Синергист для повышения эффективности биопрепаратов против колорадского жука

Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано для повышения биологической эффективности инсектицидных препаратов на основе энтомопатогенных грибов и бактерий. Повышение эффективности инсектицидного препарата достигается путем использования в сублетальных дозах смеси фторпроизводных усниновой кислоты (ФУР) формулы I и II

полученной реакцией (+)-усниновой кислоты с перфторпропеном, в качестве синергиста таких инсектицидов. Показано сокращение латентного периода болезни и увеличение процента смертности личинок колорадского жука при использовании ФУР и энтомопатогенных микроорганизмов Beauveria bassiana, Metarhizium anisopliae и Bacillus thuringiensis. Смесевая композиция ФУР в концентрации 0.03% с суспензией конидий гриба Beauveria bassiana с титром 3×106 конидий/мл (в лабораторных условиях) и 5×106 конидий/мл (в полевых условиях) проявила себя как наилучшая по всем показателям. 4 табл., 5 пр.

Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано для повышения биологической эффективности инсектицидных препаратов на основе энтомопатогенных микроорганизмов.

Одними из наиболее перспективных групп микроорганизмов для управления численностью популяций насекомых являются энтомопатогенные грибы и бактерии. Обладая определенной специфичностью по отношению к хозяевам, они оказывают значительно меньшее по сравнению с химическими инсектицидами воздействие на нецелевые объекты [Патогены насекомых: структурные и функциональные аспекты. В.В.Глупов (ред.) М.: Круглый год. 2001. 736 с.]. Однако применение препаратов на основе энтомопатогенных микроорганизмов встречает ряд трудностей. В частности, микозы насекомых характеризуются длительным латентным периодом. Растянутая во времени гибель наблюдается при заражении гифомицетами насекомых самых различных групп [Огарков Б.Н., Огаркова Г.Р. Энтомопатогенные грибы Восточной Сибири. Иркутск: Изд-во Иркутск. Ун-та. 2000. 134 с.; Половинко Г.П., Наумова Е.Н. 1997. Энтомопатогенные свойства гриба Tolypocladium inflatum (Gams), выделенного из лугового мотылька Loxostege sticticalis L. // Регуляция численности беспозвоночных и фитопатогенов. Новосибирск: НГАУ. С.42-46; Леднев Г.Р., Крюков В.Ю., Ходырев В.П., Левченко М.В., Дуйсембеков Б.А., Сагитов О.А., Глупов В.В. Динамика гибели азиатской саранчи при синхронном заражении энтомопатогенными грибами (Metarhizium anisopliae, Beauveria bassiana) и бактерией Pseudomonas sp. // Сибирский экологический журнал, 4, 2007, 527-531; Lomer C.J., Bateman R.P., Johnson D.L., Lagewald J., Thomas M. 2001. Biological Control of Locusts and Grasshoppers // Annu. Rev. Entomol. V.46. P.667-702]. При инфицировании личинок колорадского жука гифомицетами Beauveria bassiana (Bals.) Vuill или Metarhizium anisopliae (Metsch.) Sorokin в лабораторных условиях период от заражения до 95-100%-ной смертности составляет 10-17 суток. В полевых условиях этот период еще более удлиняется - за 2 недели погибает только около 50% личинок, а основная смертность наблюдается при уходе в почву и метаморфозе [Сикура А.И., Ижевский С.С., Трофимова И.Л. 1979. Микробиологические средства борьбы с колорадским жуком. М. 52 с.; Крюков В.Ю., Серебров В.В, Малярчук А.А., Копжасаров Б.К., Мухамедиев Н.С., Орынбаева А.К., Ходырев В.П. Перспективы использования энтомопатогенных гифомицетов (Deuteromycota, Hyphomycetes) против колорадского жука в условиях Юго-Восточного Казахстана // Сибирский вестник сельхоз науки. 2007. 4. С.52-60]. Естественно, данный факт ограничивает интерес практиков к энтомопатогенным грибам, поскольку за время латентного развития микоза насекомые могут нанести значительные повреждения растениям. Для бактериальных инфекций, напротив, характерна достаточно быстрая гибель насекомых (2-7 суток), но при этом не всегда достигается 100% уровень смертности. Чаще всего младшие возрасты оказываются чувствительными к энтомопатогенным бактериям, а старшие - весьма устойчивы к ним. Если принять во внимание временное перекрывание всех стадий развития у многих насекомых, в частности у колорадского жука, становится очевидной низкая эффективность бактериальных препаратов.

