Изобретения в сфере сельского хозяйства, животноводства, рыболовства

 
Изобретения в сельском хозяйстве Обработка почвы в сельском и лесном хозяйствах Посадка, посев, удобрение Уборка урожая, жатва Обработка и хранение продуктов полеводства и садоводства Садоводство, разведение овощей, цветов, риса, фруктов, винограда, лесное хозяйство Новые виды растений или способы их выращивания Производство молочных продуктов Животноводство, разведение и содержание птицы, рыбы, насекомых, рыбоводство, рыболовство Поимка, отлов или отпугивание животных Консервирование туш животных, или растений или их частей Биоцидная, репеллентная, аттрактантная или регулирующая рост растений активность химических соединений или препаратов Хлебопекарные печи, машины и прочее оборудование для хлебопечения Машины или оборудование для приготовления или обработки теста Обработка муки или теста для выпечки, способы выпечки, мучные изделия

Криопротекторный раствор для замораживания лейкоцитов при низкой температуре

 
Международная патентная классификация:       A01N

Патент на изобретение №:      2290808

Автор:      Сведенцов Евгений Павлович (RU), Туманова Татьяна Витальевна (RU), Деветьярова Ольга Нурзадиновна (RU), Щеглова Оксана Олеговна (RU), Утемов Сергей Вячеславович (RU), Костяев Андрей Александрович (RU)

Патентообладатель:      Институт физиологии Коми научного центра Уральского отделения Российской академии наук (RU), ГУ Кировский НИИ гематологии и переливания крови МЗ РФ (RU)

Дата публикации:      20 Мая, 2006

Начало действия патента:      6 Декабря, 2004

Адрес для переписки:      167982, г.Сыктывкар, ул. Коммунистическая, 24, Коми НЦ УрО РАН, патентно-лицензионный отдел

Изобретение относится к области медицины, в частности к криобиологии. Раствор содержит гексаметиленбистетраоксиэтилмочевину, диметилсульфоксид, оксиметилэтилпиридина сукцинат и воду при определенном соотношении компонентов, замораживают лейкоциты при минус 70°С. Изобретение обеспечивает получение раствора для хранения физиологически полноценных клеток, сохранения их в физиологически активном состоянии после оттаивания. 3 табл.

Изобретение относится к криобиологии и медицине, а именно к созданию криопротекторного раствора для замораживания лейкоцитов, в частности, человека.

В качестве прототипа нами выбран криозащитный раствор для замораживания лейкоцитов [Патент 2184449 РФ. Криозащитный раствор для замораживания лейкоцитов при умереннонизкой температуре // Сведенцов Е.П. и соавт., 2001], включающий гексаметиленбистетраоксиэтилмочевину, фумарат натрия, лимонную кислоту и воду.

Существенным недостатком прототипа является то, что данный раствор не применяется для замораживания лейкоцитов при низкой температуре (-70°С), не содержит оптимального состава сильных криопротекторов ГМБТОЭМ и ДМСО (последний в прототипе отсутствует), которые стабилизируют внеклеточную, а также свободную и связанную внутриклеточную воду при охлаждении и переводят ее в аморфный лед, не разрушающий внутриклеточные органеллы и плазматическую мембрану, и устраняют его рекристаллизацию - образование крупных кристаллов (Белоус А.М., Грищенко В.И., 1994) при оттаивании, обеспечивая высокую сохранность и функционально активное состояние ядросодержащих клеток крови.

