образом, именно сочетание нитрата серебра, лизоцима и желатина в заявленных соотношениях, а именно, мас.%: лизоцим 0.043-0.045, нитрат серебра (AgNO3) 0.073-0.085, желатин 0.071-0.080, вода H2O - остальное - позволяет достигнуть требуемого технического результата - получение нетоксичного, стабильного в растворе хлорида натрия NaCl препарата, расширение спектра действия препарата за счет активности по отношению к грамотрицательным бактериям и повышение эффективности лечения гнойно-септических осложнений ран, язв, пролежней, ожогов, бактериальных поражений слизистой глаз и полости рта.

Техническая сущность способа поясняется приведенными ниже примерами 1-3.

Пример 1. Восстановление ионного серебра ведут при смешении 3 мл 0.073 мас.% водного раствора нитрата серебра и 3 мл 0.043 мас.% водного раствора лизоцима. Восстановленное металлическое серебро стабилизируют добавлением 1 мл 0.071 мас.% водного раствора желатина.

Полученную смесь подвергают УФ-облучению при непрерывном перемешивании в течение 25 минут, в диапазоне коротковолнового излучения 254 нм, затем 25 минут в диапазоне длинноволнового излучения 365 нм и 55 минут в диапазоне коротковолнового излучения 254 нм.

Затем проводят диализ полученного образца, для чего помещают в диализный мешок с микропорами 14000 Да в течение 24 часов при непрерывном перемешивании, с использованием бидистиллированной воды 1000 мл. Сушку проводят под вакуумом.

Пример 2. Восстановление ионного серебра ведут при смешении 3 мл 0.079 мас.% водного раствора нитрата серебра и 3 мл 0.044 мас.% водного раствора лизоцима. Восстановленное металлическое серебро стабилизируют добавлением 1 мл 0.073 мас.% водного раствора желатина.

Полученную смесь подвергают УФ-облучению при непрерывном перемешивании: в течение 25 минут в диапазоне коротковолнового излучения 254 нм, затем 25 минут в диапазоне длинноволнового излучения 365 нм и 55 минут в диапазоне коротковолнового излучения 254 нм.

Затем проводят диализ полученного образца, для чего помещают в диализный мешок с микропорами 14000 Да в течение 28 часов при непрерывном перемешивании, с использованием бидистиллированной воды 1000 мл. Сушку проводят под вакуумом.

Пример 3. Восстановление ионного серебра ведут при смешении 3 мл 0.08 мас.% водного раствора нитрата серебра и 3 мл 0.043 мас.% водного раствора лизоцима. Восстановленное металлическое серебро стабилизируют добавлением 1 мл 0.074 мас.% водного раствора желатина.

Полученную смесь подвергают УФ-облучению при непрерывном перемешивании в течение 25 минут, в диапазоне коротковолнового излучения 254 нм, затем 25 минут в диапазоне длинноволнового излучения 365 нм и 55 минут в диапазоне коротковолнового излучения 254 нм.

Затем проводят диализ полученного образца, для чего помещают в диализный мешок с микропорами 14000 Да в течение 30 мин при непрерывном перемешивании, с использованием бидистиллированной воды 1000 мл, далее сушку вакуумом.

Результаты исследований полученных образцов в различных условиях показали, что с увеличением времени УФ-обработки выпадает осадок и наблюдается нестабильность полученных композиций в растворе хлорида натрия NaCl. Условия получения, описанные в примерах реализации способа 1-3, наиболее оптимальны для решения поставленной задачи и позволяют получить технический результат.

Возможность промышленного применения заявленного технического решения подтверждается известными и описанными в заявке средствами и методами, с помощью которых возможно осуществление изобретения в том виде, как оно охарактеризовано в формуле изобретения.

Формула изобретения

Способ получения водорастворимого бактерицидного препарата, включающий смешивание исходных компонентов, с последующей стабилизацией металлического серебра полимером путем восстановления ионного серебра в водных растворах с последующей сушкой, отличающийся тем, что восстановление ионного серебра в водном растворе ведут при взаимодействии нитрата серебра, лизоцима и желатина при следующем соотношении компонентов, мас.%: лизоцим 0,043-0,045, нитрат серебра (AgNO3) 0,073-0,085, желатин 0,071-0,080, вода - остальное, полученную смесь исходных компонентов подвергают УФ-облучению при непрерывном перемешивании в течение 25-30 минут в диапазоне коротковолнового излучения 254 нм, затем в течение 25-30 минут в диапазоне длинноволнового излучения 365 нм и 55-60 минут в диапазоне коротковолнового излучения 254 нм, а диализ обработанной смеси проводят в течение 24-30 часов при непрерывном перемешивании.





