Лечение заражения пчелиного расплода - гнильца

Изобретение относится к пчеловодству. Предложена композиция для лечения или профилактики американского, европейского гнильцов и мучнистой чешуйчатости, состоящая из ослабленных или авирулентных бактерий и носителя. Также предложен способ лечения или профилактики указанных заболеваний путем введения в улей данной композиции. Инокулят, содержащий ослабленные или авирулентные микроорганизмы и применяемый в качестве активного вещества для лечения заболеваний пчел. Изобретение позволяет вести борьбу с болезнями пчел биологическим методом, снизить финансовые затраты, избегать использования антибиотиков. 1 табл.

Настоящее изобретение относится к способам и композициям, применяемым для лечения и профилактики заболеваний медоносных пчел. В частности, настоящее изобретение относится к способам и композициям, применяемым для биологической борьбы с микробиологическим заражением расплода медоносных пчел - гнильцом.

Предпосылки создания изобретения

Медоносные пчелы (род Apis), в частности европейская медоносная пчела (Apis mellifera) и восточная медоносная пчела (Apis cerana), в течение очень долгого времени использовались человеком для получения меда. A.mellifera и A.cerana накапливают большие количества легко доступного меда и могут быть введены в пчелиный рой с помощью передвижных контейнеров (или ульев). В связи с вышесказанным указанные виды пчел эксплуатировались по всему миру в течение сотен лет и в настоящее время на их основе создана крупная и сложная отрасль сельскохозяйственного производства. В контексте настоящего описания термин В«медоносная пчелаВ» (или просто пчела) относится к истинным медоносным пчелам из рода Apis, в частности к А. mellifera и A.cerana.

Развитие пчеловодства (сельскохозяйственного направления) осложнено тем, что пчелы подвержены множеству заболеваний. Указанные заболевания включают патологические процессы, вызываемые вирусами, бактериями, грибами, микроспорами, простейшими, паразитическими клещами, а также другими насекомыми и нематодами. При этом два бактериальных заболевания распространены повсеместно и вызывают всеобщую озабоченность как специалистов, занятых непосредственно в сельскохозяйственном производстве, так и тех, кто призван контролировать эту отрасль, а именно поражающие расплод американский гнилец (American foulbrood) и европейский гнилец (European foulbrood) (чаще обозначаемые в сокращенном виде как просто гнилец).

Американский гнилец (AFB, АГ) представляет собой заболевание, поражающее личинок, которое практически всегда уничтожает их на стадии предкуколки, при этом личинки приобретают бурую окраску, начинают загнивать и издавать характерный запах рыбьего клея. Указанное заболевание вызывает спорообразующая Грам-положительная бацилла Paenibaciilus larvae, подвид larvae. Споры этой бактерии могут находиться в течение десятилетий в состоянии покоя, загрязняя хранящееся пчеловодческое оборудование, но как только такое оборудование начинают вновь использовать или в нем появляются пчелы из инфицированных колоний, болезнь сразу начинает развиваться. Бациллы инфицируют рой пероральным путем и высвобождают в ходе споробразования стабильные протеолитические ферменты, вызывая гибель и в конечном итоге растворение личинки до коллоидного состояния клея.

Европейский гнилец (EFB, ЕГ) представляет собой заболевание, вызываемое не образующей спор Грам-положительной бактерией Melissococcus pluton. Указанная бактерия вызывает спорадические вспышки ЕЗР, которые приводят к гибели пчелиного расплода, не сопровождаясь при этом образованием клееподобного коллоидного материала.

В настоящее время имеется несколько методов лечения и АГ, и ЕГ, хотя каждый из них не свободен от недостатков. Возможно, самой эффективной, хотя и слишком радикальной, формой лечения является контролируемое поджигание пчелиной колонии и соответствующего оборудования, которое использовалось для их разведения. Однако такая разрушительная мера не может рассматриваться как предпочтительный способ борьбы по очевидным экономическим причинам, если только возникает возможность выбора.