В криопротекторный раствор для замораживания лейкоцитов при низкой температуре, содержащий криопротекторы - гексаметиленбистетраоксиэтилмочевину (кратко ГМБТОЭМ) и диметилсульфоксид (кратко ДМСО) - впервые включено отечественное вещество - оксиметилэтилпиридина сукцинат (кратко ОМЭПС), обладающее, кроме антиоксидантного, мембраностабилизирующим действием, восстанавливающее нарушенные структуры и функции мембран клеток, а также тормозящее процессы перекисного окисления липидов, которые имеют место при криоконсервировании. Надо отметить, что сукцинат - производное янтарной кислоты (Несмеянов А.Н., Несмеянов Н.А. Начало органической химии. Книга 1. - М.: Химия, 1974. - с.314-315, с.436-437) - участвует в энергетическом обмене клетки, обеспечивающем ее жизнедеятельность, а пиридин в нуклеиновом обмене (Герман А.С. Пиридин. Большая медицинская энциклопедия. - М.; 1981. - Т.17. - с.1054-1055). Хладоограждающий раствор имеет оптимальный для лейкоцитарных клеток рН среды 7,0-7,4. Все ингредиенты, примененные в данном растворе, производятся в Российской Федерации.

Пример использования средства

Криопротекторный раствор, содержащий ГМБТОЭМ в концентрации 22%, ДМСО 8%, оксиметилэтилпиридина сукцинат 0,2%, воду для инъекций до 100 мл и имеющий рН 7,0-7,4, смешивают в отношении 1:1 с концентратом лейкоцитов в полимерном контейнере В«КомпопластВ». Смесь, выдержав 8 мин при комнатной температуре, охлаждают по экспоненциальной программе в электрическом морозильнике в 4-литровой ванне с этиловым 96° спиртом до -27°С в течение 19-20 минут. Затем замороженный лейкоконцентрат переносят в камеру электроморозильника, имеющую температуру -70°С. Термограмму записывают по термопаре, введенной в контейнер В«КомпопластВ» с криопротекторным раствором в конечной концентрации. Размораживание проводят в 20-литровой водяной ванне при температуре +38°С в течение 30-45 секунд при покачивании контейнера 3-4 раза в сек. Температура оттаянного лейкоконцентрата в контейнере должна быть в пределах +2-+4°С. Затем определяют морфологическую сохранность размороженных лейкоцитарных клеток, их жизнеспособность по витальному красителю (с 1% раствором эозина) и фагоцитарную активность нейтрофилов в пробе с латексом (по Потаповой С.Г. и соавт., Проблемы гематологии и переливания крови. - 1977. - № 9. - с.58-59). Расчет выражают в процентах в сравнении с аналогичными показателями клеток до замораживания.

Экспериментальные исследования выполнены на базе лабораторий криофизиологии крови Института физиологии Коми НЦ УрО РАН и консервирования крови и тканей ГУ Кировского НИИ гематологии и переливания крови.

Изучены три варианта криопротекторного раствора для лейкоконцентрата, различающихся по концентрации входящих в них ингредиентов. Состав вариантов раствора представлен в таблице 1.

Таблица 1Характеристика состава различных вариантов хладоограждающего раствора для замораживания лейкоцитов при низкой температуре, в расчете на 100 г сухого вещества (г).Номер варианта хладоограждающего раствораСостав хладоограждающего раствораГМБТОЭМ, в %ДМСО, в %ОМЭПС, в %Вода для инъекций, в мл. 124 60.30До 100 222 80.20До 100 320 100.10До 100

Конечная концентрация веществ, входящих в состав растворов N1, N2 и N3 после смешивания 1:1 с лейкоконцентратом, оказывалась в 2 раза ниже исходной (таблица 2), рН среды не изменялась, оставаясь в пределах 7,0-7,4.

Таблица 2.Конечная концентрация ингредиентов в различных вариантах хладоограждающего раствора после смешивания с лейкоцитным концентратом. Номер варианта хладоограждающего раствора Конечная концентрация ингредиентов в различных вариантах хладоограждающего раствора после смешивания с лейковзвесью ГМБТОЭМ, в %ДМСО, в % ОМЭПС, в %Вода для инъекций, в мл. 112 30.15До 200 211 40.10До 200 310 50.05До 200