Популярные патенты:

2456799 Ловушка для поимки животных, обитающих в земле

... при помощи переключателя 12. Далее пользователь удаляет животное через открытый проход в трубе 20.Таким образом, выполнение устройства описанным ранее образом обеспечивает повышение надежности устройства.ф Формула изобретения Ловушка для поимки животных, обитающих в земле, содержащая трубу, сторожок, стержень, две вторые пружины, фиксатор, два рычага, две задвижки, две первые пружины, при этом сторожок установлен в трубе в неустойчивом состоянии и с возможностью выхода из него, со сторожком в его неустойчивом состоянии механически контактирует стержень, установленный с возможностью удержания второй пружины в сжатом состоянии и ее удлинения и перемещения стержня при выходе ...


2493697 Технологическая линия для подготовки к скармливанию пророщенного зерна

... комбикорма в бункер-дозатор [RU 2434381 С2, А01К 5/02, 27.11.2011.]. Бункер-дозатор закреплен к нижней части тросово-шайбового конвейера, над кормушкой.Предлагаемая технологическая линия для подготовки к скармливанию пророщенного высушенного измельченного зерна за счет отличительных признаков обеспечивает решение поставленной задачи, обеспечение длительного хранения пророщенного зерна, равномерное распределение пророщенного зерна в комбикорме, за счет измельчения пророщенного высушенного зерна и его равномерного дозирования в спиральный транспортер.Принцип работы технологической линии для подготовки к скармливанию пророщенного зерна будет понятным из следующего описания и ...


2261588 Способ электростимуляции жизнедеятельности растений

... этом под пунктом "А" изображен тип вносимых металлов в виде пластин: 20 см длиной, 1 см шириной, 0.5 мм толщиной. Под пунктом Б" изображен тип вносимых металлов в виде пластин 3×2 см, 3×4 см. Под пунктом "В" изображен тип вносимых металлов в виде "звездочек" 2×3 см, 2×2 см, толщиной 0.25 мм. Под пунктом "Г" изображен тип вносимых металлов в форме кружков диаметром 2 см, толщиной 0.25 мм. Под пунктом "Д" изображен тип вносимых металлов в виде порошка. Для практического использования типы вносимых в почву металлических пластин, частиц могут быть самой различной конфигурации и размеров.На фиг.3 изображен вид ...


2154629 Производные оксима, способ их получения, фунгицидное средство и способ борьбы с грибковыми заболеваниями

... трет-бутил, Z - фенил, возможно замещенный 1 - 3 заместителями, выбранными из фтора, хлора, брома, метила, этила, н- или изо-пропила, н-, изо-, втор- или трет-бутила или трифторметила. Производные оксима общей формулы (I), у которых X означает группу - NX2X3 получают за счет того, что производные амида общей формулы (II) где Ar, E, G, X3 и Z имеют вышеуказанные значения, подвергают алкилированию известными приемами и получаемые таким образом иминопроизводные формулы (III) где Ar, E, G, X3 и Z имеют вышеуказанные значения, Alk - алкил, предпочтительно метил, при необходимости без предварительного выделения подвергают взаимодействию с производными гидроксиламина общей формулы (IV), ...


2261597 Способ борьбы с нематодами - возбудителями болезней сельскохозяйственных растений

... сравнению с контролем.Пример 6. В лабораторных опытах in vitro исследовали влияние нематицидного действия пероксосольвата фторида калия (KF-H202) на цисты картофельной нематоды.В пробирки с водными растворами препарата в концентрации 0,37; 0,75; 1,50; 3,0 5,0 и 10,0% помещали по 10 цист картофельной нематоды, содержащих в среднем 76 живых яиц и личинок в каждой цисте. Контроль - вода.Через 1-10 суток содержимое цист исследовали на определение жизнеспособности яиц и личинок общепринятыми методиками микроскопическим методом.В таблице 6 представлены результаты исследования влияния растворов препарата на жизнеспособность цист.Из данных таблицы следует, что гибель яиц и личинок в цистах ...


Еще из этого раздела:

2427999 Способ повышения плодородия мерзлотных засоленных почв в условиях криолитзоны

2076603 Способ повышения урожайности сельскохозяйственных культур

2427121 Почвообрабатывающий агрегат

2060651 Бытовой инкубатор

2403708 Устройство для полива сельхозрастений

2294617 Устройство для отрезания и погрузки силоса и сенажа

2196418 Устройство для укладки, сушки и хранения прессованного сена и соломы в рулонах

2185045 Способ посева, устройство для его осуществления и семявысевающий аппарат конструкции ибрагимова

2403703 Способ интенсификации роста растений

2019938 Рабочий орган почвообрабатывающей машины