Зачастую путем встряхивания пытаются отделить взрослых пчел от пораженных колоний с перенесением их в новые соты, но этот метод и ненадежный, и, кроме того, применим только в лабораторных условиях.

Другой метод обработки включает стерилизацию ульев и их содержимого с использованием для этого соответствующих стерилизующих химических веществ, таких как формалин, хлор и этиленоксид. Однако использование таких химических веществ может сделать и мед, и пыльцу в сотах токсичной для пчел или придать сотам ломкость. Кроме того, эффективность таких химических веществ с точки зрения лечения АГ и ЕГ не однозначна и колеблется в зависимости от обстоятельств.

Альтернативная форма лечения включает использование антибиотиков для обработки больных колоний. На бактерии, вызывающие АГ, можно воздействовать антибиотиком окситетрациклином, применяемым обычно в форме коммерческого препарата Террамицина. Однако в Великобритании в соответствии с приказом относительно мер в связи с болезнями пчел (1982 г.) предписывается применять сжигание в случае вспышки АГ. Такая политика, проводившаяся в течение десятилетий, сказалась на низком уровне встречаемости АЗР в Великобритании, тогда как в некоторых странах, например в США или Австралии, широкое распространение профилактической обработки тетрациклином имеет своим результатом субклиническое распространение болезни, что, в свою очередь, сопряжено с появлением зависимости от антибиотиков и возможностью возникновения тетрациклинустойчивого штамма Paenibacillus larvae subsp. larvae (что может вызывать катастрофическую гибель пчелиных колоний). Кроме того, антибиотики не действуют на споры, загрязняющие соты и оборудование, использование которых может вести к распространению инфекции между колониями и таким образом к повышению зависимости от их регулярного использования.

В Великобритании для борьбы с умеренными формами АГ применяют тетрациклин, тогда как в тяжелых случаях и при повторных инфекциях практикуют сжигание. Использование тетрациклина для профилактики или лечения острых случаев ЕГ нежелательно в связи с опасностью развития устойчивости и вероятностью того, что при подавлении ЕГ под его прикрытием может скрываться слабый уровень АГ и в этой связи возникает вероятность развития тетрациклиновой зависимости.

Другая большая проблема, возникающая при использовании тетрациклина для лечения АГ и ЕГ, связана с наличием нежелательных остатков тетрациклина в меде, а появление таких остатков имеет отношение к вопросам пользы для здоровья и ряду других моментов, которые ждут от меда его любители и поборники.

Таким образом, остается насущная потребность в разработке способа лечения болезней пчел в целом, и в случае американского и европейского гнильца, в том числе, с тем, чтобы избежать проблем, связанных с использованием тетрациклина и сопутствующих затрат, возникающих при сжигании.

Краткое описание сущности изобретения

В настоящее время известно, что некоторые микроорганизмы могут препятствовать развитию инфекции, вызываемой патогенами пчел, а также устранять установившиеся инфекции в зараженных колониях пчел. Указанные микроорганизмы могут продуцировать один или более антибиотик(ов) или могут конкурировать с патогеном(ами) пчел, таким образом препятствуя развитию инфекции или способствуя ее ликвидации. Некоторые такие микроорганизмы могут быть в естественном состоянии обнаружены в ульях и в пчелином меде.

Так, прежде всего было установлено, что болезни пчел могут легко, безопасно и эффективно контролироваться биологическим способом, что позволяет избежать проблем, связанных с использованием препаратов антибиотиков и дополнительных финансовых издержек, сопровождающих применение сжигания и соответствующее разрушение.

Таким образом, настоящее изобретение относится к композиции, применяемой для лечения или профилактики болезней пчел, при этом указанная композиция включает инокулят и соответствующий сельскохозяйственный носитель, применяемый в селькохозяйственной практике для доставки указанного инокулята в улей, так чтобы в нем установить микрофлору с лечебным и/или защитным действием.