Охлаждение производят по экспоненциальной программе: погружают пластикатный контейнер с лейкоконцентратом в 4-литровую спиртовую ванну, охлажденную до -70°С, через 19-20 минут контейнер с замороженным биообъектом извлекают из ванны и переносят в камеру электроморозильника с температурой -70°С для хранения. Контроль замораживания производят по термограмме, записываемой по датчику, находящемуся в контейнере с имитатором-раствором криоконсерванта с конечной концентрацией его ингредиентов. Размораживание осуществляют в 20-литровой водяной ванне при температуре +38°С в течение 30-45 сек, покачивая контейнер 3-4 раза в сек. Отогревают лейкоконцентрат до +2°С - +4°С. Исследования лейкоцитов производили на морфологическую сохранность и функциональную активность (табл.3).

Таблица 3.Результаты после замораживания до -70°С и оттаивания лейкоцитов с различными вариантами предложенного хладоограждающего раствора Вариант хладоограждающего раствора Жизнеспособность лейкоцитов Морфологическая сохранность, % Фагоцитарная активность нейтрофилов, % Верхний предел дозировок ингредиентов раствора 82,8±13,4155,0±7,21* n=6n=6 Оптимальное соотношение ингредиентов раствора94,5±6,89 75,5±8,50n=6 n=6Нижний предел дозировок ингредиентов раствора68,2±18,34 57,0±4,00* n=6n=6 * - различие достоверное (р<0,05)

Биологическую полноценность лейкоцитов, прежде всего нейтрофилов, определяет их фагоцитарная активность. Этот тест, наиболее надежно характеризующий физиологические свойства клеток, был лучшим после замораживания-отогрева при использовании хладоограждающего раствора с оптимальным соотношением его ингредиентов.

Готовый оптимальный раствор прозрачен, с легким желтоватым оттенком, без запаха, рН=7,0-7,4, хорошо смешивается во всех соотношениях с лейкоцитным концентратом, не вызывает конгломерацию клеток и обеспечивает функциональную и морфологическую сохранность при положительной температуре до замораживания. Раствор проявляет выраженное хладоограждающее свойство при охлаждении лейкоцитов по экспоненциальной программе с +20°С до -70°С.

Таким образом, разработанный криопротекторный раствор при замораживании лейкоконцентрата до -70°С обеспечил сохранность высокого процента физиологически активных лейкоцитарных клеток. Он может быть применен в учреждениях медицинского и биологического профиля, где имеется необходимое холодильное оборудование.

Формула изобретения

Криопротекторный раствор для замораживания лейкоцитов, содержащий гексаметиленбистетраоксиэтилмочевину, оксиметилэтилпиридина сукцинат и воду для инъекций, отличающийся тем, что замораживают лейкоциты до -70°С, а раствор дополнительно содержит диметилсульфоксид, при следующем соотношении ингредиентов, %:

Гексаметиленбистетраоксиэтилмочевина 20,0-24,0Диметилсульфоксид 6,0-10,0Оксиметилэтилпиридина сукцинат 0,3-0,1Вода для инъекцийдо 100 мл

MM4A - Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 07.12.2006

Извещение опубликовано: 27.08.2008        БИ: 24/2008





Популярные патенты:

2157612 Способ уборки корней растений, преимущественно лакрицы, и устройство для его осуществления

... колесами, размещенными на флюгерных вилках; штанга c распылителями жидкости соединена с прицепной емкостью посредством дистанционно управляемого вентиля; снабженная контрольным манометром прицепная емкость соединена пневмопроводом с рессивером и компрессором агрегатируемого трактора; рабочий орган для подкапывания корнесодержащего пласта выполнен в виде U-образного лемеха, рабочий орган для подъема корнесодержащего пласта выполнен в виде двухкаскадного элеватора; поперечный и наклонный транспортеры рабочего органа вторичной сепарации кинематически связаны посредством дополнительного редуктора и карданного телескопического вала с приводом рабочих органов первичной ...