Современные методы защиты растений базируются на интегрированных подходах, включающих в себя использование энтомопатогенных микроорганизмов комплексе с химическими инсектицидами [Charnley A.K. Collins S.A. 2007. Entomopathogenic fungi and their role in pest control // Environmental and microbial relationships. The Mycota: A comprehensive treatise on fungi as experimental systems for basic and applied research / Eds. Kubicek C.P., Esser K., Druzhinina I.S. Berlin-Heidelberg: Springer-Verlag. V.4. P.159-187]. Известно, что в ряде случаев совместное применение инсектицидов и энтомопатогенных микроорганизмов приводит к развитию эффекта синергизма, что позволяет существенно снизить нормы расхода инсектицидов и, как следствие, способствует снижению антропогенной нагрузки на экосистемы [Бенц Г. 1976. Синергизм микроорганизмов и химических инсектицидов // М.С.Гиляров (ред.) Микроорганизмы в борьбе с вредными насекомыми и клещами. М.: Колос. С.105-123; Серебров В.В., Гербер О.Н., Ходырев В.П., Цветкова В.П. 2005. Перспективы совместного применения энтомопатогенных грибов и химических инсектицидов // Микология и фитопатология. Т.39. Вып.3. С.89-98]. В многочисленных исследованиях показано, что использование сублетальных доз инсектицидов различной природы совместно с грибами Metarhizium и Beauveria приводит к синергическому эффекту на насекомых различных отрядов [Серебров В.В., Гербер О.Н., Ходырев В.П., Цветкова В.П. 2005. Перспективы совместного применения энтомопатогенных грибов и химических инсектицидов // Микология и фитопатология. Т.39. Вып.3. С.89-98; Boucias D.G., C.Stokes, G. Storey and J.С.Pendland. 1996. The effects of Imidacroprid on the termite Reticulitermes flavipes and its interaction with the mycopathogen Beauveria bassiana. Pflanzenschuts-Nachrichten Bayer V.49. P.103-144; Quintela E.D. and C.W.McCoy. 1997. Pathogenicity enhancement of Metarhizium anisopliae and Beauveria bassiana to first instars of Diaprepes abbreviates (Coleoptera: Curculionidae) with sublethal doses of imidacloprid Environ. Entomol. V.26. P.1173-1182].

В то же время известно, что у насекомых достаточно быстро вырабатывается резистентность к инсектицидам. Следовательно, необходимо расширение ряда инсектицидов, показывающих синергетический эффект при совместном применении с энтомопатогенными грибами.

Задачей изобретения является создание нового эффективного средства, использование которого в сублетальных дозах вместе с энтомопатогенными микроорганизмами давало бы синергетический эффект и позволило использовать его в составе комплексного средства защиты растений, по эффективности сравнимого с химическими инсектицидами.

Поставленная задача решается композицией, содержащей смесь продуктов взаимодействия усниновой кислоты с перфторпропеном, названной авторами ФУР, в качестве синергиста инсектицидов на основе энтомопатогенных грибов и бактерий:

Указанный синергист может использоваться в составе комплексного средства защиты растений, например, следующего состава:

Наиболее близок к заявляемому изобретению патент, в котором в инсектицидах на основе патогенных микроорганизмов в качестве синергиста выступает усниновая кислота [М.П.Половинка, Н.Ф.Салахутдинов, О.А.Лузина, В.В.Глупов, В.В.Серебров, И.М.Дубовский, В.В.Мартемьянов, В.Ю.Крюков; «Применение усниновой кислоты в качестве синергиста инсектицидов на основе энтомопатогенных микроорганизмов», патент РФ 2328493, приоритет от 09.01.2007]. В прототипе показано увеличение процента гибели гусениц пчелиной огневки, личинок колорадского жука и гусениц непарного шелкопряда при использовании смеси усниновой кислоты и энтомопатогенных микроорганизмов, таких как грибы Metarhizium anisopliae и Beauveha bassiana (конидии), бактерии Bacillus turhingiensis (спорово-кристаллическая масса), вирус ядерного полиэдроза (сем. Baculoviridae).