Другим объектом настоящего изобретения является способ обработки для лечения или профилактики болезней пчел, включающий введение инокулята в улей, с тем чтобы создать в нем микрофлору с лечебным и/или защитным действием.

В контексте настоящего описания термин В«инокулятВ» используется в его обычном значении для обозначения препарата, содержащего микроорганизмы, способные установить, создать соответствующую микрофлору после инокулирования. Так, в контексте настоящего описания термин В«инокулятВ» включает один или более микроорганизм(ов), присутствующих в достаточном количестве и в таком метаболическом/физическом состоянии, что могут установить микрофлору после их введения в улей или в колонию пчел.

Используемый в контексте настоящего описания термин В«антибиотикВ» относится к любому веществу (например, к бактериоцину или вторичному метаболиту), способному ингибировать патогенную активность одного или более пчелиных патогенов (например, путем подавления их роста).

В контексте настоящего описания термин В«улейВ» применяется для обозначения любого из широкого множества контейнеров, используемых пчеловодами для содержания колоний медоносных пчел, ухода за ними и сбора продуцируемого ими меда. Так, указанный термин относится в контексте настоящего описания, среди прочего, к крышкам, ящикам, рамкам, сотам (представляющим собой обычно восковые матрицы, выложенные пчелами внутри рамок) или другим компонентам ульев, либо поодиночке, либо в совокупности).

Улей может содержать или не содержать пчелиную колонию. Так, например, в случае применения настоящего изобретения с профилактической целью можно вводить инокулят в пустой улей. В таких вариантах осуществления изобретения инокулят может находиться в состоянии покоя до того момента, как его разнесут, и до стимулирования его роста под действием роящихся пчел, так что в этом случае защитная микрофлора развивается под действием пчелиной колонии. В альтернативном варианте указанная микрофлора может (по меньшей мере, частично) развиваться и в отсутствие роящихся пчел за счет стимуляции роста инокулированных микроорганизмов внутри улья с помощью любой подходящей для этого методики (например, при введении подходящих питательных веществ и/или субстратов). Таким образом, микрофлора с лечебным и/или защитным действием может быть установлена при наличии или в отсутствие воздействия популяции роящихся пчел.

В рамках настоящего изобретения может использоваться любой приемлемый для сельскохозяйственного применения носитель, если он подходит с точки зрения доставки указанного инокулята в улей, так чтобы в нем в конечном счете могла быть установлена микрофлора с лечебным и/или защитным действием (при наличии или в отсутствие воздействия популяции роящихся пчел). Предпочтительно, указанный носитель представляет собой такой носитель, который работает в колонии пчелиного роя с учетом активности пчел по сбору меда и питанию, при этом инокулят будучи доставленным, как только подбирается пчелами (в случае привнесения его соответствующим доставляющим агентом), начинает разноситься в пределах улья и/или колонии с последующей секрецией (например, через подглоточные железы личинок в процессе их кормления), экскрецией или высвобождением.

Инокулят может доставляться в виде разовой дозы или в виде нескольких меньших доз, вводимых с некоторыми интервалами. В зависимости от используемого для доставки носителя указываемый инокулят может доставляться к любому компоненту улья (например, к незанятым сотам) или роевой грозди самих пчел (например, в случае отбора группы пчел ковшом и распыления их вместе с инокулятом за пределами улья с последующим возвращением в улей).

Размер инокулята, соответствующий режим дозирования и тип применяемого для доставки носителя могут варьировать в зависимости от таких факторов, как характер питания колонии пчел, природа микроорганизмов, которые должны быть доставлены, режим обработки (с профилактической или терапевтической/лечебной целью), возраст пчелиной колонии, размер и строение улья, географические, климатические и сезонные условия, а также природа заболевания, которое предстоит лечить или предупредить, и тяжесть инфекции. При этом специалисты со средним уровнем знаний в данной области могут без труда определить оптимальные параметры такой рутинной процедуры и предупредить возможные ошибки.