2215407 Способ создания исходного материала для селекции растений

... уровень плоидности которых определяют по морфологическим признакам и прямым подсчетом хромосом, оценивают реплоиды по комплексу хозяйственно ценных признаков, выделяя формы, отличающиеся от растений с исходной плоидностью измененными или новыми качественными и количественными признаками. Сопоставительный анализ заявляемого технического решения с прототипом позволяет сделать вывод, что заявляемый способ отличается от известного наличием нового приема: выделением рекомбинированных полиплоидов из внутрисортовой популяции полиплоидов, полученных удвоением плоидности исходных сортов и выращиваемых в течение нескольких поколений, а также порядком выполнения известного приема "выделение ...


2272840 Способ молекулярного маркирования пола хмеля обыкновенного (humulus lupulus l)

... 139Hallertauer mittelfrueh Германия Местный сорт37 140Hersbrucker ГерманияМестный сорт 38 141Perle ГерманияNorthern Brewer × 63/5/27M (Hallertauer Mfr, Spalter, Saazer) 39142 Oswald cloneГермания -40 143Spalter В 1914 Германия- 41144 US Tettnanger 1США -42 145Saazer ЧехияМестный сорт 43 147Tettnanger ГерманияМестный сорт 44 149Liberty СШАHallertauer Mfr.(2n=4x=40) × 64035M(67% Hallertauer Mfr, 17% German hop, 16%. неизвестно) 45 150Taurus Германия82/39/37 × 85/54/15М 46 151Hersbruecker spat ГерманияМестный сорт 47 152Brewer's Gold АнглияВВ1 (дикорастущий хмель из Манитобы, Канада) × свободное опыление 48154 MagnumГермания ...


2446688 Композиция для получения растительного организма с улучшенным содержанием сахара и ее применение

... Agrobacterium, предпочтительно использовать бинарный вектор pBI. В частности, например, бинарным вектором pBI могут быть pBIG, pBIN 19, pBI101, pBI121, pBI221 или т.п. В векторе экспрессии промотор не ограничивается каким либо конкретным промотором, при условии, что в растительном организме он принимает участие в экспрессии гена, может быть использован соответствующий известный промотор. Промоторами могут быть, например, промотор вируса 35S мозаики цветной капусты (CaMV35S), промотор актина, промотор нопалин синтетазы, промотор гена PR1a табака, промотор гена малой субъединицы рибулозо-1,5-дифосфаткарбоксилазы/оксидазы томата и т.п. Из числа указанных промоторов предпочтительно ...


2007901 Устройство для хранения овощей и фруктов

... выход компаратора 19 соединен с входом резистора 28, первый вход и эмиттерный выход - подключены к первому выходу блока 13 питания, второй вход - к выходу резистора 17. Датчик температуры выполнен в виде терморезистора и подключен параллельно конденсатору 25. Электрическая схема блока 13 питания, представленная на фиг. 3, является примером выполнения данного блока, содержит соединенные указанным образом трансформатор 40, выпрямитель 41, два светодиода 42 и 43, реле 44, резисторы 45 и 46. Устройство для хранения овощей и фруктов работает следующим образом. При изменении температуры окружающей среды ниже заданной температура внутри шкафа 3 также изменяется. Изменяется ...


Еще из этого раздела:

2062564 Способ оценки устойчивости растений к засухе северного и южного типа на ранних этапах онтогенеза

2384065 Инсектоакарицидное средство

2415529 Нижняя тяга для навески трактора

2260932 Способ уборки льна и тресты при неблагоприятных погодных условиях

2208312 Способ измерения количества молока в потоке и устройство для его осуществления

2264065 Способ возделывания сельскохозяйственных культур на корм

2469534 Перезаряжаемая электронная ловушка для животных с перегородкой, механическим переключателем в конфигурации с множеством поражающих пластин

2473366 Вещество, обладающее антимикробным действием

2069949 Устройство для направленной передачи наследственной информации

2278509 Брудер для обогрева сельскохозяйственных животных