В заявляемом изобретении в качестве синергиста инсектицидов на основе энтомопатогенных грибов и бактерий предлагается смесь продуктов взаимодействия усниновой кислоты с перфторпропеном, которая включает в себя два основных вещества - I и II.

Реакция (+)-усниновой кислоты с перфторпропеном описана в статье [Г.Г.Фурин, О.А.Лузина, Р.И.Сокуев, М.П.Половинка, Н.Ф.Салахутдинов, Г.А.Толстиков. Химическая модификация усниновой кислоты. Сообщение 1. Взаимодействие (+)-усниновой кислоты с перфторолефинами. Извест. Акад. наук. Сер. хим. 2007. Т.56. 6, стр.1198-2002]. Реакцией усниновой кислоты с перфтораном в присутствии K2CO3 и водного ДМФА (0.2% воды) получали смесь соединений I и II, которые выделяли в индивидуальном виде колоночной хроматографией на силикагеле.

Для исследования токсических свойств соединений по отношению к личинкам колорадского жука испытывались как отдельные компоненты, так и не разделенная после реакции смесь - ФУР.

Синергетические свойства ФУР изучали на личинках колорадского жука разных возрастов, собранных на растениях картофеля в Новосибирской области и в окрестностях г. Алматы. Для инфицирования насекомых использовали культуры Beauveria bassiana (Сар-31) и Metarhizium anisopliae (Р-72) из коллекции микроорганизмов Института систематики и экологии животных СО РАН. Конидиальную массу грибов нарабатывали на агаризованной среде Чапека или на стерильном пшене согласно рекомендациям Е.А.Никольской [Никольская Е.А. Методы экспериментальной микологии (Под ред. В.И. Билай). Киев: Наукова думка. 1982. С.106-137]. В ряде экспериментов использовали штамм 2495 B.thuringiensis tenebrionis (H8ab), изолированный из погибших личинок большого мучного хрущака (Tenebrio molitor) в лабораторной популяции в ИСиЭЖ СО РАН. Бактерии выращивали на мясопептонном агаре в течение 6 суток, затем смывали дистиллированной водой.

Полевые и лабораторные исследования проводили в 2006-2008 гг. в лаборатории Новосибирского института систематики и экологии животных СО РАН, на территории Новосибирской области и в окрестностях г. Алматы на базе лаборатории биотехнологии НИИ Защиты растений Республики Казахстан.

Для оценки влияния средства ФУР на развитие инфекционных заболеваний проводили совместную обработку насекомых энтомопатогенными грибами, бактериями и средством ФУР. Для этого ФУР растворяли в ацетоне, затем ацетоновый раствор в различных количествах добавляли к суспензии конидий грибов, бактерий или смеси грибов и бактерий, полученную смесь использовали для инфицирования насекомых. В контрольных вариантах использовали обработку насекомых водой, а также обработку насекомых по отдельности энтомопатогенными микроорганизмами и ФУР. Чтобы показать, что использование ацетона в качестве растворителя не влияет на насекомых, в контрольных вариантах насекомых обрабатывали водой с добавлением эквивалентных количеств ацетона.

Эффективность использования ФУР в качестве синергиста для биопрепаратов на основе энтомопатогенных грибов и бактерий может быть продемонстрирована примерами, приведенными ниже.

Пример 1. Получение средства-синергиста ФУР из (+)-усниновой кислоты.

Через смесь (+)-усниновой кислоты (0.3 г) и K2CO 3 (0.3 г) в 10 мл водного ДМФА (0.2% воды) при перемешивании и температуре 40-45°C в течение 3-4 час пропускали перфторпропен (~500-600 мл). Реакционную смесь выливали в 300 мл воды, подкисляли 5%-ной соляной кислотой, оставляли на полчаса для укрупнения выпавшего мелкодисперсного осадка. Осадок отфильтровывали, промывали 100 мл воды и сушили на воздухе 24 час. Получили 0.26 г реакционной смеси - далее ФУР.

Выделение I и II. Реакционную смесь делили на колонке с силикагелем (элюент - CH2 Cl2). Выделили компоненты I (0.14 г) и II (0.06 г), мелкокристаллические вещества желтого цвета с выходами 52 и 22% соответственно, строение которых установили по следующим спектрам.