В пчеловодстве известно множество применяемых с целью доставки носителей, которые могут использоваться для кормления зимующих пчел и для введения известных антибиотиков. Предпочтительными в рамках настоящего изобретения являются так называемые пчелиные конфеты, сиропы, специальные жидкие формы для ветеринарного применения, присыпки или пасты.

В контексте настоящего описания термин В«пчелиная конфетаВ» используется для определения любого из множества твердых таблеток или брикетов, включающих в первую очередь твердый сахар. Особенно предпочтительными для использования в рамках настоящего изобретения являются сахарозные конфеты или конфеты из наполнителей, включающие смесь сахарозы и жира (например, растительного жира).

Сиропы, применяемые в рамках настоящего изобретения, предпочтительно включают сахар и воду. Особенно предпочтительными являются 50% (вес/объем) растворы сахарозы.

Присыпки предпочтительно включают порошкообразный сахар. Они могут вноситься в соты, а также в более общем случае наноситься на все внутренние поверхности улья или непосредственно на роевую гроздь пчел.

Паста, применяемая в рамках настоящего изобретения, может представлять собой заменитель пыльцы. Термин В«заменитель пыльцыВ» используется в данной области техники для обозначения любого средства из множества композиций, которые в функциональном и/или химическом отношении могут имитировать пыльцу (используемую пчелами как основной источник белка).

Сахар для использования в качестве носителя для доставки согласно настоящему изобретению представляет собой предпочтительно сахарозу, но может также использоваться любая другая композиция, которая функционально и/или химически способна имитировать нектар (используемый пчелами как основной источник небелковой пищи).

Используемый инокулят согласно настоящему изобретению включает один или более микроорганизм(ов). Указанный(ые) микроорганизм(ы) может(гут) препятствовать развитию инфекции, вызванной патогенами пчел, а также может(гут) способствовать ликвидации уже установившихся инфекций в колониях больных пчел (например, путем продуцирования одного или большего числа антибиотиков или посредством конкурирования с патогеном(ами) пчел и таким образом препятствуя их развитию или способствуя ликвидации инфекции). Некоторые из микроорганизмов могут встречаться в естественном виде в ульях и пчелином меде.

В том случае, когда микроорганизм(ы) продуцирует(ют) один или большее число антибиотиков, активный(ых) против одного или большего числа патогенов пчел, указанный(ые) антибиотик(и) предпочтительно проявляет(ют) активность против Melissococcus pluton и/или Paenibacillus larvae subsp. larvae. Предпочтительным(ыми) является(ются) антибиотик(и), активный(ые) и против Melissococcus pluton, и против Paenibacillus larvae subsp. larvae. Антибиотики могут оказывать бактериостатическое или бактериолитическое действие, и предпочтительно они проявляют бактериолитический эффект.

Особенно предпочтительными являются инокуляты, которые включают один или большее число микроорганизмов, которые продуцируют антибиотик(и) против Melissococcus pluton и против Paenibacillus larvae subsp. larvae, обнаруженные в клетках Paenibacillus larvae subsp. pulvifaciens, или их гомологи.

В контексте настоящего описания термин В«гомологВ» (применительно к антибиотику) определяет антибиотик, который функционально и/или химически близок к стандартному антибиотику, продуцируемому Paenibacillus larvae subsp. pulvifaciens, но при этом продуцируется другим организмом. Такие гомологи (и микроорганизмы, которые их продуцируют) могут быть идентифицированы с помощью структурного анализа стандартного(ых) антибиотика(ов) и/или при использовании программ скрининга, основанных на обнаружении активности против Melissococcus pluton и/или Paenibacillus larvae subsp. larvae.

Антибиотик(и), продуцируемый(ые) микроорганизмом(ами) с целью использования в рамках настоящего изобретения, может быть охарактеризован профилем активности, которая включает в том числе наличие активности против Escherichia coli, Salmonella typhimurium, Pseudomonas putida, Pseudomonas aerugenosa, Micrococcus luteus. Bacillus cereus, Bacillus subtilis, Paenibacillus alvei, Paenibacillus larvae subsp. larvae, Paenibacillus apiarius, Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus, Yersinia enterocolitica и Melissococcus pluton.