2,6-Диацетил-3,9-дигидрокси-8,9b-диметил-7-(1 ,1 ,2 ,3 ,3 ,3 -гексафторпропокси)-9bH-дибензофуран-1-он (I). ЯМР 1H (CDCl3, м.д.) 1.78 (3H, c, H-15), 2.12 (3H, c, H-10), 2.54 (3H, c, H-14), 2.64 (3H, c, H-12), 5.10 (1Н, д.м, H-17), 5.95 (1Н, с, H-4), 11.1 (1Н, c, OH-9), 18.8 (1Н, c, OH-3). ЯМР 13 С (CDCl3, м.д.) 9.5 (C-10), 27.7 (C-12), 31.6 и 31.7 (C-14 и C-15), 58.9 (С-9b), 83.0-86.1 (д.кв, C-17), 98.4 (C4), 99.4 (C18), 105.0 (C2), 111.0 (C9a), 113.2 (C8), 116-118 (C-16), 117.9 и 121.8 (д.д, C-16), 119.2 (C-6), 144.9 (C-7), 152.3 (С-5а), 154.5 (C-9), 178.9 (С-4а), 191.5 (C-3), 194.7 (C-13), 197.4 (C-1), 201.7 (C-11).

(6bS)-8-ацетил-2,2,3-трифторо-6,9-дигидрокси-5,6b-диметил-1-метилен-3-(трифторметил)-2,3-дигидро-1Н-бензофуро[2,3-f]хромен-7(6bH-он (II). ЯМР 1H (CDCl3, м.д.) 1.76 (3H, c, H-15), 2.16 (3H, c, H-10), 2.64 (3H, c, H-12), 5.99 (1Н, c, H-4), 5.99, 6.45 и 6.50 (2Н, м, H-14), 10.7 (1Н, c, OH-9), 18.8 (1Н, c, OH-3). ЯМР 13С (CDCl 3, м.д.) 8.0 (C-10), 27.7 (C-12), 31.7 (C-15), 58.8 (C-9b), 85.0-87.0 (C-17), 98.5 (C-4), 105.1 (C-2), 109.1 (C-9a), 111.2 (C-8), 116-118 (C-16), 119.3 (C-14), 120.0 (C-18), 126.1 (C-6), 147.8 (C-7), 151.2 (C-13), 152.5 (C-5), 152.8 (C-9), 179.2 (С-4а), 191.5 (C-3), 197.6 (C-1), 201.7 (C-11).

Инсектицидное действие компонентов I и II, каждого по отдельности, тестировали на личинках колорадского жука в лабораторных условиях. При обработке насекомых компонент I или II сначала растворяли в 0.5 или 1 мл ацетона, затем добавляли соответственно в 9.5 или 19 мл воды и резко встряхивали. В контрольные варианты (обработка водой) добавляли соответствующее количество ацетона. Тестируемых личинок и корм погружали в водные суспензии с определенной концентрацией компонентов I и II. Регрессионный анализ показал отсутствие достоверных различий в смертности личинок от соединений I и II. Однако отмечена тенденция увеличения смертности от компонента II. Так, при концентрациях 0,01%, 0,02% и 0,05% в данном случае отмечена 35, 75 и 100% смертность соответственно, тогда как от компонента I - 20, 40 и 95% соответственно. Во всех случаях отмечалась задержка роста и линьки личинок, обработанных исследуемыми компонентами. Учитывая полученные данные, далее компоненты I и II не выделяли, а полученную в реакции усниновой кислоты с перфторпропеном смесь соединений использовали как средство ФУР.

Пример 2. Наилучшим образом в лабораторном эксперименте на личинках колорадского жука проявило себя средство ФУР в концентрации 0.03% с суспензией конидий гриба Beauveria bassiana с титром 3×106 конидий/мл. В опыте использовали личинки колорадского жука II, III и IV возрастов. При обработке насекомых ФУР сначала растворяли в 0.5 или 1 мл ацетона, затем добавляли соответственно в 9.5 или 19 мл суспензии конидий гриба или воды и резко встряхивали. В контрольные варианты (обработка водой, суспензией конидий гриба) добавляли соответствующее количество ацетона. Тестируемых личинок и корм погружали в водные суспензии на 3-5 секунд. Смену корма проводили на второй день после обработки и далее каждые сутки. Личинок содержали в пластиковых стаканах объемом 700 мл, накрытых сверху сеткой. С целью предотвращения высыхания листьев их черешки помещали в пробирки Эппендорф (1,5 мл), тампонированные влажной ватой. Каждый вариант ставили в 3 повторностях по 15 особей на каждую. Учет смертности проводили каждый день в течение 12 суток. Результаты лабораторных испытаний приведены в таблице 1. Эффекты, полученные при биотестировании агентов в указанных концентрациях, можно классифицировать как аддитивные.