В предпочтительных вариантах реализации настоящего изобретения указанный(ые) микроорганизм(ы) включает(ют) бактерии. Особенно предпочтительными являются спорообразующие бактерии, продуцирующие эндоспоры, и в этом случае инокулят предпочтительно содержит бактериальные эндоспоры (необязательно в сочетании с вегетативными клетками).

В случае использования в составе инокулята бактериальные эндоспоры поставляются в виде промытых или концентрированных препаратов спор. Такие препараты могут быть получены с использованием любой методики из большого числа известных микробиологических процедур. Типичные способы включают выращивание вегетативных клеток до стационарной фазы (для индукции спорообразования) в жидкой среде и затем отделение их центрифугированием от отработанной среды. Такие варианты используют в качестве основы метода высокую устойчивость бактериальных эндоспор, что позволяет получать чрезвычайно стабильные композиции, недорогие в производстве и не создающие проблем при хранении.

Бактериальный инокулят предпочтительно включает виды или подвиды Paenibacillus (как описано в работе Heyndrickx et alia (1996), Int. J. Syst. Bacteriol. 46(4), 988-1003.

К особенно предпочтительным относится подвид Paenibacillus larvae, например, Paenibacillus larvae subsp. pulvifaciens или ослабленный, или невирулентный штамм Paenibacillus larvae subsp. larvae. Другие приемлемые бактерии могут быть определены при сканировании естественных изолятов из числа неклассифицированных изолятов видов Paenibacillus, которые демонстрируют нужную антибиотическую активность (но не являются патогенными).

Paenibaciltus larvae subsp. pulvifaciens продуцирует антибиотики, активные против патогенных Paenibacillus larvae subsp. larvae, Paenibacillus alvei, а также против Melissococcus pluton, и таким образом этот подвид (или его производные) может использоваться как основа для создания композиций, предназначенных для профилактики и/или лечения как американского, так и европейского гнильца.

Ослабленные или невирулентные штаммы Paenibacillus larvae subsp. larvae продуцируют антибиотики, активные против Melissococcus pluton, а также против Paenibacillus alvei, и в этой связи такие штаммы (и их производные) могут использоваться как основа для создания композиций, предназначенных для профилактики и/или лечения в том числе европейского гнильца и заболеваний, опосредованных инфекцией P.alvei.

В альтернативном варианте с использованием методов генной инженерии могут быть созданы другие микроорганизмы (в особенности бактерии), с тем чтобы функционировать в качестве клеток-хозяев для экспрессии антибиотика(ов), как определено выше.

Бактерии, используемые согласно настоящему изобретению, могут содержать одну или большее число мутаций, которые меняют вирулентность и/или способность к образованию антибиотиков и/или приводят к появлению ослабленного или невирулентного штамма. Такой вариант особенно предпочтителен в том случае реализации изобретения, когда инокулят представляет собой Paenibacillus larvae subsp. pulvifaciens, поскольку некоторые штаммы этой бактерии вызывают умеренное по тяжести заболевание, известное под названием мучнистая чешуйчатость.

Ослабленные или невирулентные штаммы могут быть легко получены при повторном субкультивировании в лабораторных условиях, при использовании методик мутагенеза/скрининга или при проведении направленного мутагенеза детерминант вирулентности.

Заболевание пчел, которое может быть излечено или предупреждено в соответствии с настоящим изобретением, в типичном случае представляет собой заболевание, связанное с бактериальной инфекцией (например, заболевание, вызванное Paenibacillus larvae subsp. larvae, Paenibacillus larvae subsp. pulvifaciens, Paenibacillus alvei или Melissococcus pluton).

В особенно предпочтительных вариантах изобретения заболевание пчел представляет собой гнилец (например, американский или европейский гнилец). Альтернативно или, кроме того, указанное заболевание может представлять собой мучнистую чешуйчатость.

Другим объектом настоящего изобретения является ослабленный или невирулентный штамм Paenibacillus (например, Paenibacillus larvae). Особенно предпочтительными являются ослабленные или невирулентные штаммы Paenibacillus larvae subsp. pulvifaciens, Paenibacillus larvae subsp. larvae или Paenibacillus alvei.

Ослабленные или невирулентные штаммы согласно настоящему изобретению, указанные выше, могут использоваться для лечения или профилактики инфекции пчел. В частности, обнаружено, что указанные штаммы могут применяться в виде инокулята с использованием композиции и методов согласно настоящему изобретению, определенных выше.

Еще одним объектом настоящего изобретения является использование инокулята при производстве лекарственного средства, предназначенного для лечения или профилактики инфекции пчел. В указанном аспекте настоящего изобретения лекарственное средство представляет собой предпочтительно композицию согласно настоящему изобретению (определенную выше).

Настоящее изобретение относится также к антибиотику(ам), выделенному(ым) из указанных выше микроорганизмов, и к использованию такого антибиотика(ов) при лечении или с целью профилактики указанных выше заболеваний пчел. Такие антибиотические препараты могут вводиться тем же самым способом, что и применявшиеся ранее антибиотики (также указанные выше).

Далее настоящее изобретение описывается со ссылкой на приведенные ниже в качестве иллюстрации неограничивающие примеры его реализации.

Пример 1

Чувствительность к антибиотику из Р.larvae (зоны очищения)

Проводят биологические тесты для выявления антибиотического действия Paenibacillus larvae var. pulvifaciens в отношении большого числа микроорганизмов. Указанные тесты осуществляют в соответствии со стандартной методикой в чашках Петри, содержащих ростовую среду, в которую инокулируют тест-микроорганизм. Диск, содержащий Paenibacillus larvae subsp. pulvifaciens (PLP), помещают в центр чашки Петри и оценивают рост микроорганизма. Относительные размеры зон очищения, образованных вокруг дисков, указаны ниже в таблице.

Из результатов, приведенных в таблице, видно, что Paenibacillus larvae var. pulvifaciens эффективен в отношении уничтожения патогенного штамма Paenibacillus larvae var. larvae (PLL), принимающего участие в развитии американского гнильца (АГ), а также Paenibacillus alvei, который также обнаруживается в ульях, инфицированных гнильцом. Кроме того, приведенные результаты демонстрируют наличие антибиотической активности против других бактерий, при этом активность против Грам-положительных бактерий выше, чем активность против Грам-отрицательных бактерий.

Были исследованы три штамма PLP, каждый из которых, как было показано, уничтожает широкий перечень PLL штаммов, происходящих из таких различных географических зон, как Великобритания, Словения, Австралия и Новая Зеландия. При этом ни один из PLL не воздействует на PLP.

Все три штамма Paenibacilli, определяющие патогенность для пчел, продуцируют антибиотики, которые до некоторой степени объясняют их воздействие на пчел. Так, материал, инфицированный АГ, обычно присутствует в виде монокультуры. В случае ЕГ - M.pluton представляет собой основной организм, присутствующий в крупных сгустках клеток во внутренностях пчелиного расплода. После гибели расплода создающиеся условия способствуют, по-видимому, развитию P.alvei, и эти организмы становятся преобладающими, подавляя M.pluton до такой степени, что он с трудом может быть обнаружен в мертвом расплоде, даже несмотря на то, что он был доминирующей и уже разросшейся культурой на ранней стадии заболевания. В том, что касается антибиотиков, проведенные тесты показывают, что P.alvei уничтожает широкий перечень бактерий, включая M.pluton, но за исключением Р.larvae (как PLP, так и PLL). PLL уничтожает Р. alvei, M.pluton и целое множество других штаммов, но не воздействует на PLP. PLP уничтожает все (в контексте пчеловодства), хотя все три штамма, дрожжей (S.cerevisiae) и Micrococcus luteus демонстрируют относительную устойчивость к нему.