Установили, что ФУР обладает свойством существенно увеличивать гибель личинок колорадского жука как младших, так и старших возрастов при их инфицировании энтомопатогенными грибами (таблица 1). Важно отметить, что помимо увеличения итоговой смертности личинок (12 сутки опыта) в вариантах В. bassiana+ФУР наблюдали более раннюю гибель насекомых. Среднее полулетальное время (LT50) для III и IV личиночных возрастов при обработке комбинированной смесью B.bassiana+ФУТ сократилось на 2-3 суток в отличие от вариантов с обработкой только грибом. Кроме того, в вариантах ФУР и B.bassiana+ФУТ у личинок зарегистрировали сильное отставание в росте и соответственно значительно меньшее потребление корма.

Эту смесовую композицию - ФУР в концентрации 0.03% с суспензией конидий гриба Beauveria bassiana с титром 5×106 конидий/мл далее проверяли в полевых испытаниях.

Пример 3. В полевом мелкоделяночном опыте проводили изучение эффективности препаратов на основе энтомопатогенных грибов и влияние на их эффективность ФУР. Опыт заложили на частных посадках картофеля. Обработку растений проводили вечером в безветренную погоду с помощью ручного ранцевого опрыскивателя. Инфекционную нагрузку вносили из расчета 1×109 конидий/м 2 согласно принятым за рубежом нормам расхода: от 5×10 12 до 5×1013 конидий/га [S.P.Wraight, M.Sporleder, T.J.Poprawski, L.A. Lacey. 2007. Application and evaluation of entomopathogens in potato // Field manual of techniques in invertebrate pathology. Application and evaluation of pathogens for control of insects and other invertebrate pests / ed. L.A.Lacey, H.K.Kaya. Springer, P.329-359]. Расход рабочей жидкости составлял около 40 мл/м2, концентрация конидий грибов в рабочем растворе - 5×106 конидий/мл (увеличение титра гриба в рабочем растворе в данном эксперименте связано с тем, что под воздействием солнечной радиации происходит гибель определенной доли конидий, что приводит к снижению уровня смертности насекомых от микоза) и 0,03% ФУР соответственно. В контроле обработку растений не проводили. В эксперименте также заложили опыт по применению ФУР отдельно от энтомопатогенных грибов для оценки его инсектицидных свойств. Для точного учета смертности на ветви картофеля надевали садки из сетки. Повторность опыта 4-кратная. Количество особей на одну повторность -15-20. Результаты приведены в таблице 2.

В результате полевых опытов установили, что ФУР обладает свойством существенно увеличивать гибель насекомых при инфицировании их энтомопатогенными грибами B.bassiana. В таблице 2 представлена динамика гибели насекомых, зафиксированная в полевых экспериментах. Данные эффекты могут быть классифицированы как усиливающий синергизм и временной синергизм [Бенц Г. 1976. Синергизм микроорганизмов и химических инсектицидов // М.С.Гиляров (ред.). Микроорганизмы в борьбе с вредными насекомыми и клещами. М.: Колос. С.105-123]. В полевом эксперименте в вариантах ФУР и В. bassiana+ФУР отмечали слабую поврежденность листьев. Дефолиация картофеля на 10-12 сутки опыта составляла в этих вариантах всего лишь 5-15%, тогда как в варианте B.bassiana - 60-80%, а в контроле - 60-100%).

Таким образом, при применении ФУР в качестве синергиста инсектицида на основе энтомопатогенных грибов B.bassiana увеличивается процент гибели личинок колорадского жука и значительно снижается потребление ими фитомассы по сравнению с обычным инфицированием энтомопатогенными грибами.

Пример 4. Наряду с приведенными выше примерами проводили серию лабораторных экспериментов по методике, описанной выше (Пример 2), в которой использовали другие концентрации конидий гриба Beauveria bassiana и ФУР. Результаты приведены в таблице 3.