Пример 2

Конкурентные эксперименты

Для получения дополнительной информации относительно механизма, уничтожающего воздействия PLP на PLL, были проведены конкурентные эксперименты при инокулировании в богатую среду PLP и PLL рядом друг с другом. Было показано, что оба штамма растут в виде бляшек и через несколько дней PLL начинает отступать на стороне, ближайшей к PLP. Еще через несколько дней на стороне, ближайшей к PLP, остается лишь слабое кольцо растущей культуры. Наблюдение за клетками под микроскопом со стороны отступления ее роста выявило наличие В«теней клетокВ», протопластов и иных поврежденных клеток; при этом образцы из лизированной части PLL бляшек показали наличие в них осколков клеток. Таким образом, проведенные эксперименты показали, что антибиотик, образуемый PLP, оказывает, скорее всего, целлюлолитическое, но не бактериостатическое действие.

Пример 3

Механизм уничтожающего воздействия PLP на PLL и другие патогенные штаммы Paenibacilli

Авторами изобретения было обнаружено, что эффект PLP на PLL (бактерии, вызывающие американский гнилец) имеет отношение к бактериоцину, который начинает действовать на ранней фазе роста и продолжает свое воздействие в течение всего цикла. Бактериоцин является специфичным средством против PLL бактериолитического действия. Широкий спектр бактерий, приведенных в таблице, не чувствителен к бактериоцину, хотя некоторые виды, такие как B.subtilis, по всей видимости, такой чувствительностью обладают. Авторы охарактеризовали бактериоцин как термочувствительный (температура 100°С в течение 2 минут разрушает его) и чувствительный к протеиназе к антибиотик.

В начале спорообразования появляется широкий спектр антибактериальной активности. Указанная активность характеризуется термоустойчивостью в описанных выше условиях. Не сковывая себя рамками конкретной теории, следует отметить, что такая активность вызывается антибиотическим(ими) соединением(ями). Экстракт антибиотика после теплового воздействия не ингибирует PLL, так что можно полагать, что только лишь бактериоцин ответственен за такую ингибирующую активность, обнаруживаемую в смесях.

Пример 4

Композиция А

Апикультуральная композиция

Получают жидкую композицию при диспергировании инокулята PLP спор в сахарном сиропе, содержащем 50% сахарозы в воде. Указанную композицию используют как пищевую добавку для пчел, которая может быть размещена в улье или рядом с ним.

Композиция Б

Композиция в виде пчелиной конфеты

Получают твердую таблетку или брикет (известные в пчеловодстве как пчелиная конфета) при прессовании сахара, в котором распределен инокулят PLP.

Композиция В

Композиция присыпки

Композицию присыпки получают при размалывании сахара до тонкоизмельченного порошка и далее смешивают его с порошком инокулята PLP. Присыпка может использоваться для нанесения на соты внутри улья или может быть внесена непосредственно в роевую гроздь пчел.

Композиция Г

Распыляемая композиция

Жидкую распыляемую композицию получают при диспергировании инокулята PLP в воде. Указанная композиция может быть использована для распыления во внутренней поверхности улья или на соты, или может быть использована для распыления непосредственно на роевую гроздь пчел.

Приведенные выше примеры даны исключительно с целью иллюстрации и никоим образом не должны рассматриваться как ограничивающие в чем-либо настоящее изобретение.

Формула изобретения

1. Композиция для лечения или профилактики заболевания пчел, такого как американский или европейский гнилец или мучнистая чешуйчатость, отличающаяся тем, что указанная композиция включает:

(а) инокулят, содержащий один или несколько микроорганизмов, представляющих собой бактерии, такие как Paenibacillus larvae subsp. pulvifaciens или ослабленный или авирулентный Paenibacillus larvae subsp. larvae или Р. alvei;

(б) применяемый в пчеловодстве носитель - средство для доставки инокулята в улей так, чтобы в улье устанавливалась микрофлора с лечебным и/или защитным действием.

2. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что применяемый в пчеловодстве носитель для доставки выбирают из следующего перечня:

(а) пчелиная конфета;

(б) сироп;

(в) жидкий ветеринарный препарат;

(г) присыпка;

(д) паста.

3. Композиция по п.2 (а), отличающаяся тем, что указанная пчелиная конфета представляет собой:

(а) сахарную конфету или

(б) конфету, включающую сахар и жировой наполнитель.

4. Композиция по п.2 (б), отличающаяся тем, что указанный сироп включает сахар и воду.

5. Композиция по п.2 (г), отличающаяся тем, что указанная присыпка включает сахар.

6. Композиция по п.2 (д), отличающаяся тем, что указанная паста представляет собой заменитель пыльцы.

7. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что улей содержит колонию пчел.

8. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что один или несколько микроорганизмов Paenibacillus larvae subsp. pulvifaciens, или ослабленный или авирулентный Paenibacillus larvae subsp. larvae, или Р. alvei продуцируют один или несколько соответствующих антибиотиков, активных против одного или нескольких патогенов пчел, которые вызывают американский или европейский гнилец или мучнистую чешуйчатость.

9. Композиция по п.8, отличающаяся тем, что указанный(ые) антибиотик(и) проявляет(ют) активность против Melissococcus pluton и/или Paenibacillus larvae subsp. larvae.

10. Композиция по п.8, отличающаяся тем, что указанный(ые) антибиотик(и) представляет(ют) собой бактериолитический(ие) антибиотик(и).

11. Композиция по п.8, отличающаяся тем, что указанный(ые) антибиотик(и) представляет(ют) собой антибиотик(и), активный(ые) против Melissococcus pluton и/или Paenibacillus larvae subsp. larvae, найденный(ые) в Paenibacillus larvae subsp. pulvifaciens, или их гомологи.

12. Композиция п.8, отличающаяся тем, что указанный(ые) антибиотик(и) проявляет(ют) активность против Escherichia coli, Salmonella typhimurium, Pseudomonas putida, Pseudomonas aeruginosa, Micrococcus luteus, Bacillus cereus, Bacillus subtilis, Paenibacillus alvei, Paenibacillus larvae subsp, larvae, Paenibacillus apiarius, Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus, Yersinia enterocolitica и Melissococcus pluton.

13. Композиция п.1, отличающаяся тем, что указанные бактерии включают бактериальные эндоспоры.

14. Композиция по п.13, отличающаяся тем, что указанные бактериальные эндоспоры представляют собой промытые и/или концентрированные эндоспоры.

15. Композиция п.1, отличающаяся тем, что указанные бактерии получают с помощью методов генной инженерии для экспрессии антибиотика(ов), определенного(ых) в п.11.

16. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что указанные бактерии

(а) содержат одну или большее число мутаций, которые меняют вирулентность и/или способность к образованию антибиотиков, или

(б) включают ослабленный или невирулентный штамм.

17. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что американский или европейский гнилец или мучнистая чешуйчатость вызывается Paenibacillus larvae subsp. larvae, Paenibacillus alvei или Melissococcus pluton.

18. Способ лечения или профилактики американского или европейского гнильца или мучнистой чешуйчатости пчел, включающий инокулирование улья композицией, определенной в п.1, для установления микрофлоры с лечебным и/или защитным действием.

19. Инокулят, содержащий один или несколько микроорганизмов Paenibacillus larvae subsp. pulvifaciens, или ослабленный или авирулентный Paenibacillus larvae subsp. larvae, или Paenibacillus alvei и применяемый в качестве активного ингредиента лекарственного средства для лечения и/или профилактики американского или европейского гнильца или мучнистой чешуйчатости у пчел, где лекарственное средство представляет композицию по п.1.

MM4A - Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 27.11.2007

Извещение опубликовано: 27.07.2010        БИ: 21/2010