Из материала таблицы 3 видно, что наиболее быстрые сроки гибели личинок наблюдали при комбинировании гриба с ФУР в концентрации 0,05%, однако необходимо снижение данной концентрации в пределах диапазона 0,01-0,05%, а также титра конидий гриба в 2-3 раза для получения более выраженного аддитивного или синергетического эффекта.

Пример 5. В лабораторном опыте на личинках 3-го возраста колорадского жука тестировали совместное действие ФУР и комбинированного экспериментального препарата на основе гриба Metarhizium anisopliae и бактерии Bacillus thuringiensis tenebrionis [Kryukov V.Yu., Khodyrev V.P., Yaroslavtseva O.N., Kamenova A.S., Duisembekov B.A., Glupov V.V. 2009. Synergistic Action of Entomopathogenic Hyphomycetes and the Bacteria Bacillus thuringiensis ssp. morrisoni in the Infection of Colorado Potato Beetle Leptinotarsa decemlineata // Applied Biochemistry and Microbiology. Vol.45. 5. P.511-516]. Для выявления всех возможных эффектов средство ФУР тестировали как с комбинированной смесью гриба и бактерии, так и с обоими микроорганизмами по отдельности. Концентрация ФУР составила 0.03%, титр B.thuringiensis - 5×106 кристаллов/мл, титр М.anisopliae - 2×106 конидий/мл. Методика приготовления смесей, обработки и содержания насекомых аналогична вышеописанной (Пример 2). Данные эксперимента представлены в таблице 4.

Анализ данных по смертности колорадского жука показал, что добавление ФУР сокращает латентный период микоза, бактериоза, а также микст-инфекции. При добавлении ФУР к суспензии бактерий наблюдаются значительные различия не только во времени гибели личинок, но и в их итоговой смертности. Последний эффект может быть классифицирован как дополнительный синергизм [Бенц Г. 1976. Синергизм микроорганизмов и химических инсектицидов // М.С.Гиляров (ред.). Микроорганизмы в борьбе с вредными насекомыми и клещами. М.: Колос. С.105-123].

Однако все композиции, представленные в примере 5, проявили себя как менее эффективные по сравнению с композицией конидий гриба Beauveria bassiana и ФУР, описанной в примерах 2 и 3.

Таким образом, установили, что ФУР обладает свойством существенно увеличивать гибель личинок колорадского жука как младших, так и старших возрастов при их инфицировании энтомопатогенными грибами (таблицы 1, 2). В варианте ФУР в концентрации 0.03% с суспензией конидий гриба Beauveria bassiana с титром 3×106 конидий/мл (лабораторные опыты) и 5×106 конидий/мл (полевой опыт) наблюдали не только увеличение итоговой смертности, но и более раннюю гибель насекомых. Среднее полулетальное время (LT50) при обработке такой комбинированной смесью в отличие от вариантов с обработкой только грибом сократилось на 2-3 суток в лабораторных условиях и на 9 суток в естественных. Данное сокращение сроков гибели насекомых приводило к снижению уровня дефолиации картофеля на 50% и более.

Агенты биологического контроля колорадского жука на основе энтомопатогенных грибов приводят к определенному уровню смертности насекомых, однако они не могут предотвращать дефолиацию картофеля по причине активного питания и нормального роста личинок за период течения микозов. Бактериальные агенты контроля действуют в основном только на младшие возраста личинок. Старшие возраста личинок выживают, активно питаются и дают следующее поколение жука. Поскольку для колорадского жука характерно временное перекрывание всех стадий развития (присутствие в одно время всех личиночных возрастов), бактериальные препараты не могут быть высокоэффективными против вредителя. Поэтому сочетание грибных патогенов и средства ФУР, предлагаемого в качестве синергиста, приводит к синергетическому эффекту в смертности всех возрастов личинок колорадского жука, сокращению сроков их гибели, снижению количества потребляемого корма, что в конечном итоге способствует сохранению урожая картофеля.

Формула изобретения

Применение смеси фторпроизводных усниновой кислоты формул I и II полученных реакцией (+)-усниновой кислоты с перфторпропеном, в качестве синергиста инсектицидов на основе энтомопатогенных микроорганизмов против личинок колорадского жука.